硒蛋白PP1(SEPP1)过表达抑制786-O和769-P人肾癌细胞增殖并引起G2/M期阻滞

目的构建硒蛋白PP1(SEPP1)基因的慢病毒质粒并研究SEPP1对人肾透明细胞癌细胞增殖的影响。方法以HEK293T细胞的c DNA为模板,通过PCR法获得人SEPP1全长序列片段,并与慢病毒表达载体p LV-EGFP(2A)Puro质粒相连接,获得重组p LV-EGFP(2A)Puro-SEPP1载体并进行基因测序验证。将重组慢病毒载体与包装质粒共同转染HEK293T细胞,进行病毒包装。用病毒上清感染786-O和769-P细胞,采用Western blot法检测SEPP1蛋白表达。按照重组慢病毒感染细胞、空载体感染细胞、未感染细胞进行分组,通过MTS法检测细胞增殖活性、细胞平板克隆形成实验检测克隆形成能力、流式细胞术检测细胞周期。结果酶切后凝胶电泳得到与SEPP1的DNA大小相一致的片段与空载体片段,基因测序的结果与SEPP1序列完全一致。经p LV-EGFP(2A)Puro-SEPP1感染的786-O、769-P细胞在感染48 h后,荧光显微镜下可见EGFP明显表达,实验组与空载体组、空白对照组相比较,SEPP1蛋白表达水平均明显提高。p LV-EGFP(2A)Puro-SEPP1感染组的细胞增殖能力降低,SEPP1过表达细胞集落形成能力明显降低,SEPP1过表达引起肾癌细胞G2/M期阻滞。结论在786-O和769-P细胞过表达SEPP1显著降低细胞增殖能力,并在786-O细胞中引起G2/M期阻滞。

紫苏挥发油联合舒尼替尼对肾癌细胞增殖及SEPP1蛋白表达的影响

目的研究紫苏挥发油联合舒尼替尼对肾癌OS-RC-2细胞的增殖抑制作用及对硒蛋白PP1(SEPP1)的影响。方法将肾癌OS-RC-2细胞分为阴性对照组(0. 9%Na Cl处理)、阳性对照组(2μmol·L^-1舒尼替尼处理)和很低、低、中、高、很高剂量实验组(1,5,10,20,30 mg·mL^-1紫苏挥发油+2μmol·L^-1舒尼替尼)。以MTS、平板克隆形成实验检测肾癌OS-RC-2细胞活性;以流式细胞术检测肾癌OS-RC-2细胞周期;以蛋白免疫印迹法(WB)检测肾癌OSRC-2细胞SEPP1蛋白表达情况。结果干预48 h时,阴性对照组、阳性对照组和很低、低、中、高、很高剂量实验组细胞存活率分别为100. 00%,(52. 45±2. 68)%,(52. 15±2. 35)%,(50. 12±2. 34)%,(35. 45±3. 46)%,(22. 15±2. 42)%,(13. 26±3. 24)%;克隆形成率分别为(12. 35±0. 14)%,(7. 12±0. 06)%,(7. 32±0. 32)%,(7. 21±0. 26)%,(6. 06±0. 21)%,(3. 33±0. 12)%,(1. 26±0. 05)%;G2/M期细胞比例分别为(5. 12±1. 42)%,(26. 35±2. 45)%,(14. 21±2. 54)%,(21. 57±2. 23)%,(29. 32±3. 54)%,(37. 87±2. 32)%,(42. 15±3. 58)%;WB检测显示,SEPP1蛋白相对表达量分别为0. 10±0. 02,1. 02±0. 16,0. 15±0. 01,0. 66±0. 11,0. 85±0. 14,0. 89±0. 25,0. 96±0. 21。与阴性对照组比较,实验组和阳性对照组细胞存活率、克隆形成率均降低,G2/M期细胞比例和SEPP1蛋白相对表达量升高(P <0. 05)。结论紫苏挥发油联合舒尼替尼可抑制肾癌OS-RC-2细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期,且具有显著的剂量依赖性,其作用机制可能与促进细胞内SEPP1蛋白表达相关。