硅珠法提取生物检材DNA的影响因素

在酚-氯仿有机法、Chelex-100法、磁珠法及硅珠法几种DNA提取方法中,硅珠法在脱落细胞等微量生物检材以及骨骼、牙齿等疑难生物检材中的成功应用得到了很多学者的认可[1-3]。随着硅珠法的不断推广应用,有学者对传统的硅珠法进行了改良以提高其提取模板DNA的灵敏度[4],也有人通过实验证实加大检材量能够提高硅珠法在脱落细胞DNA中的提取浓度[5]。

硅珠法在纯化污染检材中的应用

目的改进硅珠法在纯化污染DNA样本中的应用方法。方法对硅珠法中的具体步骤进行改进,直接纯化、浓缩Chelex法获得的不纯DNA,采用IdentifilerTM试剂盒进行复合扩增,产物经ABI3100测序仪分型检测。结果纯化后的DNA获得了满意的DNA分型。结论硅珠法能够有效地去除DNA样本中的污染物,直接用于纯化Chelex-100法提取的DNA。

微米级大孔径多孔硅珠的研制

采用尿素和甲醛在硅溶胶混溶下聚合形成新相聚合微球，烧掉有机物制成多孔硅珠。研究了对硅珠大小和均匀性的影响因素。主要影响因素是醛脲比、试剂的纯度特别是硅溶胶的纯化、ｐＨ值、温度、反应时间及搅拌情况。提出硅珠位径在５一１０μｍ、孔在在３０一１００ｎｍ之间或大于以上硅珠规格的制备工艺。这种硅珠可作为生物高分子及合成高分子的分离、分析的ＨＰＬＣ方法的载体。

运用Identifiler试剂盒对硅珠法提取石蜡包埋组织DNA质量的评估

目的:运用硅珠法从石蜡包埋的组织中提出DNA,Identifiler试剂盒评估DNA质量。方法:南京医科大学第一附属医院病理科2009～2011年石蜡包块49例,运用硅珠法提取石蜡包埋组织DNA,通过紫外分光光度计测定DNA纯度和Identifiler试剂盒PCR后3130型毛细管电泳仪分析提取DNA片段的完整性。结果:经紫外分光光度计测定胃癌组织D(260 nm)/D(280nm)均值为1.84±0.02,肺癌组织为1.85±0.02,甲状腺癌组织为1.82±0.02,3组间比较P>0.05,因此硅珠法提取石蜡包埋组织DNA不会因组织差异而影响提取效果;Identifiler试剂盒PCR后毛细管电泳显示其提取效果,46例(93%)得出完整的16个基因座STR峰型。结论:硅珠法可应用于多种组织的DNA提取,并保证提取DNA样品的纯度和完整度。

PrepFiler Express BTA^(TM)裂解液联合硅珠法快速提取骨骼DNA

目的建立方便、快捷的提取骨骼DNA的方法。方法对15份长骨样本清洗消毒后,采用电钻钻取骨屑,使用PrepFiler Express BTA^(TM)裂解液进行裂解消化后,应用手工硅珠吸附纯化进行DNA提取检验。结果有14份样本获得满意的STR分型,仅1份样本未获得STR分型,检出率为93.33%。结论本研究建立的骨骼DNA快速提取方法操作简单、便捷、有效,适应性强,值得推广应用。

硅珠法提取DNA的灵敏度及抗抑制能力探究

硅珠法提取DNA具有灵敏度高、提取产物纯净等优点,在法医领域有广泛应用。采用实验室模拟的方法,以007标准DNA以及抗凝冻存血液为样品,对硅珠法的提取灵敏度进行了系统测试,并选取7种常见抑制物,包括灰尘、铁锈、油脂等,对硅珠法的抗抑制能力进行了探究。结果显示,硅珠法与磁珠法相比,在提取灵敏度上并无明显差异,当DNA达到300pg时,出位点率皆为95%以上,当千倍稀释血量达到10ul时,出位点率皆为86%以上。在抗抑制能力测试中,硅珠提取法对所选取的7种抑制物都有良好的抗性,当抑制物的量加倍时,仍可获得足够的STR位点。结果表明,硅珠法具有良好的灵敏度及抗抑制能力,可广泛适用于各种法医检材。

微米级大孔径多孔硅珠的研制Ⅱ．由大粒度硅溶胶直接制备大孔径硅珠

商品硅溶胶中ＳｉＯ２粒子大小约８ｕｍ，相当比表面积３２０ｍ２／ｇ。在ｐＨｇ—１０，长时间的高温状态下．硅溶胶中ＳｉＯ２粒子长大。例如在１８５℃，ＰＨ＝１０．５，１２０ｈ条件下，硅溶胶中ＳｉＯ２粒子长大到３０ｕｍ左右．尿素和甲醛在这种大粒子硅溶胶温溶下，控制反应条件可聚合形成新相聚合物微球，烧掉有机物即可形成３２ｕｍ的大孔径多孔硅珠。多孔硅珠的孔径取决于硅溶胶的粒子尺寸．控制硅溶胶的粒子大小和影响微球大小的聚合反应等条件，研制出制备孔径３０—１００ｕｍ，粒子大小５－１０μｍ的多孔硅珠的新工艺．

改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑精子DNA

目的采用改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑中精子DNA,并评价其应用价值。方法收集52例经常规差异裂解法检验含有女性分型的混合斑检材,采用改良差异裂解法结合硅珠法提取精子细胞DNA,IdentifilerTM试剂盒进行PCR扩增检验。并将常规差异裂解法结果作为对照。结果 52例混合斑检材中,采用改良差异裂解法结合硅珠法检出单一男性精子成分有38例,男性分型检出率达到98.08%。结论改良差异裂解法结合硅珠法适合提取混合斑中精子DNA。

注射亲水性硅珠对棉铃虫血浆酚氧化酶活性的影响

昆虫通过细胞免疫和体液免疫的协同作用对入侵的异物做出防御反应。在不同时间向棉铃虫体内注射亲水性硅珠后 ,测定了血浆中酚氧化酶 (PO)的活性 ,同时研究了不同抑制剂和激活剂对注射硅珠后的酚氧化酶活性的影响。结果表明 ,注射亲水性硅珠后 ,棉铃虫血浆中酚氧化酶的活性明显升高。分别以牛胰蛋白酶和昆布多糖作为酚氧化酶原 (proPO)的激活剂 ,发现两者都可激活注射硅珠后血浆中的proPO。以牛胰蛋白酶激活时 ,随着注射硅珠后时间的延长 ,PO活性逐渐增高 ;而用昆布多糖激活后PO活性也明显升高 ,但注射硅珠后不同时间proPO被昆布多糖激活的情况基本相似。这些结果表明 ,在异物入侵后酚氧化酶原有很大程度的积累 ,并能被激活 ,协同细胞免疫抵御异物入侵。p NPGB和PTU几乎能完全抑制酚氧化酶的活性。

二步擦拭转移联合硅珠法提取高度污染检材DNA 2例

1案例 1.1简要案情 案例1：某日凌晨2：00左右,在某虜道汽车西站路段发现一名老年妇女因头颈部严重碾压伤死亡,民警通过视频监控摸排,找到两辆肇事嫌疑车辆.经仔细观察发现,在其中一辆厢式货车右后轮内侧有一处污泥混杂的疑似人体血迹.

光伏压延玻璃硅珠结石产生机理与分析

利用岩相分析、电子探针和光学显微镜,对光伏压延玻璃生产线产生的玻璃硅珠结石缺陷进行分析,鉴别出硅珠类结石为单质硅结石,来源于玻璃液中二氧化硅与杂质铝反应生成,同时伴随气泡产生,并对玻璃硅珠结石缺陷问题提出了有效的解决方法,为全氧燃烧窑炉压延玻璃生产提供了技术参考。

硅珠法提取微量检材DNA质量的研究

目的:运用Goldeneye 20A试剂盒评估硅珠法提取微量检材DNA的质量。方法:运用硅珠法对40名健康志愿者提供的血液、口香糖、烟蒂、指甲、牙刷样本提取DNA,Goldeneye 20A试剂盒扩增后分析提取DNA的质量。结果:与志愿者提供的血样比对,其他微量样本经硅珠法提取后获得的DNA,在检材适应性方面采集成功率(92.50%)最低的牙刷样本经检验与血液样本扩增成功率相比差异无统计学意义(P=0.241);1μL血液样本即使稀释至50倍以内再采用硅珠法提取DNA,也可以获得足够的DNA用于短串联重复序列(short tandem repeat, STR)分型,与9947A标准品阳性对照基因座(20个)和等位基因数(40个)比较分型结果正确;4种微量检材经硅珠法提取的DNA扩增电泳后,20个基因座图谱峰值均可超过200 RUF,且重复检验图谱峰值水平相当,分型结果同血液样本一致。硅珠法提取DNA能满足片段多态性分析的需求,并且均获得较好的STR分型图。结论:硅珠法可以运用于多种微量检材的DNA提取,有较广泛的适应性,能获得满足于STR检测要求的DNA。

泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响

目的研究泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。方法泥浆悬液和稀释血混合,制成混有灰尘、泥土的生物样本以模拟现场生物物证,分别用加热裂解和胍盐化学裂解的方式进行细胞裂解,硅珠法提取DNA后用Identifiler Plus试剂盒进行PCR扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较;用泥浆悬液代替硅珠提取稀释血DNA,反向验证泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。结果混有泥浆悬液的4μL、20μL稀释血加热裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1969.7±376.9 RFU、9706.7±349.8 RFU;混有泥浆悬液的4μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后无法获得完整STR分型;混有泥浆悬液的20μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1899.8±801.3 RFU;泥浆悬液代替硅珠提取20μL稀释血得到完整STR分型。结论泥土中的二氧化硅在胍盐存在条件下会与DNA结合,导致硅珠法提取现场生物物证DNA的回收效率降低。

改良硅珠法提取DNA的灵敏性及稳定性评价初探

目的 通过比较对改良硅珠法提取DNA的灵敏性和稳定性进行评价.方法 样本模板使用9947A（0.1 ng/μL）,以30pg为等差,配置10～700pg共24种不同浓度的DNA模板,分别采用常规硅珠法与改良硅珠法提取并纯化模板DNA,在GeneAmp PCR System 9700上进行PCR扩增,ABI 3500XL型荧光分析仪进行电泳检测.结果 与9947A标准品阳性对照比较,采用常规硅珠法检验,24份样本均未获得成功分型;采用改良硅珠法检验,当模板量达到550pg时,即可得到所有基因座的成功分型;模板量达到580pg及以上时,16个基因座图谱峰值均可超过200RFU,分型稳定准确.结论 改良硅珠法提取DNA易于操作,稳定性较好,灵敏度优于常规硅珠法,可在法医微量物证DNA检验中应用.

洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA

目的考察洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA的应用价值。方法收集200枚刑事案件中受害人指甲,采用洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA;用Identifiler试剂盒进行PCR扩增,3030xl遗传分析仪进行分型检测。结果应用洗涤法结合硅珠法在200枚指甲中有64枚(32%)检出异体DNA,其中52枚为混合型,12枚为单一异体DNA;另有104枚检出受害人单一DNA。结论洗涤法结合硅珠法可应用于指甲垢DNA的提取。