靶向反义硫代寡脱氧核苷酸抗病毒疗效的实验研究

目的 探讨靶向反义硫代寡脱氧核苷酸（asODN）在乙型肝炎（HBV）病毒转基因小鼠体内抗病毒疗效。方法 设计合成针对HBV pre-C/C基因的反义硫代寡脱氧核苷酸:5＇-CATGCCCCAAAGCCAC-3＇,并以半乳糖-多聚赖氨酸（Gal15-PLL）作肝靶向载体。将12只血清HBsAg,HBV DNA阳性的转基因小鼠等分为 Gal15-PLL—asODN治疗组及生理盐水对照组。靶向反义硫代寡脱氧核苷酸以每天每克体重15μg剂量,尾静脉注射给药,共12d;对照组用同样体积生理盐水同样方法给药。结果 注射Gal15-PLL-asODN 6d后,血清HBsAg已有下降（P<0.05）;12d时显著下降（P<0.01）,且血清HBV DNA转阴率为66.7％（4/6）,肝组织免疫组织化学HBsAg、HBcAg阳性肝细胞数较对照组明显下降（P<0.05）;而生理盐水对照组无明显变化。结论 靶向反义硫代寡脱氧核苷酸在转基因小鼠体内能抑制HBV复制与抗原表达。

硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响

目的 探讨硫代反义Bcl_xL寡脱氧核苷酸 (AS_sODN)对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响。方法 以脂质体Lipofectin为载体 ,转染AS_sODN于BcaCD885细胞内 ,倒置显微镜观察细胞形态学改变 ,TUNEL原位末端标记检测细胞凋亡 ,流式细胞技术 (FCM)测定细胞凋亡率及Bcl_xL蛋白表达水平 ;转染AS_sODN于BcaCD885细胞内 ,再以 4 3℃ ,4 0min加热细胞 ,FCM检测细胞凋亡率。结果 AS_sODN转染后 ,BcaCD885颊癌细胞出现皱缩、呈浮起状 ,TUNEL原位末端标记阳性 ,Bcl_xL蛋白表达明显下降 (P <0 0 5 ) ,热诱导细胞凋亡率明显提高 (P <0 0 5 )。结论 硫代反义Bcl_xL寡脱氧核苷酸能诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡并能提高其热敏感性。

反义药物作用中的“靶二级结构域”

目的 在计算机模拟mRNA二级结构与定量构效关系分析的基础上优化反义药物设计。方法 使用软件RNAstructure模拟mRNA二级结构 ,针对二级结构单元进行反义药物设计 ,用肺腺癌细胞株A5 49评价反义药物的体外抗肿瘤生物活性 ,用软件SPSS进行多元回归分析。结果 有效药物作用靶点相对集中地分布于由若干二级结构单元组成的局部二级结构区域。我们称之为“靶二级结构域 (靶域 )”。“靶域”结构相对稳定 ,但其中包含不稳定二级结构单元 (ΔG° >0 )。针对不同“靶域”设计的反义药物显示不同的生物活性 (P <0 0 1) ,但靶向同一“靶域”的反义药物生物活性无统计差别。结论 “靶域”现象有助于反义药物靶点的选择 ,并对探针。