硫代反义寡核苷酸对肝纤维化大鼠TIMP-1基因及蛋白表达的抑制作用

目的 观察硫代反义寡核苷酸 (asON)对实验性免疫性肝纤维化大鼠肝组织中TIMP 1基因和蛋白表达的抑制作用。方法 根据TIMP 1二级结构基因组的调控序列、结构蛋白、编码区序列等分析 ,设计 4组不同的asON。利用尾静脉注射将其导入肝纤维化大鼠模型体内 ;通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的免疫组化、原位杂交法、胶原纤维特殊染色及电镜等观察asON对大鼠肝纤维化的影响。结果 针对TIMP 1设计的asON经硫代修饰后在活体内能确切表达并能在mRNA水平上封闭实验性肝纤维化大鼠肝组织中TIMP 1的基因和蛋白表达 ,其结果可促进肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解 (P <0 .0 1)。肝纤维化病理学分级和电镜观察结果显示asON对肝纤维化的逆转具有一定效果。结论 针对TIMP 1设计的硫代asON在动物体内具有良好的抗肝纤维化效应 ,从而为研制新一代抗肝纤维化基因治疗药物奠定了基础。

硫代反义寡核苷酸对裸鼠异植瘤HCV 5′NCR基因表达的抑制作用

目的 在HCV 5′NCR转基因细胞模型HepG2.9706细胞建立成功的基础上，采用裸鼠异植瘤模型进行HCV特异性硫代反义寡核苷酸(HCV363、HCV279及HCV349)的体内活性评价。 方法 将HepG2.9706细胞接种于4～6周龄的雌性BALB/C裸鼠的侧腹皮下，动物随机分组，约1周后，采用腹腔注射途径，开始给药。 结果 针对HCV 5′NCR的硫代反义寡核苷酸HCV363、HCV279及HCV349对异植瘤细胞内HCV 5′NCR调控荧光素酶表达具有明显的序列特异性抑制作用，抑制率分别为80.4%、78.6%及47.9%。三个不同浓度的HCV363作用结果表明随着药物浓度的增加，HCV363对荧光素酶基因的表达抑制活性明显增强，最大抑制率可达82.7%。 结论 该研究提示反义寡核苷酸有可能成为HCV感染治疗的新途径。