高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法测定富硒大豆中硒代氨基酸的含量

取0.1 g脱脂后富硒大豆样品于离心管中,用5 mL pH 7.5的130 mmol·L^(-1)三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液超声振荡30 min,用15 mg链霉蛋白酶于37℃振荡酶解5 h,离心后取上清液,过0.22μm尼龙有机滤膜。滤液中的硒代半胱氨酸(SeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)在Agela MP-C_(18)色谱柱上分离,以含2%(体积分数)甲醇和0.5 mmol·L^(-1)四丁基溴化铵的40 mmol·L^(-1)磷酸氢二铵溶液(pH 7.0)进行等度洗脱,并采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定3种硒代氨基酸的含量。结果表明,3种硒代氨基酸在7 min内可以实现基线分离,标准曲线的线性范围均为5~100μg·L^(-1),检出限依次为0.086,0.075,0.047 mg·kg^(-1)。按照标准加入法进行回收试验,回收率为85.5%~103%,测定值的相对标准偏差(n=7)不大于3.0%。方法用于分析富硒大豆中的硒代氨基酸,大豆中硒赋存形态多为SeMet,含量占总硒量的85.5%~94.5%。

生物体系中硒代氨基酸的手性形态分析进展

综述了近年来利用高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)以及毛细管电泳(CE)等分析手段与其它高灵敏检测器联用对生物体系中硒代氨基酸进行手性形态分析研究情况,参考文献40篇。

超高效液相色谱-串联质谱法测定孜然中3种硒代氨基酸含量

目的采用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS),对新疆不同地区的孜然进行硒代氨基酸含量分析。方法样品采用水提取法进行提取,以0.1%的乙腈(A)和水(B)二元流动相体系、多反应监测模式进行监测,基质匹配外标法进行定量,对硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸和Se-(甲基)硒基-L-半胱氨酸等3种硒代氨基酸进行色谱分离、测定。结果全疆和东疆的3种硒代氨基酸总含量分布较为接近,且东疆总量均值2.635μg/kg与全疆2.705μg/kg接近,北疆总量均值最小,为2.396μg/kg,南疆总量均值最大,为3.003μg/kg,其中产自吐鲁番的孜然中3种硒代氨基酸含量较高。环节中硒代氨基酸总含量的大小顺序为批发环节>零售超市环节>农贸环节,3种硒代氨基酸中硒代胱氨酸含量最多,占比最大。结论本研究采用水提法以及UPLC-MS/MS分析3种硒代氨基酸测定结果准确且操作便捷。结果分析各含量显示同一区域内所产孜然中硒代氨基酸的含量和质量仍可能呈现较大差异,在不同环节下的各种物质含量有明显差异,其中批发环节保持了硒代氨基酸的稳定性,3种硒代氨基酸含量较高。以期对孜然中硒代氨基酸高效测定提供数据支持。

超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法测定富硒食品中的硒代氨基酸

目的建立一种用于检测富硒食品中4种硒代氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱法。方法考虑3种样品前处理方法的影响,采用0.1%的甲酸(A)和乙腈(B)二元流动相体系对N-乙酰-L-硒代蛋氨酸、Se-(甲基)硒基-L-半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代胱氨酸等4种硒代氨基酸进行色谱分离。采用多反应监测模式(multiple reaction monitoring,MRM)进行监测,基质匹配外标法进行定量。结果口服液中,4种硒代氨基酸的线性关系良好(r>0.996),平均回收率范围为89.0%~104.5%,相对标准偏差均小于7%。结论该方法对简单基质的样品中硒代氨基酸的测定结果准确可靠,但基质效应较为明显。

反相高效液相色谱法测定富硒脱水菜心中的硒代氨基酸

建立了柱前衍生反相高效液相色谱-紫外检测富硒脱水菜心中硒代胱氨酸(SeCys)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)和硒代蛋氨酸(SeMet)的方法,优化了样品预处理方法,并评价其定量分析的线性、准确性、重复性和检出限,结果显示:以0.1mol/LHCl为提取溶剂,超声处理8h,提取效果最佳;3种硒代氨基酸的平均加标回收率为95.7%～112.9%;在各硒代氨基酸的线性范围内,线性关系良好(R>0.999);保留时间和峰面积重复性的相对标准偏差(RSD)均分别低于2.0%和5.0%;酸性条件下的检出限为0.004～0.009mg/L。

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)联用测定富硒小麦中硒代氨基酸

为科学补硒和促进富硒小麦的种植推广,用蛋白酶XIV辅助微波振荡提取富硒小麦中硒代氨基酸,采用C18分离柱分离,以磷酸氢二铵(30.0 mmol/L)+甲醇(1.0%)+四丁基溴化铵溶液(2.0 mmol/L,pH=6.5)为流动相,能在10 min内实现5种硒代氨基酸的分离。在高能氦气模式(HEHe)下,用^(78)Se的色谱峰面积积分作为定量依据,建立了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(HPLC-ICP-MS)检测富硒小麦中硒代氨基酸的方法。5种硒代氨基酸在1.0~200.0μg/L线性相关性良好,检出限在0.11~0.29μg/L。以富硒小麦为基体进行加标回收,除硒代胱氨酸(SeCys_(2))可能不稳定,易分解造成回收率偏低外,其他4种硒代氨基酸的加标回收率在92.3%~102%,相对标准偏差为1.6%~4.2%(n=7)。用所建立的方法测定农业科技工作者种植推广的富硒小麦,结果发现小麦中的硒赋存形态多为硒代蛋氨酸(SeMet),此外,小麦中还含有少量硒代胱氨酸(SeCys_(2))、硒代半胱氨酸(SeCys)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代乙硫氨酸(SeEt)。方法具有良好的精密度和准确度,适用于富硒小麦中硒代氨基酸的形态分析。

硒代蛋氨酸的生物学功能及其在畜禽生产中的应用

硒代蛋氨酸(Se-Met)是动物从植物性饲料原料中获取硒的主要形式,具有抗氧化、抗炎、抗病毒等多种生物学功能,在提高畜禽生产性能、改善畜产品品质、缓解畜禽应激等方面发挥着积极作用。本文通过分析近年来国内外文献,对硒代蛋氨酸的抗氧化、抗炎、抗病毒等主要生物学功能、作用机理及其在畜禽生产中的应用概况进行综述,旨在为硒代蛋氨酸在畜禽生产中的高效应用提供参考依据。

富硒氨基酸生物肥在水果型黄瓜上施用效果研究初报

以"京研迷你2号"黄瓜为试验材料,研究施用不同量富硒生物有机肥对水果黄瓜单果鲜重、产量、硒含量及内在品质的影响。结果表明:当富硒生物有机肥施用量为600mL/667m2时,单果鲜重、产量、硒含量都是最高,其中硒含量为对照的70.63倍,Vc、可溶性糖和可溶性蛋白质等营养指标也有一定程度的提高。

硒代氨基酸的分析

本文介绍了用日立835-50氨基酸分析仪分析硒代氨酸(硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸的方法,由于采用了较高浓度的盐酸水解,中性氨基酸沉淀等技术使两种硒代氨基酸实际样品的同时分析得以实现,国内未见报导。

高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内硒代氨基酸

建立了高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI-MS)检测蚯蚓体内硒代氨基酸的分析方法.采用振荡超声辅助酶解法提取蚯蚓(赤子爱胜蚓(Eisenia fetida))体内的硒代蛋氨酸(SeMet)和甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys).用HPLC-ESI-MS正离子多反应离子监测模式(MRM)对这两种硒代氨基酸进行分离检测,外标法定量.SeMet和MeSeCys在4-600 ng·mL^-1有良好的线性关系,线性相关系数R^2均大于0.9999.SeMet和MeSeCys的方法检出限分别为0.49μg·g^-1和0.67μg·g^-1.样品加标回收率在81.1%-112.4%之间,并且相对标准偏差RSD均小于3.1%.本方法不需要柱前衍生化,增加反向气等繁琐操作,简单快速的实现对两种硒代氨基酸的分离检测.

富硒农产品中硒代氨基酸形态及其在不同蛋白组分中的分布

目的:探究富硒西兰花、富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗不同溶解性蛋白组分中硒代氨基酸形态及分布情况。方法:利用高效液相色谱—氢化物发生—原子荧光光谱联用技术测定4种富硒禾谷类和十字花科农产品中硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代乙硫氨酸(SeEt)含量,并分析各硒代氨基酸在清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白等不同溶解性蛋白组分中的分布特点。结果:4种富硒植物的硒代氨基酸在不同蛋白组分中的含量及分布存在显著差异(P<0.05)。富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗的有机硒以SeMet形式存在,在4类蛋白组分中分布较一致且相对含量均高于66%,不存在SeEt;富硒西兰花的有机硒主要以SeCys2和SeMet为主、MeSeCys次之,前二者在清蛋白和谷蛋白组分中的分布较一致且约占有机硒含量的36%,但在球蛋白和醇溶蛋白组分中均以SeMet存在,相对含量最高达60%,其次为SeCys2约占有机硒含量的34%。富硒西兰花中存在极少量的SeEt约占有机硒含量的5%。结论:3种禾谷类农产品(富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗)的不同溶解性蛋白中均以SeMet为主;而富硒西兰花的不同溶解性蛋白则以SeMet和SeCys2为主,并且其清蛋白和谷蛋白还富含较多的MeSeCys。

硒代氨基酸提取与检测技术研究进展

硒元素人体健康有重要作用,硒代氨基酸具有很强的抗癌功效。介绍了水提取法、酸提取法、酶解法、辅助提取法和循环提取法等硒代氨基酸的提取方法,并对液相色谱-质谱联用法、柱前衍生液相色谱法、毛细管电泳法、电化学检测法和氨基酸分析仪法等检测技术进行了系统的阐述,为生物体内硒形态研究和有机硒定量分析提供理论基础和技术借鉴。

微波水解-液相色谱-原子荧光光谱法测定硒蛋白中的硒代氨基酸

针对酶解法测定硒代氨基酸操作复杂,时间长,水解不完全且水解产物不稳定等问题,建立一种微波水解-液相色谱-原子荧光光谱仪测定硒蛋白中硒代氨基酸的方法。样品经HCl(6 mol/L)微波水解后,调节pH值至7.5,采用阴离子色谱柱,pH=6.0的(NH_(4))_(2)HPO_(4)(40 mmol/L)溶液为流动相,流速0.6 mL/min,等度洗脱12 min的条件对硒代胱氨酸(SeCys_(2))、甲基-硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代蛋氨酸(SeMet)进行分离,用原子荧光光谱仪测定其含量。微波水解条件采用星点设计-响应面法进行优化,优选最佳水解条件为:称样量20 mg,水解温度150℃,水解时间40 min。SeCys_(2)、MeSeCys和SeMet均在0~100 ng浓度范围内呈线性关系,相关系数均大于0.999,检出限分别为0.07、0.03和0.14 mg/kg,RSD分别为5.6%、4.6%、3.7%(n=6)。用来测定硒代氨基酸,耗时短,成本低,水解完全,操作简单,水解产物稳定,能够科学评价硒蛋白中硒代氨基酸的组成,对硒蛋白产品的质量控制和溯源提供了科学方法,值得推广应用。

UPLC-Q-TOF-MS测定赣南脐橙中的硒代氨基酸

建立了测定赣南脐橙中硒代胱氨酸(SeCys_(2))、甲基-硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代蛋氨酸(SeMet)的UPLC-Q-TOF-MS分析方法.样品通过超声水提取,选取AccQ·Tag^(TM)氨基酸色谱柱(3.9 mm×150 mm),以水-甲醇(90∶10)为流动相进行分离,经电喷雾离子源(ESI)正离子化后,采用多反应离子监测方式(MRM)和外标法定量.实验结果表明,SeCys_(2)、MeSeCys、SeMet在5 ng/mL~100 ng/mL范围线性良好,相关系数R^(2)≥0.997;3种硒代氨基酸的加标回收率在78.8%~92.2%之间,相对标准偏差在2.1%~7.5%之间;SeCys_(2)、MeSeCys、SeMet的检出限分别为6 ng/mL、10 ng/mL、1 ng/mL.因此,该方法可以用于富硒脐橙中3种硒代氨基酸的准确和高效检测.

利用HPLC-ESI-MS技术测量硒代氨基酸

硒在自然界中以无机硒和有机硒的形式存在,有机硒又多以硒代氨基酸的形式存在。富硒食品和饲料添加剂作为硒补充来源,通过研究HPLC-ESI-MS技术测量硒代氨基酸,可以为富硒作物的开发利用提供技术手段。一、有机硒的存在形式植物中有机硒主要有硒蛋白、硒核糖核酸以及含硒多糖等,其中,硒蛋白是大分子有机硒的主要形态,硒的抗氧化作用主要就是以硒蛋白和硒酶等形式发挥的。在生物硒丰富的产品中,硒是以硒蛋白、硒多糖和硒核酸的形式存在,其中硒蛋白的比例最高。

硒代半胱氨酸(selenocysteine):密码表中第二十一个氨基酸?

已知所有的氨基酸中,只有遗传密码表内的20种基本氨基酸才能在核糖体中直接掺入肽链;但最近发现于原核、真核生物中的含硒酶里的硒代半胱氨酸(Se-Cys)似亦有此特点。生化、遗传实验均表明Se-Cys对应于终止密码子UGA;相应的tRNA(95bp)基因已经找到。但其转录产物上所携的Se-Cys很可能由原先携带着的Ser经O-磷酰Ser而来。上述发现显示了UGA作为有义密码子的保守性:也许它正处于从有义密码子变为无义密码子的进化过程中。

硒蛋白的抗氧化性研究与第21个氨基酸的发现

硒是人体必需的微量元素,以硒代半胱氨酸(Sec)的形式存在于蛋白质中作为硒酶的活性中心发挥作用,其生物功能主要是抗氧化。由于硒与人体健康具有十分密切的关系,所以硒蛋白的研究有着重要的理论和实际意义。本文以第一个硒蛋白细胞谷胱甘肽过氧化物酶为例,结合作者自己的工作,重点对该硒酶的结构、催化机制和模拟进行了综述,并就TGA编码Sec致第21个氨基酸的发现以及基于硒代半胱氨酸插入元件(SECIS)的特征寻找新硒蛋白的研究进展进行了介绍。

微量热法研究硒代吗啉衍生物的抑菌作用

采用瑞典产 LKB-2 2 77生物活性检测系统 (热导式微量热计 )、用停流法研究了 3种硒代吗啉衍生物对大肠杆菌作用的热功率输出曲线 ,得到了大肠杆菌在不同药物浓度下的生长速率常数 k、半抑制浓度 IC50等参数 .结果表明 ,N -十二烷基硒代吗啉和 N -十二烷基硒代吗啉基乙酸甲酯溴化物的抗菌效果较明显 .

硒代吗啉衍生物的合成及抑菌活性

Five selenium containing compounds are synthesized and their molecular structures are verified by IR, 1H NMR and MS. The action on escherichia coli are studied by microcalorimetry, the rate constant k and half inhibitory concentration, IC 50 are calculated, the biological activity of the compounds is expressed quantitatively.

紫外分光光度法测定Cu(Ⅱ)与含硒氨基酸络合物的组成

本文研究 Cu( Ⅱ )、含硒氨基酸 (硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸 )及其络合物紫外光谱性质 ,探讨了酸度对络合物的影响以及 Cu( Ⅱ )与含硒氨基酸络合物的组成比均为 1∶ 2。