超表达硒代半胱氨酸甲基转移酶基因对烟草硒酸盐胁迫的生理效应

研究了硒酸钠(Na2SeO4)对转硒代半胱氨酸甲基转移酶(SMT)基因烟草和普通烟草生长以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响。结果表明,不同浓度硒处理转基因烟草的鲜重和株高均高于普通烟草,一定浓度范围内转基因烟草的GSH-Px活力受硒影响的程度低于普通烟草。方差分析表明,在20 mg·L-1硒处理下,转基因烟草和普通烟草的鲜重、株高差异显著,转基因烟草的鲜重和株高分别是普通烟草的1.96倍和1.80倍;在10 mg·L-1、20 mg·L-1硒处理下,普通烟草的GSH-Px活力均极显著地高于转基因烟草,前者GSH-Px活力分别是后者的1.65倍和2.48倍。显示SMT基因的转入改善了烟草对硒的耐受性。

茶树硒营养代谢关键酶硒半胱氨酸甲基转移酶基因克隆及启动子结构分析

为探明茶树硒营养代谢关键酶基因硒半胱氨酸甲基转移酶(SMT,GenBank登录号:DQ480337)的表达调控规律,通过PCR和基因步移技术获得SMT的DNA全长和部分启动子序列,用PLACE、PlantCARE分析SMT内含子和启动子的序列,预测其顺式作用元件及功能。结果表明,SMT基因全长5473 bp,有7个外显子和6个内含子,内含子富含光响应元件、激素响应元件和抗逆性相关元件。通过基因步移法克隆得到的SMT启动子长375 bp,除了含核心启动子保守元件TATA-box和CAAT-box外,还有其他重要顺式作用元件,如光响应元件、低温响应元件和胚乳表达特异性元件等。植物硒营养代谢关键酶SMT启动子的克隆及结构分析为进一步揭示SMT基因的生物学功能和表达调控机制奠定了理论基础。

茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建

采用能有效转化双子叶植物的表达载体pBI121构建植物硒营养代谢关键酶基因的表达载体,将原载体中GUS基因用茶树ATP硫化酶基因(APS1和APS2)替换,将硒半胱氨酸甲基转移酶基因(CsSMT)连接到pBI121载体上直接与GUS基因相连,分别构建了目的基因植物表达载体pBI-APS1、pBI-APS2和pBI-CsSMT。通过三亲杂交法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,获得转化工程菌,为通过植物基因工程获得富硒农产品打下基础。

毛薯硒代半胱氨酸甲基转移酶SMT基因的克隆与表达分析

硒代半胱氨酸甲基转移酶(SMT,Selenocysteine methyltransferase)是植物硒代谢的关键酶,在植物硒积累的过程中发挥着重要作用。为了探究毛薯中SMT基因的功能,本研究以优质富硒毛薯Ds148为研究对象,利用RT-PCR技术从中克隆到了毛薯SMT基因,命名为DsSMT。DsSMT(登录号:MH046782)包含1038 bp完整开放阅读框(ORF),预测编码345个氨基酸,理论分子量(Mw)为37.24 kD,等电点(pI)为5.01,编码的蛋白与其他植物的SMT蛋白同源性较高,具有较高的保守性。系统进化树分析显示,毛薯与海枣和菠萝的SMT蛋白的亲缘关系较近,聚为同一类。利用PSORTⅡ在线软件对DsSMT蛋白进行预测,结果表明其可能定位于细胞质中。实时荧光定量PCR分析显示,DsSMT基因在毛薯生长发育的各个时期的根、茎、叶、块茎以及块茎的皮组织中均有所表达,其中在毛薯的根和成熟期表达量最高。本研究从毛薯中克隆出了硒代谢相关酶DsSMT基因的cDNA序列,并对其进行了生物信息学分析;同时又对DsSMT基因在毛薯块茎形成的不同时期、不同组织中的表达情况进行相对定量的研究和分析,为深入研究DsSMT基因的调控机理提供分子依据,同时也为毛薯硒吸收、同化的分子机理研究奠定基础。

HPLC-ESI-MS法检测香菇中甲基硒代半胱氨酸 硒代蛋氨酸 硒代半胱氨酸含量

建立一种提取和测定香菇中甲基硒代半胱氨酸(methyl selenocysteine,MeSeCys)、硒代蛋氨酸(selenom-ethionine,SeMet)、硒代半胱氨酸(selenocysteine,Sec)含量的超高效液相色谱串联质谱方法。对比3种不同前处理方法对香菇样品中硒代氨基酸的提取效果,选Agilent ZORBAX SB-AQ型亲水色谱柱(柱长100 mm,内径3.0 mm,粒径1.8μm),1%甲酸水和甲醇流动相梯度洗脱,柱温35℃,流量0.2 mL/min。结果表明,3种提取方法中,酶解提取法提取效率最高,能较好地提取香菇中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代半胱氨酸,采用HPLC-MS检测3种氨基酸在质量浓度0.2~20.0 ng/mL呈现较好的线性关系,平均回收率分别为92.3%,93.0%,92.4%,相对标准偏差分别为2.71%,2.14%,1.83%。该方法简单、快速、准确,适用于香菇中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代半胱氨酸含量的测定。

亚甲基四氢叶酸还原酶基因及甲硫氨酸合成酶基因多态性与口服叶酸治疗高同型半胱氨酸血症疗效的关系研究

目的分析亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶基因(MTR)多态性与口服叶酸治疗高同型半胱氨酸血症(HHcy)疗效的关系及基因与环境在治疗效果中的交互作用。方法选取2014年6—9月于郑州大学第五附属医院神经内科检查血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平的住院HHcy患者515例为研究对象。常规治疗基础上给予口服叶酸(5 mg/d)治疗90 d。治疗中期(叶酸补充45 d)行第1次电话随访,治疗结束(叶酸补充90 d)行第2次电话随访,督促患者遵循医嘱服药,并在治疗结束后到医院复查血浆Hcy水平。按照复查血浆Hcy水平将患者分为失败组(Hcy≥15.0μmol/L)和成功组(Hcy<15.0μmol/L)。收集患者的基线资料,选取MTHFR上2个单核苷酸多态性(SNP)位点和MTR上1个SNP位点,分别为:rs1801133、rs1801131和rs1805087;采用Sequenom公司的时间飞行质谱生物芯片系统(Mass Array系统)检测基因分型和等位基因,采用多因素降维法(MDR)分析基因-环境交互作用。结果随访结束后,剔除服药依从性差或者失访患者131例,剔除两次服药依从性均一般的患者125例,剩余259例。其中失败组115例,成功组144例。失败组患者糖尿病病史发生率、高血压病史发生率、冠心病病史发生率、基线血浆Hcy水平均高于成功组(P<0.05)。成功组3个SNP位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(rs1801133:χ2=0.11,P=0.170;rs1801131:χ2=0.00,P=1.000;rs1805087:χ2=0.01,P=0.860)。单因素非条件Logistic回归分析结果显示,rs1801133位点的TT基因型、T等位基因,rs1801131位点的AC基因型、AC+CC基因型、C等位基因与叶酸治疗HHcy疗效有回归关系(P<0.05)。MDR软件结果显示,最优模型为高血压病史、冠心病病史和rs1801133的三因素交互模型(P<0.05)。结论 MTHFR rs1801133位点的TT基因型和等位基因T可增加叶酸治疗HHcy失败的风险;rs1801131位点的AC基因型、AC+CC基因型和等位基因C可降低叶酸治疗HHcy失败的风险。MTR rs1805087位点基因型及等位基因与叶酸治疗HHcy疗效无回归关系。高血压病史、冠心病病史、rs1801133位点对叶酸治疗HHcy的疗效具有交互作用。

硒-甲基硒代半胱氨酸对MCF-7细胞抗氧化及Survivin基因表达的影响

目的探讨硒-甲基硒代半胱氨酸(MSC)对乳腺癌MCF-7细胞抑制及其诱导凋亡的作用机制。方法采用不同浓度(12.5、25、50、100、200μmol/L)MSC作用于MCF-7细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定MSC对细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色法观察细胞凋亡形态;氮蓝四唑(NBT)显色法检测MSC对细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响;硫代巴比妥酸法(TBA)法检测MSC对细胞内丙二醛(MDA)水平的影响;RT-PCR法检测细胞Survivin基因的表达。结果 MSC对MCF-7细胞的增殖具有抑制作用,细胞存活率随其浓度的增加而逐渐降低;荧光染色可见,MSC干预组细胞变圆、胞核皱缩、染色质浓缩,与对照组比较差异有统计学意义;MSC降低MCF-7细胞内SOD的活性,升高细胞内MDA水平(P<0.01);同时,MSC能下调Survivin mRNA的表达(P<0.01)。结论 MSC可通过调节乳腺癌细胞内氧化还原状态及Survivin基因的表达抑制乳腺癌细胞的体外增值和诱导凋亡,MSC作为一种新型营养强化剂有望开发其预防和辅助乳腺癌治疗的新用途。

大鼠蛋白精氨酸甲基转移酶1短发夹RNA质粒体外RNA干扰及对Hcy、ADMA的影响

目的探讨蛋白精氨酸甲基转移酶1短发夹RNA质粒(pPRMT1-shRNA)在体外对大鼠主动脉内皮细胞PRMT1基因mRNA表达水平及同型半胱氨酸(Hcy)、非对称性二甲基精氨酸(ADMA)水平的影响。方法用pPRMT1-shRNA1、pPRMT1-shR-NA2阳性质粒、阴性对照pHK质粒转染大鼠主动脉内皮细胞,同时设立空白对照组。转染12h、24h后分别收集各组细胞及细胞培养液,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析各组PRMT1基因的mRNA表达情况,ELISA法检测各组细胞培养液中Hcy及AD-MA含量。结果空白对照组与阴性对照质粒组的PRMT1基因mRNA表达、Hcy、ADMA水平差异无统计学意义;PRMT1-shRNA两组与空白对照组、阴性对照质粒组比较PRMT1基因mRNA表达明显降低(P<0.01),且Hcy、ADMA水平明显下降(P<0.01);pPRMT1-shRNA1组比pPRMT1-shRNA2转染组、两组2 4h比1 2hPRMT1基因mRNA表达受抑更显著(P<0.05),Hcy、ADMA水平下降更明显(P<0.05)。结论随着PRMT1基因表达水平下降,Hcy、ADMA水平也随之降低。

卒中后认知障碍与亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性关系研究

目的:探索卒中后认知障碍(PSCI)与亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性的关系。方法:选取急性卒中患者200例,其中6个月内发生认知障碍的患者100例作为痴呆组,6个月内未发生认知障碍的患者100例作为未痴呆组,另选取同期体检结果呈健康的健康体检者200例为正常对照组。采集所有研究对象外周血检测MTHFR及5-甲基四氢叶酸高半胱氨酸甲基转移酶还原酶(MTRR)基因型多态性,全自动化学发光免疫分析仪检测血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平。结果:痴呆组患者血浆Hcy水平明显高于未痴呆组(P<0.05);未痴呆组患者血浆Hcy水平明显高于对照组(P<0.05);痴呆组A1298C位点基因型AA、AC和CC、C677T位点基因型TT、CT和CC和A66G位点基因型AA、AG和GG的分布频数与未痴呆组和对照组比较具有统计学差异(均P<0.05);既往卒中史(OR=1.721,P=0.040)、卒中部位(OR=1.828,P=0.047)和血浆Hcy水平(OR=1.839,P=0.042)为卒中后发生PSCI的独立影响因素。结论:MTHFR及MTRR基因多态性与卒中后认知障碍的易感性和临床特症存在相关性,可作为筛选标志物。

硒-甲基硒代半胱氨酸对乳腺癌细胞端粒酶活性和hTERT基因表达的影响

目的研究有机硒化合物硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenoey-stein,MSC)对人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞端粒酶活性的影响,探讨其诱导细胞凋亡的作用机制。方法不同浓度的MSC(12.5、25、50、100、200·mol/L)RPMI-1640培养液分别作用于人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞24h、48h,ELISA法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测细胞hTERT mRNA基因的表达;SPSS16.0进行数据录入及统计学分析。结果各MSC浓度处理组明显抑制端粒酶活性和hTERT mRNA的表达(P<0.01)。结论 MSC能够抑制人乳腺癌细胞的增殖并诱导凋亡,其发生机制可能与端粒酶活性、hTERTmRNA表达的降低有关。

过表达硒代半胱氨酸甲基转移酶烟草的硒耐受特性分析

以经鉴定的硒代半胱氨酸甲基转移酶(Selenocysteine methyltransferase,SMT)转基因烟草(Nicotiana tabacum L)和野生型烟草(NC89)为材料,置于添加不同质量浓度(0、20、40和60 mg/L)硒酸钠的MS培养基上进行培养,35 d后分别测定两种处理材料的过氧化物酶活性、叶绿素、鲜质量和株高等生理生化指标.结果表明:在不同质量浓度硒酸钠处理后,SMT转基因烟草和野生型烟草的叶绿素质量分数、鲜质量及株高均较各自对照明显下降,比较而言,野生型烟草的下降幅度明显大于转基因烟草;另一方面,野生型烟草过氧化物酶(Peroxidase,POD)活性表现强烈的应激反应,其活性明显高于转基因烟草.生长生理与表型特性表明SMT转基因烟草具有一定的硒耐受性.

植物硒代谢积累及相关酶的研究进展

阐述了植物硒代谢的基本途径及其积累的分子机制,详细介绍了几种参与硒代谢的关键性酶的分子生物学特性。并展望了有关植物硒代谢的发展趋势。

卡托普利对糖尿病大鼠肾脏甜菜碱-同型半胱氨酸甲基转移酶基因表达的影响及其意义

[目的]探讨卡托普利对糖尿病大鼠肾脏甜菜碱-同型半胱氨酸甲基转移酶基因表达的影响及其意义。[方法]建立糖尿病大鼠模型,分卡托普利干预组和对照组,15周后处死大鼠,从肾脏皮质抽提mRNA,逆转录,分别用Cy5和Cy3标记成两组cDNA探针。cDNA探针与基因芯片杂交,经扫描后,用软件分析。[结果]干预组甜菜碱-同型半胱氨酸甲基转移酶基因表达上调。[结论]卡托普利可能通过调节同型半胱氨酸代谢预防糖尿病肾病。

亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C〉T和5-甲基四氢叶酸高半胱氨酸甲基转移酶基因2756A〉G多态性与地方性砷中毒易感性的关系

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因SNP位点rs1801133（677C〉T）、5-甲基四氢叶酸高半胱氨酸甲基转移酶（MTR）基因SNP位点rs1805087（2756A〉G）多态性与地方性砷中毒易感性的关系。方法采用病例．对照研究方法，以内蒙古自治区地方性砷中毒病区140名出现砷性皮肤病变患者作为病例组，以同地区157名体检健康居民作为对照组，采集静脉血，乙二胺四乙酸二钠（EDTA）抗凝，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法（PCR-PFLP法），检测分析MTHFR677C〉T位点和MTR2756A〉G位点多态性。单因素Logistic回归分析年龄、性别、居住年限以及MTHFR677C〉T、MTR2756A〉G基因型对地方病砷中毒患病的影响。结果MTHFR677C〉T位点等位基因C出现频率在病例组和对照组分别为56.43％、52．55％，等位基因T出现频率分别为43．57％、47．45％，等位基因C、T出现频率两组比较差异无统计学意义（χ^2=0．90，P〉0．05）；MTR2756A〉G位点等位基因A出现频率在病例组和对照组分别为93．93％、95．54％，等位基因G出现频率分别为6．07％、4．46％，等位基因A、G出现频率两组比较差异无统计学意义（χ^2=0．84，P〉0．05）。MTHFR677C〉T位点CC基因型出现频率在病例组和对照组分别为22．86％、18．47％,CT基因型分别为67．14％、67．52％，TT基因型分别为10．00％、14．01％；将杂合型CT、突变型TT、杂合型CT和突变型TT合并与野生型CC比较差异无统计学意义（χ^2=0．56、0．81、0．87，P均〉0．05）。MTR2756A〉G位点AA基因型出现频率在病例组和对照组分别为87．86％、91．72％，AG基因型分别为12．14％、7．64％，GG基因型分别为0．00％、0．64％；将杂合型AG、突变型GG、杂合型AG和突变型GG合并与野生型AA比较差异无统计学意义（χ^2=1．65、1．35、1．22，P均〉0．05）。单因素Logistic回归分析显示，≥60岁组患地方性砷中毒的危险性是440岁组的2．78倍，居住年限≥40年患地方性砷中毒的危险性是居住年限〈40年的1．85倍。二者比较差异均有统计学意义[比值比（OR）=2．78，1．85，P〈0．01或〈0．05]；男性和女性患病率比较，差异无统计学意义（OR=1．56，P〉0．05）。MTHFR677C〉T杂合型CT、突变型TT分别与野生型CC患病率比较，差异无统计学意义（OR=1．53、1．63，P均〉0．05）；MTR2756A〉G杂合型AG、突变型GG分别与野生型AA患病率比较，差异无统计学意义（OR=1．04、1．20，P均〉0．05）。结论研究人群样本中MTHFR677C〉T位点和MTR2756A〉G位点多态性与地方性砷中毒的易感性不存在相关关系。

重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶的表达纯化和鉴定

目的对重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(recombinant human betaine-homocysteine S-methyltrans-ferase,rhBHMT)进行表达纯化和鉴定。方法采用基因重组技术在原核系统表达BHMT蛋白,镍螯合亲和层析和Sephacryl S200层析进行纯化。产物经SDS-PAGE、HPLC、N端氨基酸序列检测与活性验证。结果终产物rhBHMT纯度达97.9%。相对分子质量为45 000,N端氨基酸序列与理论序列一致。结论从工程菌中获得具有活性的高纯度rhBHMT,产物均一,工艺稳定,为中试放大提供可靠依据。

L-硒甲基硒代半胱氨酸对大鼠组织硒分布及GPx-1表达的影响

目的观察给予L-硒甲基硒代半胱氨酸(L-Se-methyl selenocysteine,MSCys)对大鼠体内组织硒分布及对谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase1,GPx-1)的影响。方法 60只成年大鼠雌雄各半分为空白对照组(Blank)、MSCys低剂量(10μg/kg·bw)和MSCys高剂量(25μg/kg·bw)共3组,灌胃给药。空白对照组给予等体积蒸馏水。连续给药30d(T30)后停止给药,半数大鼠安乐死后取肝、肾、肌肉组织。剩余大鼠继续饲养30d(S30),取肝肾肌肉组织。实验期间每10d采集大鼠毛发和血清。原子荧光光谱法测定血清、毛发、肝、肾和肌肉中总硒含量;ELISA法测定肝、肾和肌肉组织中的GPx-1的含量。结果实验期间,各组内雌雄大鼠各指标均差异显著(P<0.05),故雌雄大鼠均分别进行统计学分析。在给药3~4 w,高剂量MSCys组大鼠的每周体重增加量显著低于低剂量MSCys组和空白对照组(均P<0.05)。在整个实验期间各给药组的毛发和血硒含量均显著高于空白对照(Blank)组(均P<0.05),并且在多数时间点高剂量组大鼠的毛发和血硒含量均显著高于低剂量组(P<0.05)。给药30d(T30)和停药30d(S30)各剂量组大鼠肝、肾和肌肉硒含量均显著高于对照组(均P<0.05),并且在T30时,高剂量组大鼠肝、肾和肌肉硒含量均显著高于低剂量组(均P<0.05),肝和肌肉组织中的这种升高仍持续到S30(均P<0.05)。同样,在T30时各剂量组大鼠肝、肾GPx-1含量均显著高于对照组(均P<0.05),高剂量组肝脏GPx-1含量显著高于低剂量组(均P<0.05)。T30时各剂量组大鼠肝脏GPx-1含量仍显著高于对照组(均P<0.05),在雌性大鼠中高低剂量组差异显著(P<0.05)。同样高剂量组肾脏GPx-1含量显著高于低剂量组(P<0.05),并且二者均高于对照组。结论长期给大鼠灌胃L-硒甲基硒代半胱氨酸能够增加大鼠体内组织的硒含量,且能够促进机体多个组织GPx-1水平。[营养学报,2020,42(3):249-254]

大鼠总基因甲基化状态改变相关危险因素的研究

目的:探讨高胆固醇血症(Hypercholesterolemia,HTC)对wistar大鼠主动脉基因组DNA总甲基化水平及总甲基转移酶活力的影响并比较高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HHCY)和HTC在影响主动脉基因组DNA总甲基化水平、总甲基转移酶活力之间的差异。方法:将wistar大鼠33只,随机分3组:对照组、蛋氨酸组、高胆固醇组,每组11只。对照组给予普通大鼠饲料,其余各组给予相应的配方饲料。持续喂养3个月后心脏取血检测血清同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)等相关指标。提取主动脉基因组DNA检测基因组DNA总甲基化水平、提取主动脉核蛋白检测基因组DNA总甲基转移酶活力。结果:经多个样本均数间的多重比较(Dunnett-t检验):高胆固醇组大鼠的血清TC水平明显高于对照组和蛋氨酸组,且差异有统计学意义(P<0.05),血清中甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein-cholesterol,HDL-C),差异无统计学意义(P>0.05)。蛋氨酸组大鼠血清Hcy水平明显高于对照组及高胆固醇组,且差异有统计学意义(P<0.05)。HHCY和HTC均增加基因组DNA总甲基转移酶活力,可促使基因组DNA去甲基化,与对照组相比,各组均具有统计学意义(P<0.05),但两组之间差异无显著性。结论:HTC降低大鼠主动脉基因组DNA总甲基化水平可能是HTC导致动脉粥样硬化发病重要机制之一,且HHCY和HTC在影响基因组DNA低甲基化之间的差异无显著。

BHMT rs3733890基因多态性与叶酸治疗河南汉族HHcy患者效果的前瞻性队列研究

目的:探讨甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)rs3733890基因多态性与叶酸治疗高同型半胱氨酸血症(HHcy)效果的关联,并分析基因-环境交互作用对疗效的影响。方法:使用前瞻性队列研究,收集2014年7月至12月郑州大学第五附属医院收治的1071例HHcy患者,对其采血并检测血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平,随后进行90 d的口服叶酸(5 mg/d)干预治疗。治疗结束时复查血浆Hcy水平,根据复查结果将患者分入治疗成功组(Hcy≤15μmol/L)和治疗失败组(Hcy>15μmol/L)。通过MassArray平台对BHMT rs3733890进行基因分型。运用基于logistic回归的分层分析探究基因-环境的交互作用。结果:①rs3733890基因型在两组间的分布差异有统计学意义(P<0.05)。②携带突变基因型(GA+AA)和突变等位基因(A)的患者,叶酸治疗失败的风险明显升高(P<0.05)。③突变基因型与不良生活习惯(吸烟、饮酒)和既往史(糖尿病、高血压、冠心病)分别存在交互作用。结论:BHMT rs3733890基因多态性与叶酸干预治疗河南汉族HHcy的疗效存在关联,该位点与环境因素的交互作用会影响叶酸治疗效果。

印度芥菜BjSMT基因的克隆及抗硒分析

通过同源克隆技术首次克隆了硒富集模式植物印度芥菜的硒代谢关键酶(硒代半胱氨酸甲基转移酶)基因,命名为BjSMT。该基因全长1865bp,包含5个内含子序列和6个外显子序列,共编码346个氨基酸。系统发育树分析显示该基因与芸薹属甘蓝(Brassica oleracea L.)亲缘关系最近。qPCR分析发现,在低浓度硒处理下,BjSMT基因转录水平迅速提升后达到平稳,在12h达到峰值,约是对照的2.62倍。对转BjSMT烟草Na_2SeO_3胁迫研究发现,在0~240μmol/L不同Na_2SeO_3浓度胁迫下,BjSMT过表达烟草的长势明显优于转空载体烟草,在120μmol/L胁迫浓度下差异最大,株高、鲜重、谷胱甘肽过氧化物酶活性等差异最显著。表明,BjSMT可迅速增强表达响应环境硒胁迫,在植物中过表达BjSMT可显著提高其耐硒能力,为更深入研究印度芥菜富硒机理及转基因应用奠定了基础。

MTR基因Rs1805087多态性与非综合征性唇腭裂的相关性研究

目的研究5-甲基四氢叶酸-高半胱氨酸甲基转移酶(5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase,MTR)SNPs位点Rs1805087多态性与非综合征性唇腭裂的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,检测174例非综合征性唇腭裂患者和169例正常对照组的MTR基因Rs1805087的多态性。结果 MTR基因Rs1805087位点基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡;MTR基因Rs1805087位点基因型及等位基因的分布在NSCL/P组与对照组之间均无统计学意义(P>0.05)。结论结果未显示MTR基因Rs1805087多态性与非综合征性唇腭裂的发生有关。