硒化氨基多糖对黑鲷脾脏代谢物的影响

通过研究饲喂硒化氨基多糖后黑鲷脾脏代谢物的变化,探讨其免疫调节机制。对照组未添加硒化氨基多糖,试验组饲喂添加硒化氨基多糖的饲料,采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS),结合XCMS^(plus)软件、高分辨二级数据库对副溶血弧菌攻毒48和96 h时黑鲷脾脏内源性代谢物进行了非靶向代谢组学分析,筛选出潜在的脾脏内源性生物标志物。通过MetaboAnalyst 4.0网站进行相关代谢通路分析,揭示硒化氨基多糖调节脾脏免疫的潜在机制。结果表明,黑鲷脾脏在副溶血弧菌攻毒48和96 h时,分别有存在显著差异的31和36种潜在生物标志物,指向了8和10条代谢通路(P<0.05)。硒化氨基多糖通过多条代谢通路增强了黑鲷脾脏的自身免疫机能。该研究结果为阐明硒化氨基多糖的免疫增强机制和合理开发免疫增强剂提供了科学依据。

硒化低聚氨基多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响。用噻唑蓝比色法分别考察硒化低聚氨基多糖、Na2Se O3对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并观察巨噬细胞形态的变化。通过中性红法、酶联免疫吸附测定法及实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法分别检测巨噬细胞的吞噬能力、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-6及IL-10细胞因子的分泌量及其m RNA表达水平。结果表明:硒质量浓度为100~1 000μg/L时,硒化低聚氨基多糖对细胞的相对增殖率无显著影响;而Na2Se O3的硒质量浓度超过200μg/L即对巨噬细胞RAW264.7产生细胞毒性作用。硒化低聚氨基多糖能增强巨噬细胞吞噬活性,显著提高RAW264.7细胞TNF-α、IL-6及IL-10分泌量及其m RNA表达水平,且效果比Na2Se O3处理组、低聚氨基多糖处理组及Na2Se O3+低聚氨基多糖复合添加组好。实验结果提示硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有一定的免疫调节作用。

硒化低聚氨基多糖对免疫抑制小鼠免疫器官及肠紧密连接蛋白表达的影响

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖(low-molecular-mass seleno-aminopolysaccharide,LSA)对免疫抑制小鼠组织形态、回肠闭合小环蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)及闭锁蛋白(Occludin)表达的影响。通过腹腔注射环磷酰胺构建免疫抑制模型,测定脏器指数,采用苏木精-伊红染色观察脾脏与空肠组织病理形态,利用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应分析ZO-1、Occludin mRNA的表达水平。结果表明:LSA处理显著缓解了环磷酰胺对小鼠免疫器官的抑制作用(P<0.05);与环磷酰胺模型组比较,0.6、0.9 mg/(kg mb·d) LSA组小鼠脾脏结构较清晰,红髓和白髓界限较明显,白髓面积增大,空肠绒毛形态与环磷酰胺模型组相比较为整齐;0.6 mg/(kg mb·d)LSA组的ZO-1、Occludin m RNA表达量显著升高(P<0.05)。综上,LSA具有一定的免疫调节功能及肠道保护作用。

硒化低聚氨基多糖对小鼠急性毒性试验

研究硒化低聚氨基多糖(LSA)的安全性,采用寇氏法和食品安全国家标准(GB 15193.3-2014)进行了急性毒性评价,计算了LSA对ICR小鼠的半数致死量(LD50)和95%置信区间,并通过小鼠给药后体质量、死亡情况、器官指数、病理变化评价LSA对小鼠的急性毒性。结果显示:LSA对小鼠灌胃给药的LD50为2 884 mg/kg,其95%可信限为2 378~3 497mg/kg。与空白对照组相比,各组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏指数差异不显著(P>0.05),最大剂量(10 000mg/kg)组肺脏和胸腺指数差异显著(P<0.05)。LSA急性中毒死亡小鼠各组织均有出血状况,其中肺部淤血较为严重,小肠内容物暗红色,个别出现肠臌胀。结果表明,LSA属于低毒物质,毒性作用小,可以对其药效进行进一步研究。

硒化低聚氨基多糖稳定性研究

以低聚氨基多糖与亚硒酸钠为原料,合成硒化低聚氨基多糖(Low molecular seleno-aminopolysaccharide,LSA)。通过无机硒与总硒含量的比值考察LSA稳定性,对LSA进行了影响因素[60℃高温试验,25℃、相对湿度(90%±5%)高湿度试验和(4500±500)lx强光照试验]、加速试验(40℃、相对湿度75%)和长期试验(25℃、相对湿度60%,12个月)。结果高湿度条件下10 d LSA吸湿严重发生结块现象,无机硒/总硒有显著性减小。高温及强光照射10 d对其质量也有一定影响,但无机硒/总硒在强光试验中有显著性增加,长时间的光照对LSA的稳定性影响较大。同时,加速试验与长期试验表明产品较为稳定。因此,硒化低聚氨基多糖有一定程度的吸湿性,高光对其稳定性的影响较大,应该在密闭条件下避光保存。