硝酸纤维素膜的发展应用研究

重点介绍了硝酸纤维素膜在医药卫生检测试剂上的研究应用,简述了硝酸纤维素膜的国内外发展情况;指出了我国硝酸纤维素膜发展存在的问题和市场前景,并提出建议。

硝酸纤维素膜的制备与应用研究进展

硝酸纤维素膜,俗称NC膜,是一种极具发展前景的材料,具有良好的高蛋白结合能力、高机械强度、耐化学腐蚀性、耐高温以及粘接强度高等优点,本文主要介绍硝酸纤维素膜的制备、应用以及国内外发展情况,最后对未来发展做出了展望。

硝酸纤维素膜在细胞培养和染色中的应用

目的提供一种新的用于细胞培养和病理技术的支持介质。方法应用硝酸纤维素膜培养细胞和病理染色并与常规方法培养细胞的比较。结果细胞生长良好,形态正常,染色后结构清晰,与常规玻璃培养的细胞无明显差异。结论硝酸纤维素膜具有良好的透光性及化学稳定性,无细胞毒性作用,同时对细胞有较好的亲合性,可以替代玻片,较玻片具有广阔的应用前景。

用硝酸纤维素膜亲和法纯化抗体

介绍一种改进的纯化抗体方法。将抗原蛋白固定在硝酸纤维素膜上,然后对抗体进行亲和纯化,能快速有效获得高特异性抗体。

大肠癌细胞在硝酸纤维素膜上的培养及染色的观察

目的寻找一种既适于细胞培养和光镜下观察,而且具有良好柔韧度及化学稳定性、可替代玻片作为实验室细胞培养载体的支持介质。方法硝酸纤维素膜经前期处理后,用于培养细胞和病理染色并与常规方法培养细胞的比较。结果肉眼观察:染色后的NC膜平展,透明,有浅紫红色的背景。镜下观察:NC膜透明,膜上培养的细胞轮廓清晰,形态规整。细胞形态、数量与对照组玻片培养的细胞无明显差异。HE染色的细胞胞核为蓝色,胞浆红色,膜背景着色较浅。结论经过处理后的NC膜,对细胞无毒副作用,可用于细胞培养。在NC膜上养成的细胞依然保持细胞的正常形态及数量,具有良好的透光性,可满足光镜观察需求。

硝酸纤维素膜免疫吸附法纯化鸡IgM的研究

以抗鸡ＩｇＭ单抗包被硝酸纤维素膜，小牛血清封闭非结合点，吸附鸡ＩｇＭ后，以硫氰酸钾解吸．收集解脱液，透析后即为纯化ＩｇＭ．其比活性为８２．３％，每次可获得１．２５ｍｇＩｇＭ纯品．膜可反复使用．

3株肝细胞在硝酸纤维素膜界面上生长的初步研究

目的在体外培养的条件下,观察3株肝细胞在硝酸纤维素膜材料上的生长情况,研究膜的细胞相容性及理化性能的改变,初步探讨硝酸纤维素膜作为一种新的组织工程膜材料用于构建生物人工肝生物反应器中细胞的载体材料的可行性。方法将生物人工肝常用的细胞:肝肿瘤细胞HepG2、C3A、永生化HL7702细胞株分别接种在浸泡处理后的硝酸纤维素膜片上常规培养,在普通光学显微镜以及扫描电镜观察肿瘤细胞在此种膜上的贴壁情况和细胞形态。同时行免疫细胞化学染色和细胞功能检测。结果细胞经常规染色、透明处理后,在光镜下观察到膜上生长的细胞保持了较好的增殖状态及细胞形态;免疫细胞化学染色结果表明,膜上细胞特异性标志物表达良好。培养液上清的生化检测表明培养细胞的主要分泌、代谢功能与常规培养无明显差异;扫描电镜下膜表面细胞呈集落式三维生长,增殖明显。结论硝酸纤维素膜能促进细胞黏附,并且与细胞有良好的相容性。硝酸纤维素膜作为一种良好的细胞黏附生长介质的同时,还具有可以在其上面直接进行相关培养物观察和检测的优点。

硝酸纤维素膜微粒ELISA方法的建立

本文报道硝酸纤维素膜微粒ＥＬＩＳＡ（ｎｉｔｒｏｃｅｌｕ－ｌｏｓｅｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅＥＬＩＳＡ，ＮＣＭＰＥ）方法，该法可用含表面活性剂的混合抗原定量测试针对其中某一组分的抗体，具体如下。１方法１．１混合抗原直接测试按文献报导方法［１］，将１．２...

光激发下硝酸纤维素膜降解对乙酰氨基酚的光解影响

硝酸纤维素膜(NCM)作为一种新型环保材料,在光激发下可产生强氧化性的羟基自由基,促进污染物降解.为研究NCM对对乙酰氨基酚(APAP)的光解效果及影响因素,采用模拟太阳光源,考察了3种反应体系、光谱区间、APAP浓度、光照强度、温度、溶液pH以及水体成分等因素对光解效果的影响.结果表明:APAP在纯水中几乎不发生光解,而在NCM体系中其光解速率常数为2.85×10^(−3) min^(−1);模拟太阳光源的UVA、UVB和可见光(Vis)波段均能促进APAP的光解,其中UVA波段对APAP光解的贡献最大.APAP的光解速率与其浓度呈负相关,低浓度APAP的光解效果更好.在一定范围内,APAP光解速率与光照强度呈正相关,且随反应温度的增加而增大.弱碱性环境更有利于APAP的光解,当pH=8.0时,APAP降解率为73.72%,降解效果最佳.水体中NO_(3)^(−)、Cl^(−)、SO_(4)^(2−)、CO_(3)^(2−)、Mg^(2+)、Ca^(2+)和可溶性有机质(DOM)浓度的增加可以促进NCM对APAP的光解.研究显示,光激发下利用NCM降解APAP反应迅速且效果显著,可为APAP的去除提供一种新方法.

一种基于硝酸纤维素膜的新颖便捷的芯片对循环肿瘤细胞的高效捕获

开发了一种新颖便捷的循环肿瘤细胞(CTC)捕获芯片用于癌细胞的分离和检测。CTC芯片以硝酸纤维素膜为基底制备,利用其对蛋白质的超强吸附能力来结合抗体,简便高效,便于将来大规模的推广应用。以非小肺癌细胞NCI-H1650为目标靶细胞,证明了CTC芯片对癌细胞具有很高的捕获效能。向1 mL正常人血液中加入500个癌细胞模拟病人血样的分析中成功检测到了182个癌细胞,预示了CTC芯片将来在临床应用上的巨大潜力。

硝酸纤维素膜上培养SW480和SW1116细胞的特殊染色及结果观察

目的观察硝酸纤维素膜在体外培养细胞后进行特殊染色时,膜的理化稳定性和背景着色情况以及细胞形态和染色状况,以期拓展硝酸纤维素膜作为细胞培养介质在细胞培养技术中新的应用。方法将人结肠癌细胞接种于常规灭菌和浸泡处理过的硝酸纤维素膜上,CO2培养箱培养细胞后,进行Giemsa染色和免疫组织化学染色、并经透明处理后,观察膜的平整度及背景染色情况,在光镜下观察硝酸纤维素膜上生长的细胞染色结果和癌基因原位表达状况,并与载玻片培养、染色后的细胞爬片作比较。结果硝酸纤维素膜细胞爬片经染色、透明后呈略带背景着色的透明状态:Giemsa染色膜片背景较浅,呈淡蓝色;免疫组化染色膜片呈蓝紫色。镜下观察:细胞轮廓清晰,Giemsa染色结果较盖玻片对照组染色结果差异明显,细胞核和细胞浆均染为蓝色,胞浆未呈现正常的粉红色着色。免疫组织化学对细胞角蛋白染色结果理想,结肠癌细胞胞浆见棕黄色阳性颜色;两者背景着色对结果观察影响较小,在高倍镜下观察时影响更小。结论在硝酸纤维素膜上培养的细胞可以直接进行Giemsa染色和免疫组织化学染色;膜透明处理后具有良好的透光性,可满足光镜观察需求;细胞的目的基因原位检测染色结果理想。

硝酸纤维素膜介质对鼻咽癌和胰腺癌细胞株的细胞相容性

目的观察3株鼻咽癌细胞和1株胰腺癌细胞在硝酸纤维素膜材料表面的生长情况,探讨硝酸纤维素膜材料作为一种细胞生长支架材料用于鼻咽癌细胞和胰腺癌细胞培养的可行性。方法将3株鼻咽癌细胞和1株胰腺癌细胞培养于硝酸纤维素膜上,HE染色并观察细胞生长情况;并且在扫描电镜下观察鼻咽癌细胞在此种膜上的贴壁情况、细胞生长形态,同时收集细胞培养液上清检测培养细胞LDH渗出量。利用免疫细胞化学染色检测膜上胰腺癌细胞表达CA199、CEA等肿瘤细胞标志物。结果膜透明处理后,在光镜下可以观察到这4株细胞在硝酸纤维素膜表面较好地生长,膜能促进细胞黏附和生长;通过检测细胞的增殖状态和肿瘤细胞标志物的表达,发现细胞可呈集落状生长且增殖明显,细胞主要肿瘤标志物阳性表达。结论硝酸纤维素膜不仅具有良好的生物相容性,能够有效地支持鼻咽癌和胰腺癌细胞在其表面的贴附和生长,同时还可以在其上面进行诸如形态学观察及细胞功能检测,有望作为一种新的组织培养介质和细胞贴附的支架材料加以应用。

硝酸纤维素膜印迹法测定对虾微量血淋巴碱性磷酸酶相对活性

用硝酸纤维素膜(NCM)印迹法测定日本对虾(Penaeusjaponicus)血淋巴碱性磷酸酶(ALP)的相对活性,以标准ALP梯度稀释液为参照,比较NCM印迹法与ALP测定试剂盒法对标准ALP梯度液的测定结果。数据回归分析显示,NCM印迹法所得结果同标准ALP梯度稀释液活性的回归关系极显著(P<0.01);用NCM印迹法测定ALP相对活性的灵敏度为试剂盒的100倍。分别用NCM印迹法与ALP测定试剂盒测定对虾血淋巴的ALP相对活性,测得结果呈强直线相关性(P<0.01),说明用NCM印迹法测定对虾血淋巴ALP相对活性具可行性。

多株消化道肿瘤细胞在硝酸纤维素膜界面生长的初步研究

目的观察多株消化道肿瘤细胞在硝酸纤维素膜界面上的生长情况,探讨硝酸纤维素膜作为细胞培养载体材料的可行性。方法将大肠癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞株等肿瘤细胞接种在硝酸纤维素膜界面培养,培养结束后在光学显微镜以及扫描电镜下观察细胞形态,免疫组化法检测肿瘤细胞标志物,对比检测实验组和六孔板对照组培养液上清中两者乳酸脱氢酶漏出率差异,评价硝酸纤维素膜的细胞相容性。结果膜染色透明处理后,在光学显微镜下可以观察到膜表面细胞保持较好的增殖状态和细胞形态;肿瘤细胞主要标志物均呈阳性表达;硝酸纤维素膜及膜上细胞的扫描电镜表征:该膜呈现孔径均一的海绵样空间立体结构,膜表面生长的细胞呈不规则形态且有伪足形成。结论硝酸纤维素膜具有良好的细胞相容性,可以作为一种新的细胞生长载体材料加以应用。

硝酸纤维素膜为HBsAg载体消毒试验法的研究

以 ４种消毒剂进行对硝酸纤维素膜上 ＨＢｓＡｇ消毒的研究。结果，对该膜上 ＨＢｓＡｇ的破坏效果，与悬液中 ＨＢｓＡｇ者一致。 ０．５％过氧乙酸、 ０．５％碘伏或 ２．０％碱性成二醛作用 ６０ ｍｉｎ，均可将效价≤１： ４０００的 ＨＢｓＡｇ破坏， ０．１％苯扎溴铵则不能。以硝酸纤维素膜作 ＨＢｓＡｇ载体，用免疫酶斑点法检测，结果直观，方法简便、易行，因ＨＢｓＡｇ吸附牢固，可用冲洗法去除残留消毒剂。

在活化硝酸纤维素膜上的R-藻红蛋白荧光免疫测定

目的提高普及型藻胆蛋白荧光标记诊断试剂盒的检测灵敏度。方法采用化学方法活化处理硝酸纤维素膜 ,以 R-藻红蛋白为荧光标记物 ,对比活化膜与未经处理的硝酸纤维素膜用于双抗体夹心法检测乙型肝炎表面抗原 (HBs Ag)的效果及稳定性。结果普通膜和活化膜与进口 EL ISA试剂对比 ,12 0份标本的阴阳性符合率达10 0 % ,特异性好 ;活化膜的检测灵敏度高于普通膜。

溶剂及凝胶浴对硝酸纤维素膜结构的影响

利用丙酮(AC)、二甲基乙酰胺(DMAc)和二甲基亚砜(DMSO)三种不同溶剂制备硝酸纤维素铸膜液。考察了溶剂的性质及凝胶浴组成对膜结构的影响,利用扫描电镜表征了膜的表面及截面结构,通过成膜过程的热力学和动力学分析解释了不同膜结构的形成原因。结果表明:溶剂的种类及凝胶浴中溶剂的含量对膜结构的影响很大,其变化规律也是不同的。

硝酸纤维素膜上化学药物交联抗原在斑点酶免疫法中的应用

在硝酸纤维素膜上用４０％酒精直接交联方式和自然渗滤吸附方式固定抗原后，分别作斑点酶免疫法检测血清中的ＨＣＭＶＩｇＧ。结果显示：前者的重复性（ＣＶ＝６７％）优于后者（ＣＶ＝２５５％）。酒精交联抗原斑点酶免疫法与ＥＬＩＳＡ法比较，血清中ＨＣＭＶＩｇＧ检测的一致率为９３２％，阳性血清、弱阳性血清和阴性血清的检测率无显著性差异。以ＥＬＩＳＡ法为金标准，酒精交联抗原班点酶免疫法的敏感性、特异性、诊断指数和诊断效率分别为１００％、９６６％、１９６６％和９８７％，这些质量指标均达到实际应用标准。酒精交联抗原操作简便，快速，重复性好，节省材料，质量指标高。