硝酸纤维素膜免疫吸附法纯化鸡IgM的研究

以抗鸡ＩｇＭ单抗包被硝酸纤维素膜，小牛血清封闭非结合点，吸附鸡ＩｇＭ后，以硫氰酸钾解吸．收集解脱液，透析后即为纯化ＩｇＭ．其比活性为８２．３％，每次可获得１．２５ｍｇＩｇＭ纯品．膜可反复使用．

硝酸纤维素膜上化学药物交联抗原在斑点酶免疫法中的应用

在硝酸纤维素膜上用４０％酒精直接交联方式和自然渗滤吸附方式固定抗原后，分别作斑点酶免疫法检测血清中的ＨＣＭＶＩｇＧ。结果显示：前者的重复性（ＣＶ＝６７％）优于后者（ＣＶ＝２５５％）。酒精交联抗原斑点酶免疫法与ＥＬＩＳＡ法比较，血清中ＨＣＭＶＩｇＧ检测的一致率为９３２％，阳性血清、弱阳性血清和阴性血清的检测率无显著性差异。以ＥＬＩＳＡ法为金标准，酒精交联抗原班点酶免疫法的敏感性、特异性、诊断指数和诊断效率分别为１００％、９６６％、１９６６％和９８７％，这些质量指标均达到实际应用标准。酒精交联抗原操作简便，快速，重复性好，节省材料，质量指标高。

抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli L-门冬酰胺酶研究

用重组E.coliL门冬酰胺酶免疫家兔,DEAE纤维素柱层析纯化IgG,采用二步戊二醛交联法将辣根过氧化物酶标记抗体,建立抗体夹心酶联免疫吸附法,测定大鼠血浆中重组E.coliL门冬酰胺酶浓度。本测定方法的线性范围为1～64U/L,灵敏度为0.4U/L。建立的抗体夹心酶联免疫吸附法测定大鼠血浆中重组E.coliL门冬酰胺酶具有良好的精密度、回收率、灵敏度和特异性。

硝酸纤维素膜印迹法测定对虾微量血淋巴碱性磷酸酶相对活性

用硝酸纤维素膜(NCM)印迹法测定日本对虾(Penaeusjaponicus)血淋巴碱性磷酸酶(ALP)的相对活性,以标准ALP梯度稀释液为参照,比较NCM印迹法与ALP测定试剂盒法对标准ALP梯度液的测定结果。数据回归分析显示,NCM印迹法所得结果同标准ALP梯度稀释液活性的回归关系极显著(P<0.01);用NCM印迹法测定ALP相对活性的灵敏度为试剂盒的100倍。分别用NCM印迹法与ALP测定试剂盒测定对虾血淋巴的ALP相对活性,测得结果呈强直线相关性(P<0.01),说明用NCM印迹法测定对虾血淋巴ALP相对活性具可行性。

酶联免疫吸附反应的技术进展及应用

以常规的酶联免疫吸附法为基础,不断改进,形成了多种酶联免疫吸附法,如模块化ELISA,双位点一步法,捕获法测IgM抗体,生物素、亲和素系统,斑点酶链免疫吸附试验,硝酸纤维素膜微粒ELISA等方法。酶链免疫吸附法在医药,食品加工业,农牧渔业等领域有着广泛的应用:如乙型肝炎,莱姆病,急性心肌梗死的早期诊断,定量检测内毒素,HIV抗体初筛,SARS病毒的快速检测;检测食品中的毒素,残留农药,微生物及其它成分;检测香蕉有关病毒,小麦黄花叶病毒,棉花黄萎病菌毒素,转Bt基因抗 虫棉,检测水产品中氯霉素的残留量,猪细小病毒(PPV)血清抗体,禽脑脊髓抗体等。

转Bt抗虫基因植物中杀虫蛋白的酶联免疫检测技术研究 Ⅲ.酶联免疫(ELISA)间接法检测Bt杀虫蛋白研究

采用ELISA间接检测法,研究了2种酶标羊抗兔抗体(辣根过氧化物酶与碱性磷酸酶)和2种检测载体(聚苯乙烯多孔板和硝酸纤维膜)对检测灵敏度和样本检测效果的影响.结果表明,在采用纯的杀虫晶体蛋白进行灵敏度检测时,2种酶标抗体的测定结果非常相近,无明显差别,灵敏度可达7.8～15.6 ng.但在检测植物样本时,不同酶标抗体则存在差异.表现为碱性磷酸酶标记的抗体优于辣根过氧化物酶标记的抗体.这主要是由于植物样本中有内源过氧化物酶所致.用硝酸纤维素膜和聚苯乙烯多孔板作载体进行检测纯的Bt杀虫蛋白的效果二者相当.但检测植物样本时,植物中的叶绿素对Dot-ELISA的干扰很大,准确性差.本研究所制备的Bt杀虫蛋白抗体具有高的特异性.

两种方法检测血清抗磷脂酶A2受体抗体在膜性肾病中的应用分析

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测血清抗磷脂酶A2受体抗体(抗PLA2R抗体)在膜性肾病(MN)中的阳性率,分析两种方法在MN的诊断效能,为临床MN的诊治提供特异度更高的实验指标。方法选取该院肾内科就诊行肾病理活检并确诊的MN患者31例,对照组50例包括该院住院自身免疫性疾病及肾病综合征、肾功能不全患者38例及健康体检者共12例,收集血清同时进行以上两种方法检测,分析两种方法在MN中的诊断效能,并分析其对MN的诊断一致性。结果 MN组中,ELISA法及IIF法检测结果均为阳性17例,两种方法分别显示阳性和阴性各1例,两种方法同时阴性12例,两种方法检测阳性率为58.06%(18/31);对照组50例均为阴性,阳性率为0.00%(0/50)。两种方法检测抗PLA2R抗体阳性率在MN组和对照组间比较,差异有统计学意义(χ~2=37.32,P<0.05)。两种方法诊断MN的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率指标依次为58.06%(18/31),100.00%(50/50),100.00%(18/18),79.37%(50/63),83.95%(68/81);两种方法单独检验与联合检验对MN的诊断性能比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA法在MN组及对照组中抗PLA2R抗体水平分别为45.42(2.00,760.40)及2.00(2.00,3.21)RU/mL,两组间抗体水平比较,差异有统计学意义(Z=-5.345,P<0.05)。结论 ELISA法及IIF法检测血清抗PLA2R抗体在MN诊断中具有较高的特异度与准确率,可作为MN诊断,尤其是特发性MN及无法行肾活检患者的必要和特异性血清学检测指标。

15d—PGJ2对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞环氧化酶-2和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的研究15d-PGJ2对类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)表达的影响。方法分离并培养RA患者及正常对照者的滑膜成纤维细胞，用15d-PGJ2处理RA患者的滑膜成纤维细胞。用硝酸酶还原法和酶联免疫吸附法分别检测滑膜细胞培养上清液中NO和PGB的水平。用半定量RT—PCR检测15d-PGJ2处理及对照组滑膜细胞中COX-2和iNOS mRNA的表达。结果(1)RA患者滑膜成纤维细胞中COX-2和iNOS mRNA的表达均明显高于正常对照组(P<0．01)；且RA滑膜细胞产生NO和PGB的水平也高于对照组(P<0．01)。(2)15d-PGJ2干预后可使RA滑膜成纤维细胞COX-2和iNOS的表达显著性降低(P<0．05)；同时伴有滑膜细胞产生NO和PGB量的下降(P<0．05)。结论15d-PGJ2可下调RA滑膜成纤维细胞环氧化酶-2和诱导型一氧化氮合酶的表达及降低滑膜细胞产生NO和PGB的水平。

ELISA法与免疫膜条法检测抗MDA5抗体、抗TIF1γ抗体的比对分析

目的比较酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫膜条法检测抗黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)抗体和抗转录中介因子1γ(TIF1γ)抗体结果的差异性。方法选取日本MBL公司生产的抗MDA5抗体和抗TIF1γ抗体试剂盒(ELISA法)与德国欧蒙公司抗肌炎抗体谱IgG检测试剂盒(免疫膜条法),同时检测180例皮肌炎血清样本中的抗MDA5抗体和抗TIF1γ抗体,比较这两种方法的差异性。结果两种方法检测到的两种抗体阳性率,差异均无统计学意义(P>0.05)。两种方法检测结果的一致性有统计学意义(P<0.001),但一致性一般(抗MDA5抗体:Kappa值=0.660;抗TIF1γ抗体:Kappa值=0.642)。结论 ELISA法和免疫膜条法检测抗MDA5抗体和抗TIF1γ抗体的一致性程度一般。免疫膜条法有待进一步改善,以提高检测的准确性。

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65重组抗原酶联免疫吸附法的建立与两种方法的比较分析

目的用我们研制的一种新人巨细胞病毒(HCMV)重组被膜磷蛋白pp65为抗原,建立快速、简便和特异的检测HCMVIgM的间接酶联免疫吸附法(RECELISA)。方法用自行设计、表达的新的HCMVpp65重组抗原,建立RECELISA,并检测100份临床疑似为HCMV感染者血清中HCMVIgM,同时与全病毒为抗原的间接ELISA法(简称全病毒ELISA法)和美国BioCheck试剂盒(简称BioCheck法)检测结果进行比较。结果RECELISA法重组抗原最适量为3.5μg/孔,HRP标记二抗为1∶800,血清稀释度为1∶100;稳定性试验阳性变异系数(CV)为9.5%,重复性试验平均CV值:批内CV4.5%,批间CV9.6%。RECELISA法、全病毒ELISA法和BioCheck法检测HCMVIgM的阳性率分别为44%、50%和45%;RECELISA法的敏感性为95.6%,其特异性(98.2%)高于全病毒ELISA法(90.9%);正确指数为92.8%,与BioCheck法一致性为97.0%。结论用pp65重组抗原建立的RECELISA法具有高度特异性与敏感性,且操作简单、快速,重复性好;与全病毒抗原相比,重组抗原可规模化、标准化生产,且更安全、经济,具有良好的临床应用前景。

化学发光成像分析法定量检测人尿液中β-人绒毛膜促性腺激素

采用一种灵敏、简单的方法, 可实现对β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)的高通量检测.本法具有酶联免疫吸附(ELISA)法的特异性、增强化学发光法(ECL)的高灵敏度及化学发光成像分析高样品通量等优点.冷却电感耦合 (CCD)成像系统被用于检测增强化学发光信号.发光强度值与β-HCG在12.5 ～ 400 mIU/mL范围内呈线性关系;检出限为4 mIU/mL.测定了妇女尿液中β-HCG的含量,分析结果与医院的诊断结果一致.

家畜繁殖学实验中马绒毛膜促性腺激素效价测定方法的改进

家畜繁殖学实验教学中对马绒毛膜促性腺激素效价的测定,通常采用小鼠子宫增重等生物学方法,实验准备时间长、操作步骤多、影响因素多、饲养成本高、测定灵敏度不高。针对传统测定方法存在的不足,在长期从事相关科研和教学的基础上,对测定方法进行了改进,建议使用酶联免疫吸附法,并提出了测定过程中的步骤与需要注意的事项,以期为提高家畜繁殖学实验教学效果提供参考。

免疫印迹法检测血清抗Sa抗体方法的建立

目的：建立免疫印迹法检测血清抗Sa抗体，并对其敏感性、特异性和稳定性进行评价。方法：通过3组正交设计实验，确立检测方法的最佳条件；主要条件为硝酸纤维素膜应用15％小牛血清封闭2h，被测血清作1：40稀释，酶标抗体作1：800稀释。结果：抗sa抗体对类风湿性关节炎(RA)敏感性为42．7％，特异性为100％；结论：建立的免疫印迹法检测血清抗Sa抗体结果较稳定，并有较高特异性。

尿液中磷脂酶A2受体的浓度与特发性膜性肾病患者临床及预后的相关性

目的探讨尿液中磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)的浓度与特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)临床严重程度的相关性,分析其在IMN病情评估及预后判断中的价值。方法选取2017年12月至2018年12月广东省人民医院肾内科经肾活检证实的38例IMN患者,利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测患者尿PLA2R浓度,采用偏相关方法分析尿PLA2R浓度与患者基线临床数据的相关性,通过受试者工作特征曲线和Logistic回归评估尿PLA2R浓度对患者6个月蛋白尿完全缓解的预测价值。结果ELISA法测得的尿PLA2R浓度中位数是0.061μg/L,偏相关分析示尿PLA2R浓度与IMN患者基线估算肾小球滤过率(r_(s)=-0.507,P=0.002)及血清白蛋白(r_(s)=-0.464,P=0.004)呈负相关,与基线24 h尿蛋白定量呈正相关(r_(s)=0.700,P<0.001)。随访6个月,发现蛋白尿完全缓解组患者尿PLA2R浓度明显低于非完全缓解组[0.024(0.012,0.057)μg/L比0.102(0.041,0.326)μg/L,P=0.008]。多因素Logistic回归分析示尿液中PLA2R浓度水平是IMN患者6个月蛋白尿完全缓解的独立预测因素[OR=0.053(0.003~0.865),P=0.039]。结论尿PLA2R浓度与IMN患者的病情严重程度呈正相关,且可独立预测IMN患者6个月蛋白尿完全缓解情况。

血管紧张素Ⅱ调控基质金属蛋白酶9的表达在蛛网膜下腔出血发病中的机制研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)调控基质金属蛋白酶9(MMP⁃9)的表达在蛛网膜下腔出血(SAH)发病中的机制。方法人脑微血管内皮细胞(HBMEC)株分为AngⅡ组、AngⅡ+SB203580组和对照组。其中AngⅡ组以100μg/L浓度AngⅡ处理90 min、2 h、4 h、6 h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;AngⅡ+SB203580组以5μΜ的SB203580处理20 min后以100μg/L浓度AngⅡ处理90 min、2 h、4 h、6 h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;对照组加入RPMI⁃1640培养液培养90 min、2 h、4 h、6 h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测。以酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液MMP⁃9水平,并以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,AngⅡ组细胞上清液MMP⁃9[处理12 h:(4.21±1.36)μg/L比(5.81±1.72)μg/L,P<0.01]水平升高,AngⅡ+SB203580组细胞上清液MMP⁃9[处理12 h:(4.21±1.36)μg/L比(3.64±1.45)μg/L,P<0.01]水平降低(P<0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+SB203580组细胞上清液MMP⁃9水平降低(P<0.001)。与对照组比较,AngⅡ组细胞p38 MAPK的mRNA[处理12 h:(0.422±0.057)比(0.538±0.071),P<0.05)]和蛋白表达水平[(0.452±0.105)比(0.635±0.133),P<0.001]升高,AngⅡ+SB203580组细胞p38 MAPK的mRNA[处理12 h:(0.422±0.057)比(0.375±0.066),P<0.05]和蛋白表达水平[(0.452±0.105)比(0.276±0.081),P<0.001]降低(P<0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+SB203580组细胞p38 MAPK的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.001)。结论AngⅡ可能通过激活p38 MAPK信号通路上调MMP⁃9表达从而促进SAH发生发展。

原发性膜性肾病标志物抗PLA2R抗体检测方法比较

目的探讨磁微粒化学发光法(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测血清抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体的差异。方法选取2020年1月—2021年5月雅安市名山区人民医院、四川省地矿局四〇五医院、成都市郫都区人民医院接受肾脏活检的患者215例,根据病理检查结果确诊PMN 135例(PMN组),其他肾病80例。另选取健康体检者72名。将其他肾病和健康体检者归入非PMN组。比较CLIA和ELISA检测抗PLA2R1抗体的效能(精密度、准确度、相关性、一致性)。分别采用2种方法检测PMN组和非PMN组抗PLA2R1抗体水平,比较2种方法检测抗PLA2R抗体诊断PMN的敏感性和特异性差异。结果CLIA的批内精密度(低值1.23%、高值1.45%)、批间精密度(低值2.59%、高值2.12%)均优于ELISA(批内精密度:低值8.18%、高值8.51%;批间精密度:低值8.67%、高值8.91%)。CLIA平均回收率为98.7%,ELISA平均回收率为96.0%,均符合要求。CLIA与ELISA的相关性较好(r=0.846,P<0.01),一致性较高(kappa值=0.928)。CLIA检测抗PLA2R抗体诊断PMN的敏感性(88.9%)优于ELISA(79.3%)(χ^(2)=4.675,P=0.031);2种方法的特异性分别为99.4%、96.1%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CLIA检测抗PLA2R抗体的效能优于ELISA,适用于临床大批量检测。

血清抗M型磷脂酶A2受体抗体在特发性膜性肾病治疗的价值分析

目的探讨血清抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体在特发性膜性肾病治疗中的临床价值。方法便利选取2018年1月—2019年1月该院肾内科收治的行肾活检的43例IMN患者进行回顾性分析,根据抗PLA2R抗体滴度检测结果将其分成3组,即高滴度组(n=13)、中滴度组(n=12)及低滴度组(n=18)。所有患者给予环磷酰胺及足量激素联合治疗,测定3组患者在治疗前后的血清白蛋白水平和24 h尿蛋白水平,分析治疗后患者的临床完全缓解率和部分缓解率。结果低滴度组患者在治疗1个月、3个月及6个月后的血清白蛋白水平分别为(28.7±3.32)g/L、(36.5±3.22)g/L、(38.4±1.95)g/L均明显高于中滴度组和高滴度组,且24 h尿蛋白水平分别为(3.37±0.87)g、(1.28±0.36)g、(0.34±0.11)g均低于中滴度组和高滴度组(P<0.05)。低滴度组患者在治疗1个月、3个月及6个月后的总缓解率为55.56%、88.89%、94.44%均明显高于中滴度组和高滴度组(P<0.05)。结论血清抗PLA2R抗体滴度在IMN患者的治疗中与其临床疗效呈负相关,因此可作为评价临床疗效的敏感性血清学指标。

斑点法膜型快速检测HBsAg

斑点法膜型快速检测ＨＢｓＡｇ贾建成，郑胜香，杨筱，王沈馨（宁夏自治区医院检验科，银川７５００２１）目前检验乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的方法有反向间接血凝法（ＲＰＨＡ），酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ），放免法（ＲＩＡ），以上诸法有的灵敏度低，常出现非特异...

胎膜早破孕妇血清、羊水白细胞介素6,8水平的临床意义

目的 :探讨胎膜早破孕妇血和羊水中白细胞介素 6 (IL- 6 )、白细胞介素 8(IL- 8)水平与绒毛膜羊膜炎关系。方法 :采用酶联免疫吸附法 (EL ISA)检测 5 8例胎膜早破 (受试组 )及 4 0例正常孕妇 (对照组 )血清和羊水中 IL- 6、IL- 8水平 ,同时行胎膜病检。结果 :胎膜早破组患绒毛膜羊膜炎 33例 ,感染率为 5 5 .17% ,明显高于对照组 (15 .0 0 % )。绒毛膜羊膜炎孕妇的羊水和血清中 IL- 6、IL- 8水平明显高于非绒毛膜羊膜炎者 ,尤其以羊水中 IL- 6、IL- 8水平升高更为敏感 (P <0 .0 1)。胎膜早破时间长短与绒毛膜羊膜炎发生率呈正比 ,当破膜时间超过 2 4 h,则绒毛膜羊膜炎发生率为 77.78% ,当破膜时间在 12～ 2 3h为 5 0 % ,破膜时间在 12 h内为 30 % ,而对照组绒毛膜羊膜炎发生率只为 15 .38%。结论 :羊水和血清中 IL- 6、IL- 8水平升高与绒毛膜羊膜炎有关 ,胎膜早破时间越长 ,发生率越高。

马绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

本研究采用马绒毛膜促性腺激素(equine chorionic gonadotropin,eCG)纯品免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按1∶10融合,间接酶联免疫吸附法(ELISA)筛选阳性克隆和有限稀释法克隆,扩大培养后于小鼠腹腔制备腹水,共得到8株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用间接ELISA测定抗体效价,效价均达10-5以上。用获得的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体,为eCG分泌水平的ELISA检测方法的建立确立了条件。