硝基油酸对肾急性缺血再灌注模型小鼠肾的保护作用及其机制

目的探讨硝基油酸(OA-NO2)对肾急性缺血再灌注(I/R)模型小鼠肾的保护作用。方法 C57小鼠分为假手术、I/R模型对照、I/R+OA-NO2500μg·kg-1和I/R+油酸(OA)500μg·kg-1组。I/R小鼠使用乙醚麻醉后,开腹采用夹闭双侧肾动脉30 min,去除血管夹,再灌注24 h制备肾I/R模型。I/R+OANO2和I/R+OA组在去除血管夹后分别ip给予OA-NO2和OA 500μg·kg-1,每6 h注射1次。假手术和I/R模型组ip给予乙醇0.8 ml·kg-1。24 h后处死小鼠,取血和肾组织,用全自动生化检测仪检测小鼠血浆尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,HE染色检测肾组织病理改变,ELISA检测血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,实时PCR检测肾组织细胞黏附分子1(ICAM-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶胞浆亚基(p47)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶催化亚基(gp91)基因表达,Western蛋白质印迹法检测肾组织TNF-α和IL-1β蛋白表达,ELISA检测肾组织丙二醛(MDA)含量。结果 I/R模型组小鼠血浆BUN和Cr水平较假手术组明显增高(P<0.01);OA-NO2处理后,与I/R模型组比较,血浆BUN水平降低36%(P<0.01),Cr水平降低44%(P<0.01);I/R+OA组BUN和Cr水平无明显变化。I/R模型组小鼠肾组织出现肾小管上皮细胞坏死、细胞结构消失、肾小管管腔扩张和肾小管管腔管型堵塞等改变,血浆TNF-α浓度、肾组织ICAM-1,IL-1β,p47和gp91mRNA表达、TNF-α和IL-1β蛋白表达及MDA含量均较假手术组明显升高(P<0.01);应用OA-NO2处理后,与I/R模型组比较,肾组织病理改变减轻,肾小管管腔扩张明显改善,未发现明显的肾小管管腔管型堵塞;血浆TNF-α浓度由I/R模型组的(590±73)ng·L-1降低至(259±71)ng·L-1(P<0.01),肾组织ICAM-1,IL-1β,p47和gp91基因表达以及TNF-α和IL-1β蛋白表达降低(P<0.01),MDA含量由I/R模型组的(3.6±0.7)mol·g-1组织降低至(1.8±0.4)mol·g-1组织(P<0.01);应用OA处理后,上述指标与I/R模型组比较均无明显差异。结论 OA-NO2对肾I/R导致的急性肾损伤具有明显的治疗作用,其作用机制可能与抗炎通路有关。

硝基油酸经Nrf2/HO-1通路对放射性损伤大鼠颌下腺上皮细胞的抗氧化损伤作用

目的:硝基油酸(Nitro-oleic acid,OA-NO2)能否经Nrf2/HO-1通路对放射性损伤大鼠颌下腺上皮细胞发挥抗氧化损伤作用。方法:体外培养乳鼠3 d颌下腺上皮细胞经电子直线加速器建立放射性损伤模型,CCK-8法筛选OA-NO2作用24 h对放射性损伤细胞模型最佳增殖浓度,按实验目的分为正常细胞组(NG)、放射细胞组(RG)、放射细胞+硝基油酸组(R+ONG)、放射细胞+硝基油酸+抑制剂组(R+ON+BRG)、放射细胞+抑制剂组(R+BRG);各组细胞培养24 h后Western blot检测Nrf2、HO-1及NQO1蛋白的表达及活性氧试剂检测活性氧的产生。结果:4μmol/L OA-NO2作用24 h对放射性损伤颌下腺上皮细胞增殖率促进作用最佳;各组细胞培养24 h后,与RG组比较,R+ONG组中Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达明显升高,活性氧的产生明显降低(P<0.05);与R+ONG组比较,R+ON+BRG组中Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达明显降低,活性氧的产生明显升高(P<0.05)。结论:OA-NO2可能经Nrf2/HO-1通路对放射性损伤大鼠颌下腺上皮细胞发挥抗氧化损伤作用。