硝呋齐特增加乳腺癌细胞对奥拉帕利敏感性的初步研究

背景与目的:硝呋齐特(nifuroxazide)是一种口服硝基呋喃类抗生素,常用于治疗结肠炎和腹泻,硝呋齐特可抑制STAT3磷酸化而发挥抗肿瘤作用。通过药物筛选发现硝呋齐特能影响细胞DNA同源重组(homologous recombination,HR)修复,进一步对硝呋齐特与聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]抑制剂奥拉帕利(olaparib)联合应用的可能性进行初步探索。方法:采用See-Saw系统筛选对细胞DNA HR修复影响明显的药物,然后用HR/非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)荧光报告系统进一步验证筛选药物对HR的影响。采用免疫荧光染色技术检测药物处理后DNA损伤标记γH2AX焦点形成情况。最后用MTS及克隆形成实验检测药物处理后对细胞增殖的影响。结果:通过筛选240个小分子抑制剂发现,STAT3抑制剂硝呋齐特可显著降低细胞HR修复水平。硝呋齐特与奥拉帕利联用可增加乳腺癌细胞DNA损伤程度并降低DNA损伤修复能力。此外,硝呋齐特与奥拉帕利联用可进一步提高奥拉帕利对癌细胞的杀伤作用。结论:硝呋齐特能增加乳腺癌细胞对奥拉帕利的敏感性,可作为奥拉帕利潜在增敏药物,值得进一步研究。

硝呋齐特对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制

目的探讨硝呋齐特(nifuroxazide)对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度(2.5、5、10μmol/L)的nifuroxazide处理肺腺癌A549细胞,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法观察nifuroxazide对细胞增殖的影响;流式细胞术观察nifuroxazide对细胞凋亡的影响;采用Transwell小室观察nifuroxazide对细胞迁移及侵袭的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测nifuroxazide对微小RNA-219-5p(miR-219-5p)表达的影响;观察抑制miR-219-5p表达对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果nifuroxazide处理A549细胞后细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.05),随浓度增加其抑制作用逐渐增强(P<0.05);nifuroxazide作用于A549细胞后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),迁移与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),miR-219-5p与Bax的表达水平显著升高(P<0.05),而Bcl2表达水平显著降低(P<0.05);抑制miR-219-5p的表达可逆转nifuroxazide对A549细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的作用。结论硝呋齐特可通过上调miR-219-5p的表达诱导A549细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭。

硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞BCPAP和TPC-1的增殖、迁移及侵袭的影响。方法用不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20μmol/L)硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞,采用MTT法和克隆形成实验观察硝呋齐特对细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色及流式分选技术观察对细胞凋亡的影响;通过Western blot法检测硝呋齐特处理后BCPAP细胞凋亡相关蛋白及迁移侵袭相关蛋白的表达情况;采用Transwell小室观察细胞迁移和侵袭能力。结果硝呋齐特0、1.25、2.5μmol/L处理BCPAP细胞,0、1.25μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72h后细胞增殖力均未受到明显抑制(P>0.05);硝呋齐特5、10、20μmol/L处理BCPAP细胞,10、20μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72h后细胞增殖力均受到明显抑制(P<0.05),且随浓度增加和时间延长其抑制作用逐渐增强;此外,2.5、5μmol/L硝呋齐特对TPC-1细胞的增殖抑制作用分别从72h和48h起效(P<0.05)。暴露于10μmol/L硝呋齐特10d后,BCPAP和TPC-1细胞的克隆形成均受到抑制(P<0.05)。10μmol/L硝呋齐特处理48h后,BCPAP和TPC-1细胞均出现细胞核改变,凋亡小体出现;流式分析显示BCPAP及TPC-1凋亡细胞增加(P<0.05)。10μmol/L硝呋齐特处理BCPAP细胞48h,促凋亡蛋白CC-3、Bax的表达增加(P<0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P<0.05);促迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达减少(P<0.05),MMPs家族抑制剂——金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-2表达增加(P<0.05)。10μmol/L硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞48h,BCPAP细胞及TPC-1细胞迁移率与侵袭率均下降(P<0.05)。结论硝呋齐特于体外抑制人甲状腺癌细胞系BCPAP和TPC-1的增殖,通过上调CC-3和Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,通过降低MMP-2和MMP-9蛋白的表达阻断细胞的迁移与侵袭。

硝呋齐特通过miR-877-5p/蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子通路调控肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨硝呋齐特对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法实验分为对照组(不做任何处理)、低、中、高剂量实验组(5,10和20μmol·L^(-1)硝呋齐特)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-877-5p组(转染miR-877-5p mimics)、anti-miR-NC-20组(转染anti-miR-NC+20μmol·L^(-1)硝呋齐特)和+anti-miR-877-5p-20组(转染anti-miR-877-5p+20μmol·L^(-1)硝呋齐特)。用噻唑蓝检测细胞增殖抑制率,用Transwell检测细胞迁移和侵袭,用逆转录聚合酶链反应法检测miR-877-5p和蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)mRNA表达水平。结果对照组、低、高剂量实验组、miR-NC组、miR-877-5p组、anti-miR-NC-20组和anti-miR-877-5p-20组细胞增殖抑制率分别为(0.00±0.01)%,(14.65±1.42)%,(54.23±5.71)%,(5.47±0.58)%,(34.58±3.44)%,(54.31±5.48)%和(19.65±1.87)%,细胞迁移数分别为(124.33±11.07),(98.67±9.17),(61.22±6.18),(125.44±10.24),(69.33±6.67),(62.78±6.34)和(101.56±9.51)个,细胞侵袭数分别为(109.33±10.07),(81.33±8.35),(52.33±5.14),(106.33±9.44),(59.56±5.87),(53.44±5.96)和(89.56±8.43)个,miR-877-5p相对表达水平分别为1.01±0.09,1.52±0.15,2.64±0.25,1.00±0.08,2.54±0.25,2.69±0.25,1.53±0.15,CIP2A mRNA分别为1.02±0.08,0.86±0.07,0.54±0.05,1.01±0.06,0.62±0.05,0.51±0.04和0.79±0.05。低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,miR-877-5p组的上述指标与miR-NC组比较,anti-miR-877-5p-20组的上述指标与anti-miR-NC-20组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论硝呋齐特可抑制肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-877-5p和CIP2A有关。