硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致免疫抑制鸡的颉颃作用

为探究硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致免疫抑制的颉颃作用,将336只11日龄非免疫健康罗曼雏鸡随机均分为7组:空白对照组(BC)、免疫对照组(VC)、环磷酰胺对照组(Cy)、sGPS3、sGPS5、sGPS6和药物对照组(APS),每组6个重复,每个重复8只鸡。BC组和VC组注射0.5mL生理盐水,其余组均肌肉注射8mg/mL环磷酰胺0.5mL,每天1次,连续3d;14日龄时,除BC组外,其余组均用新城疫疫苗免疫,同时3个硒大蒜化多糖组分别注射0.5mL浓度为1mg/mL的sGPS3、sGPS5、sGPS6,APS组肌肉注射黄芪多糖注射液0.5mL,Cy组、VC组和BC组注射生理盐水0.5mL,每天1次,连续3d,28日龄二免。分别于首免后的第7、14、21、28天,每组随机抽取6只罗曼鸡翼静脉采血,分离血清,β-微量法检测血清ND-HI抗体效价、ELISA法检测血清γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)含量。称量体重后采集胸腺、脾脏和法氏囊组织并称重,计算免疫器官指数。结果显示,各给药组的血清ND-HI抗体效价、血清IFN-γ和IL-2含量、法氏囊指数均显著高于Cy组(P<0.05);sGPS6组血清抗体效价、IFN-γ含量在28d,血清IL-2含量在21、28d均显著高于其余各组(P<0.05);在免疫后21、28d,4个给药组中sGPS6组体重、法氏囊指数最高,显著高于其余3个给药组(P<0.05);在免疫后28d,4个给药组中sGPS6组胸腺指数、脾脏指数最高,显著高于其余3个给药组(P<0.05)。结果表明,硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致的免疫抑制具有颉颃作用,其中sGPS6组的活性最高,可作为新型免疫抑制颉颃剂的候选药。

硒化大蒜多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

【目的】研究硒化大蒜多糖(sGPS)对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响,以期为硒化大蒜多糖的作用挖掘和临床应用提供依据。【方法】依次通过分离、纯化得到大蒜多糖(GPS),并经硝酸-亚硒酸钠硒化修饰得到sGPS3、GPS5和sGPS6。以小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,用6.25、12.5、25、50、100μg/mL sGPS3、GPS5、sGPS6及10μg/mL脂多糖(LPS组)处理小鼠腹腔巨噬细胞48 h,同时设置不加药物的细胞为对照组,用中性红法测定其吞噬功能,CCK-8法测定其增殖能力,筛选出活性最好的硒化大蒜多糖;然后用ELISA法检测活性最好的硒化大蒜多糖对巨噬细胞上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)含量的影响;再通过小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验测定空白对照组(生理盐水)及高(2 mg/mL)、中(1 mg/mL)、低(0.5 mg/mL)剂量活性最好的硒化大蒜多糖的吞噬指数与吞噬百分率。【结果】除6.25μg/mL sGPS3外,6.25、12.5、25、50和100μg/mL sGPS3、sGPS5、sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞的A490 nm值均显著高于对照组(P<0.05),其中,50和100μg/mL sGPS6组的A490 nm值显著高于LPS组(P<0.05),因此选用sGPS6进行后续试验;12.5、25、50和100μg/mL sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞上清中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著高于对照组,25、50和100μg/mL sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞上清中IFN-γ、IL-12显著高于对照组(P<0.05),其中100μg/mL sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞上清中NO、TNF-α、IL-12显著高于LPS组(P<0.05)。2和1 mg/mL sGPS6组的吞噬指数和吞噬率均显著高于空白对照组(P<0.05)。【结论】硒化大蒜多糖能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和增殖能力,促进细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌。

硒化修饰提高大蒜多糖体外抗新城疫病毒活性的研究

旨在研究硒化修饰提高大蒜多糖的体外抗新城疫病毒(NDV)活性并筛选出体外抗NDV活性较好的硒化大蒜多糖。依次通过水提醇沉法、Sevage法去蛋白得到大蒜多糖(GPS),并采用硝酸-亚硒酸钠法对大蒜多糖进行硒化修饰,得到9个硒化大蒜多糖sGPS_(1)~sGPS_(9)。以鸡胚成纤维细胞(CEF)为作用对象,采用MTT法通过先加硒化大蒜多糖,或先加NDV,或两者同时加入3种方式比较9个硒化大蒜多糖抗NDV侵入、复制、直接抑制NDV的作用,同时设置细胞对照(CC)和病毒对照(VC),并计算病毒抑制率;筛选出活性较好的sGPS_(3)、sGPS_(5)、sGPS_(6)测定其对NDV感染CEF后细胞凋亡、细胞周期的影响以及其对鸡胚的存活数的影响,同时设置GPS对照、VC对照、空白对照(BC)。结果表明,GPS_(5)、sGPS_(6)组的细胞凋亡率、处于S期的细胞百分数显著低于VC组和GPS组(P<0.05);sGPS_(6)组36 h、48 h的细胞凋亡率显著小于sGPS_(3)、GPS_(5)组(P<0.05),处于S期的细胞百分数小于sGPS_(3)、sGPS_(5)组,sGPS_(3)组在36 h、sGPS_(5)组在24 h和36 h、sGPS_(6)组在3个时间点的鸡胚死亡数均显著小于GPS组(P<0.05),sGPS_(6)组在3个时间点的鸡胚死亡数均为最低。综上,硒化修饰能提高大蒜多糖抗NDV的活性,其机制可能与阻止NDV侵入、抑制NDV诱导CEF凋亡有关。其中sGPS_(6)的活性最强,可作为抗NDV的候选药。

大蒜多糖及其硒化产物抗氧化活性的比较研究

目的比较大蒜多糖与硒化大蒜多糖对经过氧化氢(H2O2)诱导损伤的大鼠嗜铬瘤细胞株(PC12)的保护作用。方法用H2O2建立PC12细胞损伤模型,应用四氮唑蓝(MTT)比色法检测PC12细胞的活力;化学比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内和细胞培养液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果硒化大蒜多糖、大蒜多糖500μg/ml及以上剂量组和亚硒酸钠12.50μg/ml及以上剂量组均能有效抑制由H2O2引起的细胞存活率的下降(P<0.01)。硒化大蒜多糖、大蒜多糖2000μg/ml可显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内的MDA含量,以及提高SOD活性(P<0.01),表现出良好的抗氧化活性,而硒化大蒜多糖的抗氧化作用更为明显(P<0.05)。结论硒化大蒜多糖对经H2O2诱导损伤的PC12细胞具有保护作用,这种保护作用明显优于大蒜多糖或单纯硒,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。