分子印迹-基质固相分散萃取-高效液相色谱法测定土壤中4种硫代磷酸酯类农药残留量

建立了一种高效、选择性强的分子印迹-基质固相分散萃取结合高效液相色谱测定土壤中4种硫代磷酸酯类农药(毒死蜱、甲基立枯磷、甲基毒死蜱、甲基对硫磷)残留量的方法;并以甲基立枯磷为模板分子,以甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,且n(模板分子)∶n(功能单体)=1∶4,以乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,以偶氮二异丁腈为引发剂,采用沉淀印迹聚合方法,合成了甲基立枯磷高分子印迹聚合微球(MIPs);以MIPs作为土壤样品提取液的基质固相分散吸附剂,采用HPLC检测处理后的样品,流动相为V(乙睛)∶V(0.1%乙酸水溶液)=3∶1,流速0.8 m L/min,进样量20μL,检测波长210 nm,采用Agilent Eclipse XDB-C8色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温25℃。结果显示:MIPs对甲基立枯磷有特异性吸附,对其结构相似物毒死蜱、甲基对硫磷和甲基毒死蜱也具有一定的吸附性能;在0.01~5.0 mg/kg范围内,各药剂的质量浓度与相应的峰面积间呈良好的线性关系,相关系数r为0.997 5~0.999 8;4种硫代磷酸酯类有机磷杀虫剂的检出限(LOD)为0.452~1.226μg/kg;添加回收率为76%~96%,相对标准偏差(RSD)为2.8%~7.3%。该方法可用于土壤中硫代磷酸酯类有机磷杀虫剂残留量的测定。

硫代磷酸酯类化合物对斑马鱼的急性毒性及QSAR分析

实验测定了9种硫代磷酸酯类化合物(倍硫磷、氨磺磷、氯硫磷、杀螟松、碘硫磷、皮蝇硫磷、异氯磷、甲基对硫磷、乙基溴硫磷)对斑马鱼(Brachydaniorerio)的急性毒性96h-LC50值,分别为0.95、4.52、1.95、3.03、0.85、0.56、3.44、3.44和0.82mg·L-1,其中倍硫磷、碘硫磷、皮蝇硫磷和乙基溴硫磷属于剧毒,其他5种(氨磺磷、氯硫磷、杀螟松、异氯磷和甲基对硫磷)属于高毒.以分子电性距离矢量(MEDV-13)有效表征硫代磷酸酯类化合物的分子结构,应用基于预测的变量选择与模型化(VSMP)方法建立急性毒性(-lgLC50)与分子结构(MEDV-13)的定量相关模型,模型的估计相关系数为0.9922,LOO检验相关系数为0.9796,表明模型具有良好的估计能力与稳健性.影响急性毒性的主要结构因素是由2个MEDV描述子表达的3个子结构碎片,即—CH3、—cCc和≥N=.其中子结构—CH3、—cCc与硫代磷酸酯类化合物母体骨架密切相关,而≥N=则反映取代基的变化.

一硫代磷酸酯类杀虫剂的微生物降解

在纯培养条件下测定了分离株 YF0 5对对硫磷等一硫代磷酸酯类杀虫剂的降解作用。在接种量 (OD4 15nm)为 0 .2、p H7.0、30℃条件下 ,测得 10、2 5、50、10 0、2 0 0、50 0 mg/ L对硫磷的降解符合一级动力学特征 ,其降解速率常数分别为 0 .0 77、0 .12 3、0 .12 8、0 .119、0 .0 84、0 .0 13,高浓度对硫磷对 YF0 5菌有抑制作用 ;分离株 YF0 5在不同温度及 p H下对对硫磷的降解作用为 4 0℃ >30℃ >2 0℃ ,p H8.0 >p H7.0 >p H6 .0。同样条件下 ,YF0 5对杀螟硫磷和甲基对硫磷也有较好的降解作用 ,对甲基对硫磷的降解速率常数与对硫磷相仿 ,对杀螟硫磷的降解速率常数略高于对硫磷。

二硫代磷酸酯类对尼罗罗非鱼和鲮体内AChE酶活性的影响

为探明二硫代磷酸酯类对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的特异性毒性机理,以尼罗罗非鱼和土鲮(Cirrhinus molitorella)为试验对象,研究暴露在不同药物质量浓度(0.05、0.1 mg/L)和不同时间下2种鱼的生存状况以及体内乙酰胆碱酯酶(ACh E)活性的变化。结果表明:在急性毒性试验及清水恢复的整个过程中,暴露在0.05、0.1 mg/L药液中的尼罗罗非鱼和鲮的死亡率分别为100%和0;尼罗罗非鱼和鲮的脑及肝脏中的ACh E酶活性呈现出随药物暴露浓度和时间的增加而显著降低的趋势,但尼罗罗非鱼体内ACh E酶活性的下降幅度显著高于鲮(P<0.05),且呈现不可逆的趋势;在10 d清水恢复后,暴露在0.05、0.1 mg/L药液中的鲮脑中的ACh E酶活性复原度高达96.25%、79.33%。由此得出,低剂量的二硫代磷酸酯类对尼罗罗非鱼具有高毒性,而对鲮的毒害作用较小,其特异性的毒杀机制可能源于2种鱼体内ACh E酶活性对二硫代磷酸酯类敏感性的显著性差异。

硫代磷酸酯类有机磷药物抗原设计及免疫分析

半抗原的设计与合成是免疫分析方法的关键。本文介绍了硫代磷酸酯类有机磷药物半抗原的设计路线与合成方法,总结了各种免疫分析方法(如酶联免疫法、偏振荧光免疫法、胶体金免疫层析法和免疫传感器)在硫代磷酸酯类有机磷药物残留检测中的应用,并对未来免疫分析法的发展方向进行了展望。

液液萃取-气相色谱/质谱法同时测定水样中3种三烷基硫代磷酸酯类化合物

本文建立了液液萃取-气相色谱/质谱同时测定水中O,O,S-三甲基硫代磷酸酯（TMPT）、O,O,S-三甲基二硫代磷酸酯（TMDTP）和O,O,O-三乙基硫代磷酸酯（TETP）3种三烷基硫代磷酸酯类化合物的分析方法。采用电子轰击（EI）-选择离子模式（SIM）进行定性与定量分析。考察了萃取剂种类、pH值以及盐度对萃取效率的影响。在优化的实验条件下,3种目标化合物的线性范围在0.01-2.0μg/mL之间,检出限（S/N=3）为0.26-1.1ng/L,定量限（S/N=10）为0.87-3.7ng/L。以该方法测定自来水、池塘水和湖水样品,3种目标化合物均未检出,不同加标水平（0.05、0.25和1.0μg/L）回收率在85.7%-104.2%之间,相对标准偏差在1.5%-12.2%之间。

二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体的制备及广谱特异性

从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计带linker引物,采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因,将其克隆到噬菌体载体p3MH中,构建成噬菌体单链抗体表达载体,转化大肠杆菌表达出噬菌体表面展示scFv,对经过Phage-ELISA鉴定的阳性克隆进行噬菌体外壳蛋白基因geneⅢ的去除,用IPTG诱导其可溶性表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western-Blot及ELISA鉴定,并与亲本MAb进行性能对比.结果表明,可溶性表达的scFv分子量为27000;scFv与DPPs的交叉反应率比其亲本MAb提高了1.3～3.5倍,表明其广谱特异性有所提高.由于scFv与MAb相比具有诸多优点,因此本研究为有机磷农药多残留检测方法的建立提供了一种更广谱、更灵敏的新型识别分子.

硫代磷酸酯类杀虫剂ScFv抗体库的构建与初步筛选

旨在构建硫代磷酸酯类杀虫剂单链抗体(ScFv)库,并对其进行初步筛选。采用RT-PCR法从牛血清蛋白(BSA)人工抗原免疫的Balb/C小鼠脾细胞中克隆出VH和VL基因,通过重叠延伸PCR方法将VH和VL基因拼接在一起,构建ScFv基因,与表达载体pCANTAB 5E连接后,在大肠杆菌中诱导表达。采用亲和富集法,经6轮淘筛后用酶联免疫吸附分析(ELISA)测定其活性。得到滴度为2.2×106 pfu/mL噬菌体库,ELISA检测呈阳性。说明成功表达并筛选得到鼠源抗硫代磷酸酯类杀虫剂ScFv抗体库。

O,O-二芳基,S-乙基-硫代磷酸酯类杀菌剂结构与活性关系的定量研究

通过对一系列O,O-二芳基-S-乙基-硫代磷酸酯类化合物分子的物理化学参数,如疏水性数据R_M和吸电子数据σ,进行多元回归分析,研究了它们的结构与对五种植物病原真菌活性的关系。这些化合物对全部供试病原菌的杀菌活性的测定结果表明:分子的疏水性和吸电子性对杀菌活性都有明显作用。

DPPs类有机磷农药宽谱酶联免疫吸附分析方法的建立

【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全抗原。筛选免疫小鼠,制备稳定分泌可识别DPPs抗体的单克隆细胞株,筛选出抗原和抗体最佳工作浓度组合,建立该单抗的ic-ELISA标准曲线,并分析该单抗与6种DPPs的交叉反应率,评估ic-ELISA的广谱性。利用所得抗体与喹硫磷交叉反应最强的特性对采购的柑橘和鲜橙样品进行喹硫磷添加回收试验。【结果】成功合成识别DPPs的人工抗原,包括包被抗原DPPs-OVA和免疫抗原DPPs-BSA。通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、广谱性最强的单克隆细胞株5G_(8)。以0.5μg/mL包被抗原DPPs-OVA、1.0μg/mL抗体5G_(8)2D_(5)为最佳工作浓度组合,将细胞株筛选过程中抗体识别率较高的有机磷农药——对硫磷选定为抑制标准物,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC_(50))为41.78 ng/mL,检测范围(IC_(20)~IC_(80))为3.21~239.59 ng/mL;所建立的ic-ELISA与5种DPPs(蝇毒磷、喹硫磷、甲拌磷、甲基对硫磷和倍硫磷)均存在不同程度的交叉反应,其中以喹硫磷的交叉反应率最高,达19.79%。比较ic-ELISA和气相色谱法(GC)对柑橘和鲜橙样品中喹硫磷的添加回收结果发现,ic-ELISA的添加回收率为75.80%~116.12%,GC的添加回收率介于92.5%~115.00%,2种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA经GC交叉验证准确性较高,可用于快速检测农产品中的喹硫磷残留。

农药倍硫磷的神经毒性研究进展(综述)

倍硫磷(Fenthion)是一种硫代磷酸酯类杀虫剂,主要用于控制大豆食心虫、牲畜的牛皮蝇及卫生害虫。自从1960年 Schrader 第一次报道倍硫磷的毒性研究以来,各国学者对倍硫磷的一般毒性和三致作用进行了广泛的研究。研究结果表明倍硫磷为中等毒性类农药,主要引起胆碱酯酶活性的抑制,而对神经肌肉组织影响的研究迄今仍为大家所关注,旨在探索更敏感的指标及作用的机理。本文就近年来这一领域的研究状况加以综述。

食品中有机磷农药残留检测技术研究进展

有机磷农药类型较多,应用最广泛的是硫代磷酸酯类或磷酸酯类。由于有机磷农药对人体内的乙胆碱酯酶具有抑制作用,造成人体内乙胆碱酯在人体内积累,从而引起神经性疾病。由于人们在农业生产中过度施用OPPs,因此其残留问题越来越受到人们的关注。它们常常残留在蔬菜、水果及大米、玉米等农作物中。

果蔬可能残留哪些农药

蔬菜、水果上的农药超标会给人们的生命安全带来重大危害。那么,蔬菜、水果可能会残留哪些农药?据介绍,我国目前生产和使用的农药大致分为:第一类:有机磷农药(属磷酸酯类或硫代磷酸酯类化合物)它是应用最广泛的农药。有机磷农药中毒分为急性和慢性,