冷冻液中添加硫代甘油对小鼠冷冻解冻精子体外受精的影响

为了研究在冷冻液中添加硫代甘油(MTG)对小鼠冷冻精液解冻后受精能力的影响,试验采用在精液冷冻液中添加不同浓度MTG(160,320,480,640μmol/L)的方法冷冻C57BL/6小鼠和昆明白小鼠的精子,然后用解冻的精液进行体外受精,检测受精率和2-细胞发育率,还检测了添加480μmol/L组的C57BL/6小鼠体外受精胚胎移植后的出生率。结果表明:在冷冻液中添加MTG后C57BL/6小鼠和昆明白小鼠冷冻解冻精液的受精率和2-细胞发育率均显著升高(P<0.05),说明在冷冻液中添加MTG能够支持体外受精后正常的胚胎发育。通过添加MTG能显著提高这2个品系小鼠冷冻解冻后精子的体外受精能力。

C57BL/6J背景基因修饰小鼠精子冷冻保种及品系恢复方法

目的建立一种高效的C57BL/6J背景基因修饰小鼠的精子冷冻及体外受精(IVF)方法。方法以C57BL/6J小鼠为研究对象,围绕冷冻保护液、冷冻精子浓度、复苏后精子处理方法及IVF培养液等方面进行研究,IVF后2-细胞发育率作为冷冻和复苏效率评价标准,对比各组之间发育情况。结果以R18S3(含质量比为18%棉子糖和3%脱脂奶粉)、M-R18S3冷冻保护液[含终浓度为477μmol/L硫代甘油(MTG)的R18S3冷冻液]进行精子冷冻,复苏后在HTF培养液中进行IVF,2-细胞发育率分别为8.4%和20.6%;以R18S3和M-R18S3作为冷冻保护液,以含浓度为1 mmol/L还原性谷胱甘肽(GSH)的HTF培养液进行IVF,2-细胞发育率分别为25.0%和43.5%。高浓度精子冷冻及复苏法可获得64.2%的2-细胞发育率;选取4种C57BL/6J背景基因修饰小鼠进行精子冷冻及IVF,2-细胞发育率34%～90%,胚胎移植后出生率40%～57%。结论 M-R18S3作为冷冻保护液,采用高浓度精子冷冻法进行精子冷冻,冷冻精子复苏后进行受精滴洗涤筛选,以含1 mmol/L GSH的HTF培养液进行冷冻精子IVF,此技术体系可以作为C57BL/6J背景基因修饰鼠的保种及品系恢复手段。