硝基苯氧乙酸和1,4-二羟乙基苯二醚制备方法的改进

用过量的氯乙酸或氯乙醇,反应的pH值控制为9～10,可将硝基苯氧乙酸的产率从50%～60%提高到85%～92%,1,4-二羟乙基苯二醚的产率可达80%。

碱性介质中对硝基苯氧乙醇的稳定性

选用对硝基苯氧乙醇这一芳香醚作为研究对象,研究了它在碱性介质中的醚键裂解情况。试验结果表明,碱的浓度越高、碱性越强、反应温度越高、反应时间越长、亲核试剂的活性越强,对硝基苯氧乙醇越不稳定,醚键断裂的程度越大,同时还发现有溶剂参与的现象。用高效液相色谱仪分析了对硝基苯氧乙醇的转化率。

过氧亚硝基阴离子的细胞代谢及病理损伤作用

过氧亚硝基阴离子（ＯＮＯＯ－）是ＮＯ和Ｏ２－·结合或进一步反应生成的。新近研究发现ＯＮＯＯ－是ＮＯ产生病理损伤作用的主要环节。ＯＮＯＯ－可使酶氧化失活，可导致脂质过氧化，与核酸作用引起ＤＮＡ裂解，作用于线粒体使能量生成障碍。ＯＮＯＯ－是某些疾病情况下导致细胞损伤、能量耗竭和细胞死亡的重要因素。有关ＯＮＯＯ－生成和代谢及其病理损伤作用的研究，已引起广泛关注。

白藜芦醇抗过氧亚硝基及保护DNA作用

利用紫外-可见、荧光光谱法研究了白藜芦醇(resveratrol,Res)与过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite ani-on,ONOO-)的相互作用,利用电泳方法证实了Res能抑制ONOO-引起的DNA损伤作用.结果表明Res与ONOO-之间存在相互作用,并对ONOO-引起的DNA损伤具有明显的保护作用,当Res浓度为0.05 mmol/L时,有近50%的断链DNA恢复为超螺旋态;CO2能显著降低ONOO-引起的DNA单链断裂,并能加强Res的保护作用,当Res浓度为0.05 mmol/L时,对DNA损伤的保护由50%增加到71%.

丹皮酚对过氧亚硝基阴离子致成骨细胞增殖抑制的影响

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO )对体外成骨细胞增殖的影响及丹皮酚 (Pae)对抗ONOO 的作用。方法 :采用改良的淬灭流动反应方法 ,体外制备ONOO 。以不同终浓度加入成骨细胞培养体系中 ,用MTT法观察在不同时相对成骨细胞增殖的影响 ,并用不同终浓度的Pae消除ONOO (10 0 0 μmol/L)对成骨细胞增殖的影响。结果 :低浓度ONOO (5 0～ 2 0 0 μmol/L)对培养的成骨细胞有促增殖作用 ;高浓度ONOO (10 0 0 μmol/L)则明显抑制成骨细胞增殖。Pae(10 - 4～ 10 - 7mol/L)可消除ONOO (10 0 0 μmol/L)对成骨细胞增殖抑制的作用。结论 :低浓度ONOO 促成骨细胞增殖 ,高浓度ONOO 抑制成骨细胞增殖。Pae可消除高浓度ONOO 对成骨细胞增殖的抑制作用。

过氧亚硝基阴离子对离体兔肺动脉反应性变化的影响

探讨过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite,ONOO^-)对离体兔肺动脉反应性变化的影响。用离体血管环技术观察ONOO^-孵育后肺动脉对钙离子载体A23187、ADP、ACh、硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)和苯肾上腺素(phenylephrine,PE)的反应性张力变化。结果显示:(1)ONOO^-孵育后肺动脉对A23187、ADP和ACh引起的舒张反应明显降低,ONOO^-抑制内皮依赖受体依赖或受体非依赖性舒张反应有量效关系;(2)ONOO^-孵育可剂量依赖性抑制肺动脉对SNP的舒张反应;(3)0.5 mmol/L ONOO^-孵育后肺动脉对PE的收缩反应明显增强,而1.0和2.0mmol/L ONOO^-导致肺动脉的收缩反应明显降低;(4)溶剂对肺动脉的反应性无明显影响,dec ONOO^-对PE和ADP的反应性影响不大,但可增强A23187、ACh和SNP的舒张反应。结果表明,ONOO^-可改变离体肺动脉的反应性。

一种新的产生和检测过氧亚硝基的化学发光体系

研究产生和消除过氧亚硝基(Peroxynitriteanion,ONOO?)是自由基生物学和医学的一项紧迫任务。为此,建立了一种新的产生和检测ONOO?的化学发光体系,并评估了检测的最佳条件。该方法为:10mmol/L羟胺与0.5mol/LNaOH、1mmol/L、乙二胺四乙酸二钠(Disodiumethylenediaminetetraacetate,EDTA)反应产生ONOO?,随后用MnO2粉末过滤反应液以除去H2O2,然后在测量管内加入100μL抗氧化剂和860μL0.1mol/L的碳酸盐缓冲液(pH10),再加入40μL过滤后的ONOO?反应液、混匀、延迟10s,测10s化学发光强度。以抗氧化剂茶多酚、抗坏血酸、芦丁和黄芩苷作清除ONOO?的实验。结果表明,本体系是一种灵敏价廉、可靠易行的筛选ONOO?清除剂的新方法。

丹皮酚拮抗过氧亚硝基阴离子致大鼠成骨细胞凋亡的作用

目的探讨丹皮酚拮抗过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对体外培养大鼠成骨细胞凋亡的作用。方法用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,采用淬灭流动反应方法体外制备ONOO-,以1 mm o l/L终浓度加入成骨细胞培养体系,作用30 m in后弃去,继续常规培养12 h,用Hoechst33258染色法及TUNEL法检测成骨细胞的凋亡,并以0.1 mm o l/L丹皮酚消除ONOO-(1 mm o l/L)对大鼠成骨细胞凋亡的影响。结果1 mm o l/L的ONOO-可导致大鼠成骨细胞凋亡;0.1 mm o l/L丹皮酚能拮抗ONOO-(1 mm o l/L)所引起的大鼠成骨细胞凋亡。结论丹皮酚0.1 mm o l/L在体外具有拮抗ONOO-(1 mm o l/L)致大鼠成骨细胞凋亡的作用。

两种筛选玄参中清除过氧亚硝基活性成分的在线检测方法比较研究

建立柱后HPLC-DAD-(Luminol-ONOO^-)-CL(方法 1)和柱前ONOO^--HPLC-DAD(方法 2)两种简单、快速在线检测清除ONOO^-的方法,将这两种方法应用于从玄参中筛选具有清除ONOO^-作用的活性物质,并结合HPLC-ESI-Q-TOF MS/MS对主要的活性成分进行鉴定。方法 1从玄参中共筛选出了P1(decaffeoylacteoside)、P9(acteoside)、I6(6″-O-feruloylharpagide)、P11(cis-acteoside)、P13(angoroside)等5个具有清除ONOO^-作用的活性成分,方法 2从玄参中筛选出了P9和P13两个具有清除ONOO^-作用的活性成分。两种筛选方法各具特点:方法 1需要的仪器系统较为复杂,操作简单检测灵敏度高;方法 2需要的仪器简单,操作相对方法 1繁琐且灵敏度低。但是筛选结果表明,方法 1和方法 2均可以从复杂体系中快速地筛选出具有清除ONOO^-作用的活性物质,这两种方法可以为中药复杂体系中天然ONOO^-清除剂的快速发现提供技术平台。

用ESR检测过氧亚硝基氧化二甲基亚砜产生的甲基自由基

NO在体内具有重要的生物功能,如能防治血小板的凝聚,它是内皮细胞松弛因子(EDRF),又是神经传导的逆信使,在学习和记忆过程起着重要作用.但是它还是自由基,因而它化学性质活泼,反应性强,具有细胞毒性作用,在免疫杀伤过程中发挥着重要作用.最近研究发现,细胞在产生 NO 的同时,也产生超氧阴离子自由基.NO和超氧阴离子自由基具有非常高的反应速率常数(6.4×10~9mol^(-1)·s^(-1)),反应形成过氧亚硝基(ONOO^-).这是一种氧化性极强的物质,可氧化细胞膜脂和蛋白质的硫氢基,导致细胞损伤和疾病的发生.在碱性条件下,过氧亚硝基比较稳定,一旦质子化,立即分解产生类羟基和NO_2自由基.试验表明,在很多病理状态发生此反应,因而对过氧亚硝基的研究非常引人关注.但是过去的研究多是用ONOO^-氧化二甲基亚砜(DMSO)产生的醛类物质作为检测对象进行研究的.而ONOO^-损伤细胞成分很多是通过自由基机理的.还没有发现直接检测ONOO^-氧化反应产生自由基的报道.本文用自旋捕集技术直接捕捉到了 ONOO^-氧化 DMSO 产生的自由基.并且通过波谱解析和计算机模拟证明是甲基自由基.还利用这个自由基产生体系研究了一些抗氧化剂对甲基自由基的清除作用和对ONOO^-氧化活性的抑制作用.

过氧亚硝基阴离子诱导离体兔肺动脉舒张反应的特性

实验用离体血管环张力测定技术 ,观察过氧亚硝基阴离子 (ONOO )对离体预收缩的兔肺动脉的舒张反应、肺动脉内皮细胞对舒张反应的影响 ,并初步探讨其病理意义。结果显示 ,ONOO 可剂量依赖性引起离体预收缩兔肺动脉舒张。分解的ONOO 也有舒张作用 ,但其舒张效应明显低于ONOO 的作用。比较观察表明 ,ONOO 的舒张效应显著低于硝普钠 (SNP)和乙酰胆碱 (ACh)。与内皮完整的肺动脉比较 ,ONOO 对去内皮肺动脉的舒张作用明显增强 ,剂量依赖性舒张反应曲线明显左移。肺动脉对ONOO 重复作用时的舒张反应有递减趋势。在本实验条件下 ,ONOO 舒张前后的肺动脉 ,对ACh的舒张反应无明差异。结果表明 ,ONOO 对肺动脉的舒张作用较弱 ,此作用受到内皮细胞的抑制性调节并有快速去敏性。

过氧亚硝基阴离子致大鼠肺微血管壁通透性增高的研究

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)对肺微血管内皮屏障功能的影响和在急性肺损伤发生中的意义。方法 :向SD大鼠气管内推注不同浓度的ONOO-、分解ONOO-或溶剂 2h后 ,检测肺微血管壁通透性变化和肺组织病理学变化 ,并检测ONOO-引起正常肺匀浆MDA含量变化。结果 :ONOO-推入气管后 ,肺系数、肺湿干重比以及肺含水量和伊文思兰含量明显增高呈现剂量效应关系 ;并可导致肺泡明显萎陷、肺泡壁毛细血管明显扩张充血及局灶性出血 ,内皮细胞肿胀、核深染及脱落。ONOO-造成正常肺匀浆MDA含量增加。结论 :外源性ONOO-气管推注后可导致明显的肺微血管内皮屏障功能障碍 ,提示肺内源性ONOO-生成增多时可能参与介导急性肺损伤的发生。

硝基咪唑类PET肿瘤乏氧显像剂的研究总结和展望

乏氧显像剂能选择性的滞留在乏氧组织或细胞中。随着正电子发射计算机断层显像(PET)技术的发展,PET肿瘤乏氧显像可无创性评估实体瘤的乏氧状态,对肿瘤的治疗指导、疗效评价和预后判断具有重要的临床应用价值。^(18)F-硝基咪唑(^(18)F-FMISO)是目前广泛用于临床研究的硝基咪唑类乏氧显像剂,然而其存在某些缺点,新的硝基咪唑类乏氧显像剂正在广泛研究。本文就近年来正电子核素标记的硝基咪唑类肿瘤乏氧显像剂的研究进展进行简要概述。

过氧亚硝基-鲁米诺化学发光体系的改进

建立了一个测定过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)化学发光的改进体系 ,测试了某些抗氧化剂清除ONOO-的作用 ,其体系的组成和启动发光的程序如下 :向pH 10 5碳酸缓冲液配的 0 0 1mol/L浓度NaN3 溶液通O330s ,取其 80 0 μl原位注入含有 10 0 μl水配样品和 10 0 μl的 0 0 0 1mol/L鲁米诺溶液中 ,启动化学发光(chemiluminescence ,CL) ,立即测定每 6秒的脉冲数 (CP6S) ,连续测定 10～ 30次 .根据实际需要 ,选其某一次的CL强度作为评判指标 ,对比抗氧化剂的活性 .该发光体系灵敏、简便、且较稳定 ,最低可检测限为 8 74μmol/L的ONOO-量 ,线性范围为 8 74～ 74 0 4μmol/L .批内变异系数 3 35 % (n =10 ) ,批间变异系数 5 5 2 % (n =10 ) .测得维生素C (Vit.C )、茶多酚 (EGCG)、原花菁素、硫脲皆有抑制CL ,即清除ONOO-的作用 .

抗过氧亚硝基阴离子损伤的三种途径

生物系统中产生的过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)具有强氧化性 ,能够损伤许多生物大分子 ,具有细胞毒性。

过氧亚硝基阴离子对气道上皮细胞的损伤作用

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)对气道上皮细胞的损伤作用。方法 :在培养的大鼠气道上皮(RTE)细胞观察外源性给予ONOO-对RTE细胞线粒体呼吸、8-羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)水平、乳酸脱氢酶 (LDH)释放及凋亡细胞百分率的影响。结果 :ONOO-(0 2 5 - 1mmol/L)呈剂量依赖方式抑制RTE细胞线粒体呼吸功能、增高LDH释放率。并呈剂量依赖性引起 8-OHdG水平升高。不同浓度 (0 2 5mmol/L、0 5mmol/L及 1mmol/L)ONOO-均以时间依赖方式引起RTE细胞凋亡。结论 :ONOO-可引起培养的RTE细胞发生凋亡和坏死。低浓度的ONOO-损伤RTE细胞以凋亡为主 ;高浓度的ONOO-可能主要引起RTE细胞发生坏死。

过氧亚硝基阴离子在肝纤维化形成中的作用

目的:探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在肝纤维化形成过程中所起的作用。方法:采用复合因素 建立肝纤维化(HF)动物模型的同时,用一氧化氮合酶抑制剂L-NNA(20mg·kg-1·d-1)给大鼠灌胃(HF+NNA),于实 验4周末测定血浆脂多糖(LPS)、NO2-／NO3-含量;采用免疫组化的方法检测肝组织硝基酪氨酸(NT)的表达;用VG 染色观察肝组织纤维化程度。结果:在HF+NNA组血浆NO水平明显低于HF组(P<0．01),HF组NT表达最强,纤 维化程度最严重。结论:ONOO-能促进肝纤维化的发展。

镁硅玉人工髋关节假体周围骨溶解与诱导型一氧化氮合酶、过氧亚硝基阴离子的关系

[目的]观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在假体周围各区的表达和分布变化,各区iNOS和ONOO-表达与骨溶解程度之间的关系。[方法]临床选取6例镁硅玉人工全髋关节翻修术,手术中按Delee-Charnley髋臼分区法和Gruen股骨分区法,取出松动假体周围各区的假体-骨间界膜,免疫组化法检测iNOS和ONOO-体内生成标志物硝基酪氨酸(NT)的表达,同时以术前X线片,区分假体周围非骨溶解区和骨溶解区。分析并比较iNOS和NT在各个分区中的阳性表达,与骨溶解程度的关系。[结果]髋臼侧Ⅲ区的iNOS阳性细胞率高于Ⅰ、Ⅱ区,股骨侧1、2、6、7区染色阳性细胞率高于3、4、5区(P<0·05);髋臼侧Ⅲ区的NT阳性细胞率明显高于Ⅰ、Ⅱ区,股骨侧阳性细胞率由高到低依次为1、7区,2区,6、4、3、5区(P<0·05);骨溶解区界膜组的iNOS和NT阳性细胞率均明显高于非溶骨区界膜组和OA滑膜组(P<0·01)。[结论]假体周围iNOS和ONOO-的表达具有一定规律性,并与骨溶解程度密切相关。iNOS和ONOO-的异常表达可能是磨损颗粒造成界面骨重建受阻和骨溶解的关键环节之一。

2,6-二氨基-3,5-二硝基-1-氧吡嗪合成工艺优化

以2，6-二氯吡嗪为原料，经过取代、硝化、氨化、氧化4步反应。合成出钝感含能材料LLM-105。经元素分析、红外光谱、质谱、核磁共振对合成产物进行了结构表征，确认为目标产物，总产率大于36％，纯度可达到98％以上。研究了合成过程中甲醇钠用量、硝酸硫酸体积比、氨水用量、三氟乙酸与双氧水的体积比等因素对LLM-105总产率的影响，并优化了合成条件，确定了最佳反应条件。取代反应：在回流条件下反应2h，甲醇钠用量为120％；硝化反应：在温度60～70℃。反应4h条件下，硝酸硫酸体积比为0．83；氨化反应：在温度60℃，反应2h条件下，氨水用量为200％；氧化反应：室温条件下氧化24h。三氟乙酸与双氧水的体积比为1：10。