广州地区人群中硫嘌呤甲基转移酶基因的等位基因频率及分布

目的 :了解硫嘌呤甲基转移酶 (ThiopurineS methyltransferase ,TPMT)基因常见的遗传多态性在广州地区人群中的分布及其频率。方法 :应用聚合酶链反应 等位基因特异性扩增 (PCR ASA)和聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)对文献报道的TPMT基因中三种常见的基因突变 (G2 38C、G4 6 0A和A719G)进行检测。结果 :在我们调查的人群中只检测到A719G(TPMT/ 3C) ,其频率为 0 .7% (3/ 392 ) ;该突变基因在人群中以杂合子形式存在 ,基因型频率为 1.5 % (3/ 196 ) ,未发现突变型纯合子 ,亦未检测到另外两种基因突变。结论 :广州地区人群中TPMT等位基因的频率及分布与白人存在明显差异 ,与黑人及日本人较为接近 。

中国新疆维吾尔族硫嘌呤甲基转移酶基因突变研究

目的研究硫嘌呤甲基转移酶(thiopurine S-methyltransferase,TPMT)在新疆维吾尔族中的基因突变频率.方法用等位基因特异性的PCR方法和限制性片断长度多态性的方法检测4种常见的导致酶活性降低的突变类型:TPMT*2,TPMT*3A,TPMT*3B和TPMT*3C.结果在160名维吾尔族中发现了1例TPMT*3A(A719G/G460A)杂合子、5例TPMT*3C(A719G)杂合子,TPMT*3A和TPMT*3C的等位基因频率分别是0.3%和1.6%.结论维吾尔族总的TPMT突变等位基因频率(1.9%)同中国其他民族相近;TPMT*3C是维吾尔族最主要的突变类型.

肾移植受者硫嘌呤甲基转移酶基因多态性与硫唑嘌呤不良反应关系的研究

目的:探讨硫嘌呤甲基转移酶(thiopurine S-methyltransferase,TPMT)表型和基因多态性与硫唑嘌呤(AZA)所致不良反应的关系。方法:应用高效液相色谱法(HPLC)测定150例肾移植患者红细胞TPMT活性,采用等位基因特异性的PCR和限制性片断长度多态性的方法检测TPMT*2、*3A、*3B和*3C四种基因型,分析TPMT活性和基因多态性与AZA所致不良反应的关系。结果:30例(20%)患者由于发生了不良反应而停用AZA或减少了AZA的用量,其中12例患者发生了血液毒性,另外18例发生了肝脏毒性。将未发生不良反应的患者作为对照组,其红细胞TPMT活性范围为16.63~68.25 U,平均为(38.43±11.59)U。发生了血液毒性的患者红细胞TPMT活性平均为(24.16±9.84)U,明显低于未发生不良反应的患者(P=0.0003)。另外18例发生了肝脏毒性的患者TPMT活性离散度较大,与对照组比较差异无统计学意义(P=0.145)。本研究未发现TPMT活性缺乏者。共发现7例(4.7%)TPMT*3C杂合子患者,这7例患者均为TPMT中等活性13.04~19.21 U,平均为(...

中国汉族炎症性肠病患者硫嘌呤甲基转移酶基因多态性研究

目的了解中国汉族炎症性肠病(IBD)患者硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因多态性的分布情况,并探讨TPMT基因多态性与硫唑嘌呤(AZA)药物毒副作用的关系。方法 189名汉族IBD患者及273名健康对照者进入了研究。其中有43例患者接受了AZA治疗。分别采用引物特异性聚合酶链反应(PCR)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法对TPMT*2、TPMT*3B、TPMT*3C、TPMT*3A四个突变等位基因进行检测。对使用药物发生了毒副作用的患者进一步进行了TPMT基因外显子的PCR扩增及测序检测。结果所有的IBD患者和健康对照者均未检测到TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B突变。IBD患者TPMT*3C突变等位基因频率为1.59%,与健康对照组相近(1.59%vs1.47%),经Fisher's确切检验显示,差异无统计学意义(P>0.05)。在对43例接受AZA治疗的IBD患者的随访中,观察到有4例患者发生了骨髓抑制,1例发生了肝脏毒性。5例患者均未检测到TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B、TPMT*3C这4种常见的TPMT突变等位基因。进一步对该5例患者进行外显子测序工作,发现其中3例患者存在TPMT*1S突变杂合子,但为无义突变。结论在中国汉族IBD人群中,TPMT突变等位基因频率低,但AZA药物毒副作用的发生率并不低,AZA药物毒副作用无法完全通过TPMT基因突变来解释。

硫嘌呤甲基转移酶基因型和酶活性检测在炎症性肠病治疗中的临床价值

目的 评价硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因型和酶活性检测对炎症性肠病（IBD）患者服用硫唑嘌呤（AZA）发生不良反应的预测价值.方法 收集2004年4月-2009年12月有使用AZA指征的IBD确诊患者112例,其中溃疡性结肠炎（UC）26例,克罗恩病（CD）86例.患者每天均服用AZA 2 mg/kg.采用PCR技术检测患者TPMT基因型（＊2、＊3A、＊3B＊、3C）,高效液相色谱法检测TPMT酶活性.分析达到随访终点（服药达半年或以上,或因不良反应停药）患者的TPMT基因多态性及酶活性与不良反应发生之间的关系及其影响因素.结果 112例患者中不良反应率为33.9%（38/112）,以骨髓抑制最常见（20.5%）.TPMT＊3C杂合子突变率为0.9%（1/112）.TPMT酶活性呈单峰正态分布,平均活性为（12.9士4.2）U/ml红细胞.1例TPMT＊3C杂合子突变者于用药4周内发生骨髓抑制,TPMT基因型预测骨髓抑制发生的敏感度为4.4 0A（1/23）,特异度为1/1.ROC曲线计算TPMT酶活性预测服药3个月内发生骨髓抑制的安全阈为≤4.5 U/ml红细胞,该安全阈预测3个月内骨髓抑制发生的敏感度为3/13,特异度为3/3.合用5-氨基水杨酸（5-ASA）制剂者骨髓抑制的发生率显著高于非合用者（44.4%比12.9%,P=0.000）,但发生骨髓抑制者合用5-ASA前后TPMT酶活性差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 TPMT基因突变和酶活性低下对预测发生骨髓抑制的特异性较高,但敏感性较差,合用5-ASA可增加AZA发生骨髓抑制的风险,但与TPMT酶活性无关.

中国哈萨克族人硫嘌呤甲基转移酶活性分布和基因多态性

目的 研究硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)在中国哈萨克族的活性分布和4 种常见TPMT基因突变等位基因频率。方法 用高效液相色谱法测定TPMT 活性;用等位基因特异性聚合酶链反应检测TPMT*2;用限制性片段长度多态性 检测TPMT*3A、TPMT*3B和TPMT*3C的等位基因频率。结果 哈萨克族T PMT活性呈正态分布,活性的均值为(12．27±3．42)U·mL-1 Rbc,其中发现6 例TPMT*3C杂合子和2例TPMT*3A杂合子,总TPMT基因突变频率是1．2％。 结论 中国哈萨克族TPMT活性呈正态分布,总TPMT基因突变频率同汉族相 比差异无显著性。

巯嘌呤甲基转移酶基因多态性联合硫鸟嘌呤核苷酸血药浓度监测在硫唑嘌呤治疗炎症性肠病治疗中的临床应用

目的：探讨巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因多态性联合红细胞中硫鸟嘌呤核苷酸（6-TGNs）血药浓度监测在硫唑嘌呤治疗炎症性肠病中的临床应用，为实施个体化治疗方案提供参考。方法：选取临床确诊为炎症性肠病的患者，采用PCR扩增、焦磷酸基因测序法技术检测其TPMT基因第7外显子G460A和第10外显子A719G的2个多态性位点；应用高效液相色谱法测定患者红细胞（RBC）中6-TGNs浓度。结果：15例患者TPMT＊3基因均为野生型，未发现突变；首次检测的6-TGNs浓度为 147.31～875.26 pmol/L（8×10^8）RBC，服用相同剂量的患者个体差异较大。结论：TPMT基因多态性检测有助于预测硫唑嘌呤治疗炎症性肠病的骨髓毒副作用，6TGNs浓度测定有助于药物剂量的调整，两者联合应用可为接受硫唑嘌呤治疗的炎症性肠病患者的个体化治疗提供参考依据。

硫嘌呤甲基转移酶基因多态性的硫唑嘌呤个体化用药临床研究分析

硫唑嘌呤属于硫嘌呤类药物,是一种免疫抑制药。硫嘌呤甲基转移酶(thiopurine S-methyltransferase,TPMT)是参与硫唑嘌呤代谢的重要酶,TPMT的基因多态性是导致个体间用药差异的重要因素。TPMT基因遗传多态性导致酶活性存在个体差异,从而使接受硫唑嘌呤治疗的人群表现出不同的疗效和药物不良反应。TPMT的遗传多态性能够影响到TPMT酶的活性,而不同TPMT活性的患者在服用硫唑嘌呤后的药效学不同。越来越多的研究证实,在服用硫唑嘌呤之前进行基因型检测,针对不同TPMT活性的患者进行硫唑嘌呤个体化用药指导,可以有效地提高疗效,降低药物不良反应。本研究综述了基于TPMT基因多态性的硫唑嘌呤个体化用药治疗现状,通过讨论TPMT基因型指导下对不同患者服用硫唑嘌呤后的临床结局的影响,以及精准用药的建议,尤其关注了中国人群中TPMT用药的研究现状,以期为不同人群进行硫唑嘌呤治疗提供用药建议。

健康汉族人硫嘌呤甲基转移酶遗传多态性研究

背景与目的:近年来发现了多种导致硫嘌呤甲基转移酶(thiopurineS-methyltransferase,TPMT)活性降低或缺乏的TPMT突变等位基因。中国人与白种人TPMT活性的分布比较具有种族差异性。在测定TPMT活性的基础上,本研究对常见的4种TPMT基因突变类型在健康汉族人中的发生频率进行分析和探讨。方法:对225名健康汉族人的TPMT基因型进行测定。采用等位基因特异性的PCR(allele-specificPCR,ASPCR)方法和限制性片段长度多态性(PCR-restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)的方法分别检测G238C(TPMT2)、G460A和A719G(TPMT3A、3B、3C)的等位基因频率。结果:在225例健康汉族人中没有找到TPMT2、TPMT3B和TPMT3A,一共找到6例TPMT3C杂合子。这6例TPMT3C杂合子的TPMT活性平均值为(9.62±3.58)U/mlRBC。健康汉族人总的TPMT突变等位基因频率是1.33%(6/450)。结论:TPMT突变基因在中国汉族人的发生频率较低,TPMT3C有可能是该人群中最主要甚至是唯一的突变等位基因。

硫唑嘌呤治疗系统性红斑狼疮的不良反应与硫嘌呤甲基转移酶活性的关系

【目的】探讨硫唑嘌呤(AZA)在系统性红斑狼疮(SLE)维持治疗中的不良反应(ARD)以及与硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性的关系。【方法】分析AZA在250例SLE患者维持治疗中的ARD发生特点,并应用高效液相色谱法(HPLC)测定这部分患者红细胞TPMT活性,分析TPMT活性与AZA所致不良反应的关系。【结果】最常见的ARD是血液系统损害(21例,8.4%),其次为胃肠道反应(19例,7.6%),肝功能异常(8例,3.2%),脱发(5例,2.0%),急性胰腺炎1例。血液系统损害主要表现为白细胞减少(20例,8.0%),血小板减少(9例,3.6%)。所有患者的TPMT活性(按RBC,U/mL)均值为12.4±7.1(1.7～30.0),呈正偏态连续分布。出现血液系统损害、脱发的患者TPMT活性明显低于未发生的患者(P<0.001)。而有无肝功能异常和胃肠道反应的2组患者之间的TPMT活性无差异(P>0.05)。在使用小剂量AZA(50 mg/d)时出现血液系统损害的患者TPMT活性均值低于使用常规剂量(100～150 mg/d)者(分别为3.4±1.5和7.3±2.6,P<0.001)。【结论】AZA在SLE的维持治疗中最主要的ARD是血液系统损害。血液系统损害主要与TPMT活性低有关,且酶活性低的患者在使用小剂量AZA时即可能出现血液系统损害。通过用药前检测TPMT活性,可以指导临床医生用药,提高治疗的安全性。

中国人与白种人硫嘌呤甲基转移酶活性与分布的种族差异

目的：调查硫嘌呤甲基转移酶（ thiopurine methyltransferase， TPMT)的活性在中国人人群中的分布情况，并与白种人进行比较。方法：用化学酶标法测定红细胞 TPMT活性。结果：我们测定了 200例健康中国人和 33例健康白种人红细胞中 TPMT的活性，发现该酶的平均活性在中国人群中和白种人群中分别为 (11.42± 2.01)nmol· h－ 1· m－ 1和 (11.86± 2.57) nmol· h－ 1· ml－ 1 packed RBC,两者没有显著差异（ P >0.05）。该酶的活性在中国人群中呈均态分布，而在白种人群中则呈二态分布。 TPMT活性与性别、年龄无关。结论：中国人与白种人 TPMT活性分布比较具有种族差异性。

硫嘌呤甲基转移酶遗传多态性检测在6-MP个体化治疗中的意义

目的:研究硫嘌呤甲基转移酶活性和基因型检测对6-巯基嘌呤(6-MP)的个体化治疗的意义。方法:94例口服6-MP维持治疗的白血病患者,19例口服6-Mp后出现血液系统危象的为观察组,同时服用6-MP没有出现血液系统损害的75患者为对照组,采用高效液相色谱法测定硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性,等位基因特异性PCR和限制性片段长度多态性(RFLP)的方法检测TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B和TPMT*3C的等位基因频率。通过临床白细胞记数和骨髓象检查及临床表现判定巯嘌呤的疗效和不良反应。结果:观察组TPMT活性是(6.1±2.1)U.mL-1pRBCs显著低于对照组(15.3±2.3)U.mL-1pRBCs,而观察组的基因突变率10.7%高于对照组1.2%。结论:TPMT活性低下和/或TPMT基因突变型个体,在服用标准剂量的巯嘌呤后,发生不良反应的危险较高,应及时发现此类患者并积极调整剂量实现安全有效的治疗。

巯嘌呤甲基转移酶活性对硫唑嘌呤中间代谢物6-巯基嘌呤药动学的影响

目的通过对硫唑嘌呤中间代谢物6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine,6-MP)药动学的研究,初步探讨巯嘌呤甲基转移酶(thiopurine methyltransferase,TPMT)活性对6-MP药动学的影响。方法根据红细胞中TPMT活性,受试者分成高酶活性组[(14.52±2.10)μmol.h-1.L-1RBCs,n=16]和低酶活性组[(7.02±2.44)μmol.h-1.L-1RBCs,n=4]。受试者早晨空腹口服硫唑嘌呤100 mg,8 h动态采集静脉血,HPLC测定血浆中6-MP浓度,采用WinNonlin程序进行房室模型拟合及药动学参数计算。结果:6-MP药动学符合一室模型特点,6-MP血浆浓度较低,高酶活性组和低酶活性组ρmax分别是(0.048 3±0.024 3)和(0.039 1±0.010 8)mg.L-1;两组AUC分别是(0.132 0±0.047 2)和(0.093 2±0.012 5)mg.h.L-1;6-MP半衰期短,分别是(1.09±0.65)和(1.25±1.05)h;6-MP表观分布容积大,两组Vd/F分别是(625.63±258.82)和(949.83±670.27)L。高酶活性组和低酶活性组在tmax和tlag存在显著性差异(P<0.05),而Ka,ρmax,AUC,Ke,t1/2,Vd/F,CL/F等药动学参数无显著性差异(P>0.05)。结论由于6-MP代谢的复杂性及独特的组织分布特性,使得TPMT活性对6-MP药动学的影响变得不明显,目前还不能借助6-MP药动学来推测硫唑嘌呤的治疗效果和毒性情况。

硫嘌呤甲基转移酶检测在临床个体化治疗中的意义和研究进展

硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）是存在于人体内的1种非金属胞质酶,能催化体内芳烃和杂环含巯基化合物上的S-甲基,这类化合物包括6-巯基嘌呤（6-MP）、硫唑嘌呤（AZA）和6-硫鸟嘌呤（6-TG）[1]。TPMT活性受多因素影响,导致酶活性基因型和表现型不能完全统一。TPMT遗传具有单基因共显性遗传特征,目前发现的突变类型超过35种,由专门的TPMT命名委员会进行命名[2]。常见类型为：TPMT＊2、TPMT＊3A、TPMT＊3B、TPMT＊3C（占总突变的95%以上）[3]。

广东连南汉族和瑶族儿童硫嘌呤甲基转移酶研究

目的:本文对硫嘌呤甲基转移酶（Thiopurine S-methyltransferase,TPMT）在广东连南地区健康汉族儿童（n=87）和瑶族儿童（n=126）中的活性分布和4种常见TPMT基因突变的等位基因频率进行研究。方法:采用高效液相色谱法测定红细胞的TPMT活性;采用等位基因特异性的PCR（allelespecific PCR,ASPCR）方法和限制性片断长度多态性（PCR-restrictionfragment length polymorphism,RFLP）的方法检测 TPMT2（G238C）、TPMT3A（A719G/G460A）、TPMT3B（G460A）和 TPMT3C（A719G）的等位基因频率。结果:健康汉族儿童和瑶族儿童的TPMT活性都呈正态分布,活性的平均值分别为13.01±2.80U·ml-1pRBC和13.54±3.89U·ml-1pRBC,两者的差异无显著性。在健康汉族儿童中只找到1例TPMT3C杂合子（该汉族儿童的TPMT活性为12.36U·ml-1pRBC）,没有找到TPMT2、TPMT3A和TPMT3B,汉族儿童总的TPMT基因突变频率是0.6％。在健康瑶族儿童中没有找到这几种突变。结论:广东连南地区汉族和瑶族儿童TPMT的活性分布和总的TPMT基因突变频率没有显著性差异。

巯嘌呤甲基转移酶基因多态性对成人急性淋巴细胞白血病6-MP治疗个体化的意义

目的检测使用6-巯基嘌呤(6-MP)维持治疗的成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因型和酶活性,并应用至临床以指导6-MP维持治疗。方法提取白细胞基因组DNA,以PCR结合限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)等技术检测TPMT基因型;以高效液相色谱法(HPLC)检测TPMT酶活性,对使用6-MP和甲氨蝶呤(MTX)维持化疗的69例成人ALL患者,监测化疗药物的临床和血液学毒性。结果 69例成人ALL患者中有4例酶活性较低的TPMT*1/*3C杂合子,未发现TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B。成人ALL患者使用6-MP治疗后,TPMT酶活性较治疗前上升。TPMT突变型组与野生型组观察到的临床药物毒性反应相近,但前者维持治疗期间6-MP的使用量明显低于后者[42.17 mg/(m2·d)和69.36 mg/(m2·d),P<0.01]。结论 TPMT基因多态性对6-MP治疗的药物毒性有实质性影响。成人ALL患者使用6-MP治疗前监测TPMT基因型和活性,有助于减少6-MP药物不良反应,实现临床治疗个体化。

硫嘌呤甲基转移酶分子机制研究进展

硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）在硫嘌呤类药物的体内代谢中起着关键作用,其活性水平与药物效应及毒副作用密切相关。TPMT活性具有遗传多态性和种族差异。TPMT酶活性降低或缺乏与其基因突变密切相关。对TPMT遗传多态性分子基础的研究具有重要意义。本文综述有关TPMT基因表达调控和TPMT基因突变的分子机制的研究进展。

环孢素、硝苯地平等5种肾移植受者常用药物对人体红细胞硫嘌呤甲基转移酶活性的影响

目的:研究肾移植受者中常与硫唑嘌呤(AZA)同时服用的药物如环孢素、泼尼松的活性代谢物氢化可的松、硝苯地平、卡托普利以及别嘌呤醇对硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性的影响。方法:应用高效液相色谱法(HPLC)测定健康受试者红细胞TPMT活性,其中中等活性和正常活性受试者各8例,计算药物各浓度对应的平均TPMT活性抑制率及有抑制作用药物的平均IC_(50)值。结果:环孢素、氢化可的松、卡托普利以及别嘌呤醇对TPMT活性抑制作用较弱。硝苯地平能明显抑制TPMT的活性,中等活性组的平均IC_(50)值为(24±17)μg/mL,正常活性组的平均,IC_(50)值为(12±10)μg/mL。结论:硝苯地平能明显抑制TPMT活性,当硝笨地平与嘌呤类药物同时服用时,应警惕可能发生不良相互作用。

变性高效液相色谱分析巯嘌呤甲基转移酶基因多态性位点

目的 应用变性高效液相色谱技术（DHPLC）分析巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因多态性位点.方法 用以PCR为基础的DHPLC,检测健康成人和脐血以及急性白血病病人,TPMT基因第5外显子G238C、第7外显子G460A和第10外显子A719G的3个多态性位点.结果 健康成人、脐血和急性白血病病人全部DNA样本,TPMT基因外显子区的3个位点的多态性频率为3.49%,远低于白种人和非洲人.变异的位点仅为第10外显子A719G,且均为杂合变异.TPMT第5外显子630例标本的色谱峰均为单峰.第7外显子有316例为单峰,214（34%）为杂合峰.将单峰标本进行1：1混合后重新进样也有杂合峰出现.经DNA测序分析,证实此区无序列变异;杂合峰标本在54和60℃为单峰,55～59℃均为杂合峰.而单峰标本峰形未随温度发生变化.说明DHPLC的检测误差并不是柱箱温度不合适引起的.第10外显子有608例为单峰,杂合峰为22例,其中10/22例标本进行DNA直接测序,证实为杂合变异.结论 DHPLC技术能快速筛选出TPMT第5和第10外显子区的多态性位点,但不能检测出第7外显子的多态性位点.因此,DHPLC不能作为单一方法进行TPMT基因多态性位点的检测.