2-苄基-3-硝基丙酸叔丁酯的合成及表征

以硝基丙酸为原料,经两步合成标题化合物。产物结构经核磁共振谱、红外光谱谱确定,总收率60%,反应条件温和。

3-硝基丙酸的高效液相色谱分析

利用反相高效液相色谱法定量分析米曲霉菌种培养基中３硝基丙酸的含量。样品经乙酸乙酯提取、净化后，以 Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｃ１８为色谱柱，以 Ｃ Ｈ３ Ｃ Ｎ／ Ｋ Ｈ２ Ｐ Ｏ４ （００２ ｍ ｏｌ／ Ｌ，ｐ Ｈ３０）（１／３，ｖ／ｖ）为流动相，流速为１０ｍ ｌ／ｍ ｉｎ，紫外检测器波长２１０ｎｍ 。该方法最低检出量为１０μｇ／ｋｇ（信噪比为３），回收率为９０１％ ～９８０％ 。

我国部分地区甘蔗中3-硝基丙酸含量的调查

3-硝基丙酸是变质甘蔗食物中毒的主要毒性物质。利用薄层色谱测定法测定了河南、河北、广西、福建和广东五省的甘蔗中3-NPA的含量。1987年测定88份,阳性率为21.6％,含量范围为2～134ppm;1988年测定了308份,阳性率为12.7％,含量范围为2～400ppm。文中对影响甘蔗污染3-硝基丙酸的因素做了讨论。

毛细管电泳法测定甘蔗中3-硝基丙酸

目的建立甘蔗中3-硝基丙酸的毛细管电泳分析方法。方法粉碎后的甘蔗经样品提取液提取,离心除杂后,在228 nm波长处用毛细管电泳法检测。结果在优化的实验条件下,3-硝基丙酸的质量浓度在1.0～100.0 mg/L范围内与其对应的校正峰面积呈良好线性关系(r=0.9997)。方法检出限(S/N=3)为0.3 mg/L,定量限(S/N=10)为1.0 mg/L。在10.0、50.0 mg/L两个添加水平下,方法的回收率分别为95.2%和103.9%,相对标准偏差(n=5)分别为2.2%和1.3%。结论本方法简便、灵敏、准确,可用于甘蔗中3-硝基丙酸的测定。

我国某些豆科植物中3—硝基丙酸的气相色谱和气相色谱—质谱研究

本文提出了对豆科植物中毒素3—硝基丙酸(3—NPA)进行检查、鉴定和定量的气相色谱(GC)和气质联用(GC/MS)方法,并用该法对达乌里黄芪(A.dahuricus Pall.DC.)、草木樨状黄芪(A.melilotoides Pall.宽叶和窄叶二品种)、劲直黄芪(A.strictus Grah.ex Benth)、多花木兰(l.amblyanthn Craib)和百脉根(L.Corniculatus)等5种豆科植物中的3—NPA进行了检查、鉴定和定量。发现达乌里黄芪、劲直黄芪、多花木兰和百脉根在GC保留时间5.7分处不出峰,故不含3—NPA,而草木樨状黄芪,不论宽叶和窄叶品种在该时均出一对称峰,并径GC/MS鉴定为3—NPA乙酯峰,故草木樨状黄芪含3—NPA,宽、窄叶品种叶干物质中其含量分别为4.62％和2.88％。因此,如将草木犀状黄芪开发作为饲草,应注意其中3—NPA对鸡、猪等非反刍动物的毒性,而其它4种豆科植物则无3—NPA毒性问题。

流动注射化学发光法在线检测饮用水中的3-硝基丙酸

利用碱性条件下3-硝基丙酸对鲁米诺—高锰酸钾化学发光体系有显著的抑制作用,结合流动注射分析技术,建立了一种在线检测饮用水中3-硝基丙酸的流动注射化学发光新方法。在优化的试验条件下,其线性范围为1-150mg/L,方法的检出限为0.28 mg/L,相对标准偏差为1.9%,3-硝基丙酸加标回收率为76.5%~93.8%。该方法具有较好的准确性和选取性,可实现饮用水中3-硝基丙酸的快速在线检测。

不同品种和形态特点多变小冠花中的3-硝基丙酸含量

本研究测定了不同品种和形态特点多变小冠花（CoronillavariaL．）中毒性物质3-硝基丙酸的含量。结果指出：多变小冠花中3-硝基丙酸含量的变化幅度为2．95～10．86％（干物质基础），不同形态特点小冠花的3-硝基丙酸含量无显著差异，但不同品种小冠花的3-硝基丙酸含量有一定差异，西德品种2342较高（716％，干物质基础），美国品种绿宝石和加拿大品种绿宝石均较低（5．93％和5．74％，干物质基础）。

3-硝基丙酸脑内注射诱导新生鼠脑室周围脑白质软化模型的建立

目的探讨脑内注射3-硝基丙酸(3-NPA)建立新生鼠脑室周围白质软化(PVL)模型的可行性,探索可靠的造模方法。方法新生5d(P5)SD大鼠64只,随机分成NPA与磷酸盐缓冲液(PBS)组,每组32只,脑立体定位仪定位于左侧脑室上方胼胝体,分别注入3-NPA(300mmol/L)和等量PBS,于造模后24h(P6)、48h(P7)、72h(P8)、9d(P14)灌注固定取脑,作HE染色及少突胶质细胞O4、髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫组织化学染色。结果HE染色显示P6、P7、P8NPA组皮质下及脑室周围白质出现疏松及液化灶,P14出现脑室扩大,脑室指数较PBS组高,有显著性差异(P<0.01),脑皮质无明显变化;O4染色示NPA组阳性细胞较PBS组明显减少,差异有显著性(P<0.01);MBP免疫染色示NPA组平均光密度值较PBS组低,有显著性差异(P<0.05)。结论3-NPA脑内注射诱导新生鼠PVL模型以脑室周围白质损伤为突出表现,皮质无明显改变,可作为疾病研究的可靠模型。

3-硝基丙酸诱发肌张力障碍大鼠的相关脑区细胞外神经递质变化

目的研究3-硝基丙酸(3-NP)诱发肌张力障碍大鼠相关核团的神经递质变化。方法 24只SD大鼠随机分为对照组和实验组,每组12只。实验组大鼠尾壳核注射3-NP 4 000μmol,对照组尾壳核注射生理盐水4μl,3 d后对两组大鼠进行行为学评分,然后对尾壳核、苍白球内侧、苍白球外侧和丘脑底核行微透析,用高效液相色谱法测定透析液中的神经递质含量。结果实验组尾壳核天冬氨酸及谷氨酸较对照组明显增加(P<0.05),而甘氨酸及γ-氨基丁酸较对照组明显减少(P<0.01);苍白球内侧细胞外神经递质较对照组均明显减少(P<0.01);丘脑底核细胞外神经递质较对照组均明显增加(P<0.05);苍白球外侧细胞外神经递质含量较对照组均无明显差异(P>0.05)。结论 3-NP可引起尾壳核神经递质变化,并通过直接和间接通路引起苍白球内侧及丘脑底核神经递质变化,从而诱发肌张力障碍。

3-硝基丙酸预处理诱导沙土鼠脑缺血耐受与海马星形胶质细胞的激活

目的 :探讨海马区星形胶质细胞的激活与 3 硝基丙酸 (3 NPA)预处理诱导脑缺血耐受的关系。方法 :阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型 ,通过HE染色和免疫组化观察海马锥体细胞死亡和星形胶质细胞的反应。结果 :对照组海马CA1区已失去正常结构 ,锥体细胞大部分丧失 ,存活神经元计数显著低于假手术组。 3 NPA预处理组存活神经元减少 ,但高于对照组。假手术组海马CA1区仅见少量胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性细胞 ,染色较弱 ,突起不明显。对照组海马CA1区GFAP阳性细胞增多 ,多为弱阳性。 3 NPA预处理组海马CA1区GFAP阳性细胞数目明显增多 ,染色较深 ,突起增粗。结论 :星形胶质细胞形态和机能的改变可能与 3

3-硝基丙酸预处理对脑缺血耐受模型GLUT1和GLUT3表达的影响

目的:探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带区不同再灌注时点GLUT1和GLUT3mRNA及蛋白水平表达的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组(sham组,n=4)、预处理对照组(3-NPA组,n=4)、大脑中动脉缺血组(M组,n=16)、3-NPA预处理组(IPC组,n=16)。M组和IPC组按再灌注时间(4h、12h、24h及48h)不同又分为4个亚组,每组动物4只。将大鼠在相应时点断头取脑,取缺血侧(左侧)冠状面中间1/3皮质,分别采用RT-PCR和Western blotting方法检测GLUT1、GLUT3 mRNA和蛋白水平表达情况。结果:IPC组GLUT1 mRNA表达在缺血再灌注后4h开始升高,48h最大,显著高于sham组和M组相应时点。IPC组GLUT3 mRNA表达在24h增高,48h最高,与M组相应时点24h、48h及sham组比较显著增高。IPC组比M组的GLUT1蛋白、GLUT3蛋白表达增高,有显著差异(F=5.848,P<0.05;F=6.295,P<0.05),尤以缺血再灌注后48h两者差异最明显。结论:3-NPA预处理能诱导脑缺血耐受,其机制可能是上调GLUT1和GLUT3 mRNA及蛋白表达水平,维持脑组织的能量供给。

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2和Bax mRNA表达的影响

目的探讨3-硝基丙酸（3-NPA）预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带Bcl-2和BaxmRNA表达的影响。方法将大鼠腹腔注射3-NPA20mg／kg，3d后制作局灶性脑缺血再灌注模型；采用逆转录聚合酶链反应，观察3-NPA预处理对脑缺血再灌注1h、6h、12h、24h及48h额顶部皮质Bcl-2和BaxmRNA表达的影响，并与假手术组和缺血再灌注组比较。结果与假手术组比较，缺血再灌注组和3-NPA预处理组各时间点Bcl-2和BaxmRNA表达极显著增强（均P〈0．01）；与缺血再灌注组比较，3-NPA预处理组各时间点Bcl-2mRNA表达显著增强（均P〈0．05），再灌注12-48hBaxmRNA的表达显著降低（均P〈0．05）。结论增强Bcl-2的表达、抑制Bax的表达，可能是3-NPA预处理抑制细胞凋亡、诱导脑缺血耐受的机制之一。

3-硝基丙酸预处理对黑质多巴胺神经元能量代谢的影响

目的 观察 3 -硝基丙酸(3- nitropropionic acid,3 NP)预处理对黑质腺苷酸及腺苷含量的影响,探讨能量代谢及腺苷含量改变在3- NP预处理保护多巴胺(dopamine,DA)神经元中的作用。方法 64 只雄性 SD大鼠随机分为对照组、3 -NP组、PD组及3- NP预处理组。3 -NP预处理组于6 羟基多巴胺(6 -OHDA)损毁前 24 h经腹腔注射3 NP (按体重20 mg/kg),采用高效液相色谱法(HPLC)测定术后2 h和1、3、5 d时间点损毁侧黑质腺苷酸及腺苷含量。结果 3- NP组2 h,帕金森病(PD)组3、5 d及3- NP预处理组各时间点较对照组ATP含量明显降低,腺苷酸ADP、-AMP等增高(P<0 .05或P<0. 01),3- NP预处理组3、5 d较PD组同时间点相比ATP水平增高(P<0. 05);3- NP预处理组各时间点腺苷持续在较高水平,与PD组同时间点相比显著增高(P<0 .01)。结论 3 -NP轻度抑制氧化磷酸化使能量代谢水平降低,有利于细胞能量储备和增强对后续抑制的耐受能力。腺苷水平增高在3 NP预处理保护神经元过程中可能具有重要作用。

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注细胞凋亡的影响

目的研究3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,将20只大鼠随机分成4组,假手术组、缺血组、3-硝基丙酸预处理组、3-硝基丙酸预处理+5-羟癸酸盐组。观察各组凋亡细胞数和凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的变化。结果与缺血组比较,3-硝基丙酸预处理组使凋亡细胞数明显减少(85.96±11.51)vs(123.96±13.45),Bcl-2表达增高(0.18±0.02)vs(0.13±0.01),Bax表达下降(0.14±0.02)vs(0.20±0.03),差异有显著性(P<0.01)。3-硝基丙酸预处理+5-羟癸酸盐组与缺血组比较差异无显著性(P>0.05)。结论3-硝基丙酸预处理可通过开放线粒体ATP敏感性钾通道,上调缺血半暗带区Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少神经元凋亡,对脑缺血损伤起保护作用。

小剂量3-硝基丙酸预处理后鼠脑海马脑源性促红细胞生成素的表达

目的 :探讨小剂量 3 硝基丙酸 (3 nitropropionicacid ,3 NPA)预处理后鼠脑海马脑源性促红细胞生成素(Epo)的表达变化 ,揭示 3 NPA预处理的机制。方法 :雄性沙土鼠 4 8只 ,随机分为正常对照组 (n =12 )和 3 NPA预处理组 (n =36 )。 3 NPA预处理组腹腔一次性注射 3 NPA 5mg/kg后 1d、3d、5d ,应用免疫组织化学和免疫印迹法观察海马脑源性Epo的表达变化。结果 :腹腔注射 3 NPA后 1d、3d ,海马区可检测到脑源性Epo的表达 ,腹腔注射 3 NPA后 5d ,海马区Epo的表达极低 ,正常对照组无Epo表达。结论 :脑源性Epo的表达变化和 3 NPA预处理诱导脑缺血耐受的时间相一致 ,提示Epo的表达与小剂量 3

多变小冠花中β－硝基丙酸含量的研究

对不同品种小冠花在不同生长年限、不同发育阶段和不同器官及不同生长年限的β－硝基丙酸含量进行了研究。结果表明：不同品种β－硝基丙酸含量是不相同的，一年生含量范围为１８．３～２３；１ｍｇ／ｇ，二年生含量范围为２２．３～３５．９ｍｇ／ｇ。在不同发育阶段以盛花期含量最高。器官中以青荚果含量最高，根中含量最低。以上的结果为小冠花的毒性研究和小冠花的利用提供了科学依据。

3-硝基丙酸预处理阻止黑质多巴胺神经元细胞凋亡

目的:观察3 硝基丙酸(3 NP)预处理时黑质多巴胺(DA)神经元细胞凋亡改变的作用机制及5 羟癸 酸(5 HD)对3 NP效果的影响。方法:25只雄性SD大鼠随机分为5组各5只。右侧黑质内立体定向注射6 羟多 巴胺(6 OHDA)建立帕金森病(PD)模型组,对照组大鼠立体定向和腹腔注射生理盐水,3 NP组在对照组的基础上 腹腔注射3 NP(20mg/kg),预处理组(CPC组)造模前24h给予3 NP(20mg/kg),5 HD组于造模前10min侧脑 室内给予5 HD(5mg/kg)。采用缺口末端标记原位检测法及免疫组化法检测黑质DA神经元细胞凋亡率及酪氨 酸羟化酶(TH)阳性细胞数。结果:PD组、CPC组及5 HD组与对照组和3 NP组比较细胞凋亡率均明显增高,损 毁侧TH阳性细胞数显著降低(P<0.01或P<0.05);CPC组与PD组比较细胞凋亡率降低,TH阳性细胞数增多 (P<0.05);5 HD组与PD组比较则差异无显著性意义(P>0.05)。结论:3 NP预处理可抑制细胞凋亡,而5 HD 可阻断3 NP预处理保护效应。线粒体ATP敏感性钾通道激活参与3 NP预处理神经元保护作用。

山奈酚对三硝基丙酸诱导氧化应激胎鼠的影响

试验旨在研究山奈酚对三硝基丙酸诱导亲代小鼠氧化应激从而对子代胎鼠氧化应激和抗氧化能力的作用。42只亲代小鼠分为3组:对照组、氧化应激模型组、抗氧化剂组,试验重复3次。测定妊娠20 d后的子代胎鼠肝脏、肺脏和心脏3个器官中的总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)活力。结果显示,山奈酚显著代偿降低子代胎鼠心、肝、肺相关抗氧化酶的活力(P<0.05),显著降低氧化应激产物的含量(P<0.05)。研究表明,山奈酚对于由三硝基丙酸诱导的亲代小鼠氧化应激模型的子代胎鼠氧化应激情况具有一定的抗氧化作用。

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Caspase-3表达和活性的影响

目的探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达和活性的影响。方法大鼠腹腔注射3-NPA20mg/kg或生理盐水3d后制作局灶性脑缺血再灌注模型,采用免疫印迹技术和荧光测定法观察3-NPA预处理对缺血2h再灌注24hCaspase-3的表达和活性的影响。结果缺血2h再灌注24h3-NPA预处理组Caspase-3表达减弱(P<0.05),活性降低(P<0.05),与对照组比较差异有显著性。结论3-NPA预处理诱导脑缺血耐受与降低Caspase-3活性,进而抑制神经细胞凋亡有关。

3-硝基丙酸致未成熟鼠脑室周围脑白质软化的神经行为学及磁共振成像变化

目的通过脑内定位注射3-硝基丙酸(3-NPA)建立新生鼠脑室周围白质软化(PVL)模型,探讨远期神经行为学和磁共振成像(MRI)变化。方法新生5 d(P5)SD大鼠随机分成实验组(NPA组)与假手术组(PBS组),脑立体定位仪定位于左侧脑室上方胼胝体,分别注入等量3-NPA和PBS,造模后1、2、3、9 d灌注固定取脑,石蜡切片作HE染色;术后不同时间点观察体重、睁眼时间等生长发育情况;P29-30进行神经行为学检测,观察两组大鼠肢体肌力、随意运动、情感行为能力和学习记忆能力;P30行MRI检查。结果NPA组大鼠术后睁眼时间延迟,体重增加高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05);HE染色显示NPA组大鼠P6、P7、P8 NPA组注射3-NPA侧皮质下及脑室周围白质出现不同程度疏松及液化灶,P14时出现同侧脑室明显扩大,PBS组无明显变化;神经行为学检测实验组鼠肢体肌力、随意运动、情感行为能力和学习能力较假手术组减退,评分差异有统计学意义(P<0.05);P30 MRI检查显示NPA组脑内注射侧脑室周围局部有脑组织软化信号改变。结论P5大鼠脑内注射3-NPA制作的脑室周围白质软化模型,能真实地模拟在体病理改变,经神经行为学检测与临床症状相符,MRI检查可显示脑白质损伤的解剖形态学变化,作为诊断PVL的方法具有可行性。