圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶的分离纯化及酶学性质

圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶基因naoA在大肠杆菌中获得了成功表达 ,从含有重组质粒pNA1 0 1 (pET2 3b∷naoA)的工程菌株BL2 1 (DE3 )中分离纯化了硝基烷类氧化酶 ,SDS PAGE检测为均一。对纯酶进行了酶学性质及动力学研究。底物为 1 硝基丙烷、2 硝基丙烷和硝基乙烷时 ,在 0 4mol L的磷酸缓冲液中 ,酶的最适反应pH值为 7～ 8,最适反应温度为48℃～ 5 6℃。室温保存 6d后 ,酶的活性保持了 43 3 % ,但对 6 0℃以上的高温敏感。硫醇化合物如巯基乙醇、还原型谷胱甘肽不同程度地抑制酶活性 ,特别是NADH ,其浓度为 1mmol L时 ,酶活性几乎全部丧失。以 1 硝基丙烷为底物时 ,NaoA的Km 为 3 5 7mmol L ,Vmax 为0 1 99μmol (μg .min) 。