富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路及视网膜血管通透性的影响

目的 探究富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管通透性及硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路的影响。方法 2020年6—9月,SD大鼠采用随机数字表法选取15只为空白组,其余大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)和高脂饲料喂养构建DR模型,造模成功的大鼠采用随机数字表法分为模型组、富氢水低、高剂量组(5、10 mL/kg),每组15只。连续给药28 d后,记录大鼠体质量,检测空腹血糖(FBG)水平;眼底照相和荧光素血管造影(FFA)观察大鼠右眼新生血管和荧光素渗漏现象;光学相干断层扫描(OCT)检测视网膜厚度;伊文思蓝-白蛋白复合物渗漏分析视网膜血管通透性;HE染色观察视网膜病理变化;免疫荧光染色观察新生血管形成情况;TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡;酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测量视网膜匀浆中血管生成素-1(Ang-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;WB法检测视网膜TXNIP/NLRP3通路和凋亡相关蛋白的表达。结果 与空白组相比,模型组大鼠FBG[(26.49±2.18)mmol/L比(5.76±1.09)mmol/L]、血-视网膜屏障(BRB)通透性[(32.51±2.05)μg/g比(11.24±1.76)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(23.31±2.14)%比(0.07±0.01)%]、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、TXNIP[(0.85±0.09)比(0.40±0.05)]、NLRP3[(0.93±0.10)比(0.48±0.07)]、IL-1β[(0.74±0.05)比(0.41±0.04)]、胱天蛋白酶-1(caspase-1)[(0.78±0.07)比(0.24±0.04)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(148.31±12.76)μm比(223.57±17.23)μm]显著降低(P<0.05),视网膜有较多新生血管和血管曲折,血管渗漏严重,视网膜细胞明显水肿,有大量炎性渗出,神经节细胞层(GCL)细胞数量减少;与模型组相比,富氢水低、高剂量组大鼠FBG[(20.85±3.45)mmol/L、(14.27±2.42)mmol/L比(26.49±2.18)mmol/L]、BRB通透性[(24.67±1.85)μg/g、(17.48±1.63)μg/g比(32.51±2.05)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(14.65±1.36)%、(9.85±1.22)%比(23.31±2.14)%]、Bax、Bcl-2、TXNIP[(0.64±0.09)、(0.52±0.08)比(0.85±0.09)]、NLRP3[(0.72±0.09)、(0.61±0.08)比(0.93±0.10)]、IL-1β[(0.62±0.06)、(0.53±0.05)比(0.74±0.05)]、caspase-1[(0.57±0.06)、(0.41±0.05)比(0.78±0.07)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(173.62±14.46)μm、(196.54±15.75)μm比(148.31±12.76)μm]明显增加(P<0.05),视网膜水肿情况减轻,GCL细胞数量明显增加,损伤得到改善。结论 富氢水可抑制新生血管形成,降低DR大鼠视网膜血管通透性,减轻视网膜神经元损伤;其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3通路的激活有关。

链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠坐骨神经硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的表达

目的初步探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路在链尿佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠坐骨神经中的作用。方法采用单次STZ腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠模型,取年龄、体重匹配的雄性大鼠作为正常对照组,监测血糖、体重变化,成模后12周应用电子Von Frey仪测定机械痛阈值,处死取坐骨神经进行坚牢蓝染色,采用免疫组织化学及Western blot法检测TXNIP、NLRP3、半胱天冬酶-1和白细胞介素(IL)-1β的表达,ELISA法测定血清中IL-1β、IL-18水平。结果糖尿病大鼠模型坐骨神经中TXNIP蛋白表达为3.78±0.08,较正常对照组0.99±0.06显著增加(t=26.980,P<0.0001);与正常对照组(0.97±0.05)相比,糖尿病组NLRP3蛋白表达(2.44±0.16)明显升高(t=8.885,P<0.0001);糖尿病组活化的半胱天冬酶-1蛋白表达为4.45±0.19,正常对照组为1.08±0.06,两组差异有统计学意义(t=16.900,P<0.0001)。糖尿病组IL-1β蛋白表达为4.50±0.16,较正常对照组1.19±0.08显著增加(t=18.630,P<0.0001);与正常对照组比较,糖尿病大鼠血清中IL-1β[(110.50±8.80)pg/ml比(17.97±3.18)pg/ml,t=9.892,P<0.0001]、IL-18[(591.70±8.78)pg/ml比(160.70±8.33)pg/ml,t=35.620,P<0.0001]均分泌增多。结论糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制可能与TXNIP表达增加、NLRP3炎症小体激活以及下游炎症反应有关,该通路可成为DPN治疗的新靶标。

硫氧还蛋白1/硫氧还蛋白相互作用蛋白对腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的调控及机制研究

目的探究硫氧还蛋白1(Trx1)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(Txnip)对腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的调控作用及可能机制。方法前瞻性采用随机数字表法将人腹膜间皮细胞(HMrSV5)分为三组,一组采用10%胎牛血清(FBS)培养液(空白组)、一组采用转染小干扰RNA(siRNA)阴性对照的4.25%腹膜透析液(PDS)与10%FBS培养液(si-NC组),一组采用转染靶向沉默Txnip siRNA的4.25%PDS与10%FBS培养液(si-Txnip组)。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹法(WB)测定各组Trx1、Txnip、NLRP3 mRNA与蛋白表达水平;采用MTT法测定各组培养不同时间点细胞增殖情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清液白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平和半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)活性。结果si-NC组、si-Txnip组培养1、2、3 d HMrSV5增殖活性均低于空白组(P<0.05);并且si-Txnip组培养1、2、3 d HMrSV5增殖活性均高于si-NC组(0.402±0.009比0.372±0.010、0.554±0.016比0.482±0.008、0.700±0.013比0.590±0.010),差异有统计学意义(P<0.05)。si-NC组、si-Txnip组Txnip、NLRP3 mRNA表达均高于空白组(P<0.05);并且si-Txnip组Txnip、NLRP3 mRNA表达低于si-NC组(1.43±0.32比2.80±0.43、2.38±0.35比3.42±0.40),si-Txnip组Trx1 mRNA表达低于空白组、高于si-NC组(2.24±0.35比3.50±0.38、1.18±0.23),差异有统计学意义(P<0.05)。si-NC组、si-Txnip组Txnip、NLRP3蛋白表达均高于空白组(P<0.05);si-Txnip组Txnip、NLRP3蛋白表达低于si-NC组(0.453±0.108比0.754±0.116),si-Txnip组Trx1蛋白表达低于空白组、高于si-NC组(0.514±0.112比0.753±0.125、0.297±0.010),差异有统计学意义(P<0.05)。si-NC组、si-Txnip组上清液IL-1β、IL-6水平均高于空白组[(0.45±0.07)、(0.35±0.06)μg/L比(0.23±0.05)μg/L,(3.00±0.38)、(2.32±0.30)μg/L比(1.95±0.34)μg/L],si-Txnip组上清液IL-1β、IL-6水平低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-Txnip组上清液caspase-1活性小于si-NC组、大于空白组[(0.87±0.26)U比(1.65±0.40)、(0.62±0.20)U],差异有统计学意义(P<0.05)。结论Trx1/Txnip系统中下调Txnip能明显抑制腹膜间皮细胞NLRP3炎症小体及功能。

芍药苷预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤氧化应激的保护作用及对Nrf-2/TXNIP/NLRP-3信号通路的影响

目的探讨芍药苷(PF)对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)大鼠氧化应激的影响及其可能作用机制。方法选取65只SD大鼠采用结扎冠状动脉(冠脉)左前降支建立MIRI模型,造模成功后随机分为模型组、PF低、高剂量(60 mg/kg、120 mg/kg)组和西药(1 mg/kg盐酸地尔硫卓)组各15只,另设对照组。检测大鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察心肌组织病理学变化;RT-PCR和Western blot检测心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体蛋白3(NLRP-3)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,各实验组AST、CK、CK-MB、LDH、MDA水平、TXNIP、NLRP-3 mRNA和蛋白水平降低,GSH-Px、SOD、CAT水平、Nrf2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与PF低剂量组比较,PF高剂量组以上指标效果更佳(P<0.05)。结论PF可减轻MIRI大鼠氧化应激,改善心肌损伤,可能与Nrf2/TXNIP/NLRP-3信号通路有关。

电针对帕金森病小鼠肠道硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体3信号通路的影响

目的:观察电针“风府”“太冲”“足三里”对帕金森病(PD)小鼠α-突触核蛋白(α-syn)、咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1(Claudin-1)及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体3(NLRP3)的影响,探讨电针对PD肠道屏障功能及炎性反应的影响及作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组,每组12只。采用鱼藤酮灌胃复制PD小鼠模型。电针组予“风府”“太冲”“足三里”电针治疗,30 min/次,1次/d,连续治疗14 d。观察各组小鼠行为学评分,旷场实验检测小鼠自主运动总路程,免疫组织化学法检测小鼠中脑黑质区和结肠组织中α-syn的阳性表达,阿尔新蓝染色法观察结肠形态及杯状细胞分布情况,实时荧光定量PCR法检测结肠组织中Occludin、Claudin-1、TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠行为学评分升高(P<0.01);旷场实验自主运动总路程减少(P<0.01);中脑黑质区和结肠组织α-syn阳性表达升高(P<0.01);结肠组织中杯状细胞、隐窝减少,肌层变薄;结肠组织中Occludin、Claudin-1 mRNA表达水平降低(P<0.01),TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠行为学评分降低(P<0.01);旷场实验自主运动总路程增加(P<0.01);中脑黑质区和结肠组织α-syn阳性表达降低(P<0.01);结肠组织中表面绒毛较完整,杯状细胞、隐窝增加,肌层增厚;结肠组织中Occludin、Claudin-1 mRNA表达水平升高(P<0.05),TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论:电针“风府”“太冲”“足三里”可清除PD小鼠中脑黑质区和结肠组织中异常聚集的α-syn,改善肠道屏障受损,调节TXNIP/NLRP3信号通路,延缓PD的发生发展。

五味子乙素预处理对过氧化氢诱导的H9c2细胞焦亡及TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的基于硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路观察五味子乙素对过氧化氢(H 2O 2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤及焦亡的影响,探讨五味子乙素的心肌保护作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,实验设4组:正常组细胞常规孵育,五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h,H 2O 2组细胞加入1000μmol/L的H 2O 2孵育30 min,H 2O 2+五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h后再加入H 2O 2孵育30 min。CCK-8法检测细胞活力,DCFH-DA探针检测细胞中活性氧(ROS)含量,试剂盒检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测细胞中TXNIP、硫氧还蛋白(Trx)、NLRP3、裂解的半胱氨酸蛋白酶-1(Cleaved Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)-N蛋白表达情况,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果与正常组比较,H 2O 2组细胞活力明显下降(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显升高(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H 2O 2组比较,H 2O 2+五味子乙素组的细胞活力明显升高(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显降低(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论五味子乙素可能通过影响TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路,从而减轻H 2O 2诱导的H9c2细胞氧化损伤,抑制心肌细胞焦亡。

2-十一烷酮通过调控重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白信号改善小鼠哮喘的研究

目的研究2-十一烷酮对实验性哮喘小鼠重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白(Nrf2/TXNIP/TrX)信号的影响。方法将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、对照组、实验组和联合组,每组6只。正常组未行造模,其余4组给予抗原混合液200μL致敏+1%OVA激发建模。在此基础上,对照组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮;实验组给予30 mg·kg^(-1)ML385;联合组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮+30 mg·kg^(-1)ML385;正常组和模型组均给予等量0.9%NaCl。用苏木精-伊红染色法观察肺组织炎性细胞的浸润情况,用酶联免疫吸附试验法检测血清免疫球蛋白E(IgE)和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)水平,用蛋白质印迹法检测Nrf2、TXNIP、TrX和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的表达水平。结果实验组、对照组、联合组、模型组和正常组的炎症评分分别为(4.33±0.65)、(1.00±0.41)、(3.00±1.21)、(3.33±0.32)和(0.67±0.31)分,血清IgE分别为(24.17±4.59)、(87.51±9.91)、(49.43±8.49)、(129.38±13.75)和(78.00±11.35)ng·mL^(-1),BALF中IL-1β分别为(44.17±7.11)、(154.45±17.75)、(87.04±15.72)、(216.29±19.64)和(134.87±23.83)pg·mL^(-1),Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.46±0.02、0.71±0.03、0.30±0.02和0.48±0.02,TXNIP蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.16±0.57、1.55±0.21、5.25±0.18和3.59±0.24,TrX蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.38±0.02、0.79±0.01、0.24±0.03和0.42±0.02,NLRP3蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.33±0.42、2.26±0.31、5.21±0.44和3.67±0.29。实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论2-十一烷酮对OVA诱导的小鼠哮喘具有明显的治疗作用,其机制可能与调节Nrf2/TXNIP/TrX信号,抑制NLRP3炎症小体活化有关。

基于TXNIP/NLRP3炎性小体通路研究清热凉血方对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的基于硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3炎性小体通路探讨清热凉血方(QRLX)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜屏障的保护作用及潜在机制。方法78只大鼠随机选取12只为对照(Control)组,其余大鼠采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建UC大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为UC组、柳氮磺吡啶组(SASP,270 mg/kg)、清热凉血方低(QRLX-L,14.8 g/kg)、中(QRLX-M,29.6 g/kg)、高剂量(QRLX-H,59.2 g/kg)组,每组12只。各给药组给予相应剂量药物灌胃,连续2 w。异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-dextran)灌胃检测肠道渗透性;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中二胺氧化酶(DAO)活性、D乳酸(LA)、内毒素(ET)和结肠组织白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理学变化;免疫组化法检测肠屏障功能相关紧密连接蛋白(ZO)-1和occludin表达;Western印迹检测结肠组织TXNIP/NLRP3通路相关蛋白表达。结果与Control组相比,UC组血清FITC-dextran浓度、血浆DAO活性、D-LA、ET、结肠匀浆中IL-1β、IL-18水平、TXNIP、NLRP3、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cl-caspase)-1 p10、cl-caspase-1 p20蛋白水平明显升高,结肠组织occludin、ZO-1阳性表达明显减少(均P<0.05);与UC组相比,SASP组和QRLX-H、QRLX-M组FITC-dextran浓度、血浆DAO活性、D-LA、ET、结肠匀浆中IL-1β、IL-18水平、TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1 p10、cl-caspase-1 p20蛋白水平明显降低,结肠组织occludin-1、ZO-1阳性表达明显增加(均P<0.05)。结论QRLX可增强UC大鼠的肠黏膜屏障功能,改善UC;其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3炎性小体通路的激活有关。

电针调控TXNIP/NLRP3通路介导的焦亡途径对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用研究

目的:探究电针对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的保护作用及机制。方法:将新生SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、HIBD组、电针组、电针+TXNIP NC组和电针+TXNIP OE组,除Sham组外,其余各组采用改良RICE法建立大鼠HIBD模型;电针组、电针+TXNIP NC组和电针+TXNIP OE组大鼠进行电针治疗,电针+TXNIP NC组、电针+TXNIP OE组大鼠分别经脑室注射TXNIP NC CRISPR质粒、TXNIP OE CRISPR质粒溶液,电针组注射无菌生理盐水;治疗周期完成后,采用莫里斯水迷宫测试大鼠学习记忆能力;红四氮唑(TTC)法检测脑梗死体积,尼氏(Nissl)和苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经细胞形态;免疫荧光法检测海马区细胞焦亡;蛋白免疫印迹法检测大鼠海马组织含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cleaved-caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-caspase-1)、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)表达;酶联免疫吸附法检测大鼠海马组织白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平。结果:Sham组无脑梗死,海马区神经细胞排列规则致密;与Sham组比较,HIBD组海马区神经细胞排列错乱疏松,脑梗死体积、逃避潜伏期、海马区cleaved-caspase-1+TUNEL+细胞、海马组织cleaved-caspase-1/pro-caspase-1、ASC、TXNIP、NLRP3蛋白及IL-18、IL-1β水平明显增加,穿越平台的次数明显减少(P<0.05);与HIBD组比较,电针组、电针+TXNIP NC组海马区细胞损伤明显改善,脑梗死体积、逃避潜伏期、海马区cleaved-caspase-1+TUNEL+细胞、海马组织cleaved-caspase-1/pro-caspase-1、ASC、TXNIP、NLRP3蛋白及IL-18、IL-1β水平减少,穿越平台的次数增加(P<0.05);与电针组、电针+TXNIP NC组比较,电针+TXNIP OE组海马区细胞损伤加重,脑梗死体积、逃避潜伏期、海马区cleaved-caspase-1+TUNEL+细胞、海马组织cleaved-caspase-1/pro-caspase-1、ASC、TXNIP、NLRP3蛋白及IL-18、IL-1β水平增加,穿越平台的次数减少(P<0.05)。结论:在大鼠HIBD模型中,电针可能通过抑制TXNIP/NLRP3通路介导的细胞焦亡,减轻神经细胞损伤,改善其学习记忆能力。

木犀草素抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征的改善作用

目的:探讨木犀草素调控活性氧(ROS)/硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3(NLRP3)信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的改善作用。方法:60只SD小鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(20 mg·kg^(-1))组、邻苯三酚(PG)(75 mg·kg^(-1))组和木犀草素(20 mg·kg^(-1))+PG(75 mg·kg^(-1))组,每组12只。除对照组外,其他组小鼠采用气管滴注脂多糖(LPS)溶液的方法建立ARDS模型,对照组小鼠气管滴注等量生理盐水。称量各组小鼠右肺湿质量和干质量,并计算湿质量/干质量(W/D)比值,检测各组小鼠动脉血氧分压(PaO_(2)),HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,检测各组小鼠吸气阻力(Ri)、每分钟通气量(MV)和呼气峰流速(PEF),检测各组小鼠肺组织中ROS、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)水平及血清白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠肺泡壁变厚,肺泡塌陷变形,肺间质水肿伴有大量炎性细胞浸润,肺组织有严重病理损伤,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平及TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平升高(P<0.05);MV、PEF、PaO_(2)和肺组织中GSH-Px及CAT水平降低(P<0.05)。与模型组比较,木犀草素组小鼠肺组织病理损伤均有所改善,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平和TXNIP、caspase-1、caspase-4及NLRP3蛋白表达水平均降低(P<0.05),MV、PEF和PaO_(2)及肺组织中GSH-Px和CAT水平均升高(P<0.05);PG组小鼠肺组织病理损伤均加重,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平及TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平均升高(P<0.05),MV、PEF和PaO_(2)及肺组织中GSH-Px和CAT水平均降低(P<0.05)。结论:木犀草素可通过抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活,减轻肺部炎症与氧化应激,改善ARDS小鼠肺损伤,修复其肺功能。

TXNIP/NLRP3信号通路在PCOS-IR大鼠卵巢慢性炎症中的作用机制研究

目的:研究硫氧还蛋白相互作用蛋白∕NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TXNIP∕NLRP3)信号通路对多囊卵巢综合征(PCOS)-胰岛素抵抗(IR)大鼠卵巢慢性炎症的影响。方法:颈背部皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)溶液0.2 ml(6 mg/100 g)建立PCOS-IR大鼠模型,建立成功的模型大鼠随机分为模型组、siRNA NC组、TXNIP siRNA组、RES干预组,每组8只,正常组8只。siRNA NC组、TXNIP siRNA组分别颈背部皮下注射5 nmol siRNA NC、TXNIP siRNA,5 d/次;RES干预组颈背部皮下注射50 mg/kg RES,正常组和模型组颈背部皮下注射等体积生理盐水,1次/d,10 d。放射免疫试剂盒检测血清中睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平,血糖仪检测血清中空腹血糖(FBG)水平,ELISA检测血清中空腹胰岛素(FINS)、IL-6、IL-1β、TNF-α水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI)。HE染色观察卵巢卵泡发育情况;qRT-PCR和Western blot检测卵巢组织中TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、pro-caspase-1蛋白水平。结果:模型组和siRNA NC组卵泡腔变大、出现囊肿现象,颗粒细胞层减少;TXNIP siRNA组和RES干预组出现黄体,卵泡腔变小,颗粒层增厚。与正常组相比,模型组、siRNA NC组T、LH、E_(2)、IGF-1、FBG、FINS、HOMA-IR,IL-6、IL-1β、TNF-α水平,卵巢组织中TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平,pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平升高,FSH水平降低(P<0.05);分别与模型组、siRNA NC组相比,TXNIP siRNA组、RES干预组T、LH、E_(2)、IGF-1、FBG、FINS、HOMA-IR,IL-6、IL-1β、TNF-α水平,卵巢组织中TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平,pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平降低,FSH水平升高(P<0.05)。结论:抑制TXNIP/NLRP3信号通路可实现对PCOS-IR大鼠卵巢慢性炎症的缓解。

麻黄水提物减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用及机制研究

目的研究麻黄水提物通过活性氧(reactive oxygen species,ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)/Nod样受体蛋白3(Nod like receptor protein 3,NLRP3)通路减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、麻黄水提物(400 mg/kg)组、三甲胺N-氧化物(trimethylamine N-oxide,TMAO,110 mg/kg)组、麻黄水提物(400 mg/kg)+TMAO(110 mg/kg)组,灌胃给药10 d后采用腹腔注射LPS(5 mg/kg)的方法建立LPS诱导ALI模型。造模后6 h,检测肺组织病理改变,支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞分类,血清及BALF中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,肺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总抗氧化力(total antioxidant capacity,T-AOC)含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平。结果模型对照组大鼠出现肺组织内炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚的病理改变,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均高于正常对照组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量低于正常对照组(P<0.05)。麻黄水提物组大鼠肺组织的病理改变较模型对照组改善,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均低于模型对照组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量高于模型对照组(P<0.05)。麻黄水提物+TMAO组大鼠肺组织的病理改变较麻黄水提物组加重,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均高于麻黄水提物组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量低于麻黄水提物组(P<0.05)。结论麻黄水提物可减轻LPS诱导ALI,并抑制炎症反应和氧化应激反应,其可能的分子机制与抑制ROS/TXNIP/NLRP3通路有关。

基于TXNIP/NLRP3信号通路探讨红景天苷对肠缺血再灌注损伤大鼠的作用机制

目的:探讨红景天苷(SAL)对肠缺血再灌注损伤(IIR)大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路及肠黏膜功能的影响。方法:60只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、模型组、低剂量组(红景天苷10 mg/kg)、中剂量组(红景天苷20 mg/kg)、高剂量组(红景天苷40 mg/kg),每组12只。建立肠缺血再灌注模型前24 h、12 h和1 h低、中、高剂量组分别给予10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg红景天苷预处理,模型组给予生理盐水处理。对照组不建立模型,且给予生理盐水处理。再灌注2 h后取材,计算小肠含水率;采用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测血清中白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素10(IL-10)水平;以苏木精—伊红染色(HE)检测各组大鼠小肠黏膜组织病理变化;检测小肠组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测小肠组织中TXNIP/NLRP3通路蛋白表达。结果:HE染色结果显示,对照组大鼠小肠组织无明显肠黏膜损伤,模型组大鼠肠黏膜损伤明显,低剂量组绒毛结构保留,中剂量组多数绒毛完整,高剂量组绒毛结构接近正常;与对照组相比,模型组大鼠小肠含水率、血清炎性因子IL-18、IL-1β水平、小肠组织中MDA水平及TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1 p20蛋白表达均显著升高,IL-10水平及SOD活性显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组小肠含水率、血清炎性因子IL-18、IL-1β水平、小肠组织中MDA水平及TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1 p20蛋白表达均显著降低,IL-10水平及SOD活性显著升高,具有一定的剂量依赖性(均P<0.05)。结论:红景天苷可能通过减轻氧化应激反应,抑制TXNIP∕NLRP3信号通路及其下游炎症反应,保护肠黏膜,减轻IIR。

Nod样受体蛋白3炎性体在2型糖尿病脑微血管内皮细胞中的变化及变化机制

目的探讨Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体在2型糖尿病脑微血管内皮中的变化及机制。方法 3月龄Wistar大鼠和自发性2型糖尿病(GK)大鼠各5只,采用免疫组织化学法观察NLRP3在脑组织中的表达;体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(CMEC)。不同糖浓度培养基模拟2型糖尿病内环境,活性氧(ROS)阻断剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为抑制剂,将细胞分为对照组(糖浓度5.6 mmol/L)、高糖1组(HG1组,培养基糖浓度10 mmol/L)、高糖2组(HG2组,培养基糖浓度20 mmol/L)、高糖3组(HG3,培养基糖浓度30 mmol/L)及高糖+NAC组(HG+NAC组,目的蛋白表达较明显组的糖浓度)。采用Western blotting法检测各组硫氧还蛋白交互蛋白(TXNIP)和NLRP3的表达,并对TXNIP和NLRP3是否存在相关性进行分析;采用ELISA法检测白介素1β(IL-1β)的含量;采用流式细胞术检测对照组、HG3组、HG+NAC组ROS的含量。结果 NLRP3在脑微血管壁聚集,与Wistar大鼠相比,GK大鼠的阳染强度,阳染血管数均有增加(P<0.05);与对照组相比,HG1组、HG2组、HG3组TXNIP、NLRP3的表达增加(P<0.01),HG3组最明显,细胞内IL-1β水平增高(P<0.01),ROS的含量增加(P<0.01);细胞内TXNIP和NLRP3的表达呈正相关性(r=0.993;P<0.05);给予ROS清除剂后,与HG3组相比,HG+NAC组细胞内ROS含量下降(P<0.01),TXNIP、NLRP3表达水平下降(P<0.01),细胞内IL-1β水平下降(P<0.01)。结论 NLRP3在2型糖尿病脑微血管内皮细胞中经ROS-TXNIP途径被激活,并且促进炎性因子IL-β的释放,在2型糖尿病脑微血管损伤中发挥重要作用。

血清CHI3L1、TXNIP水平对多囊卵巢综合征患者妊娠结局的预测价值

目的探究血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)水平对多囊卵巢综合征(PCOS)患者妊娠结局的预测价值。方法选取2021年6月至2023年1月临清市人民医院诊治的112例PCOS患者作为PCOS组,另选取同时间段同院孕检的健康孕妇105例作为对照组。比较PCOS组与对照组、PCOS组不同妊娠结局患者的临床指标,采用Pearson检验分析血清CHI3L1、TXNIP表达与孕酮水平、新生儿体重的相关性,采用多因素Logistic回归分析PCOS患者妊娠结局的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CHI3L1、TXNIP表达对PCOS患者妊娠结局的预测价值。结果妊娠结局不良组(n=43)的孕妇剖宫产率及黄体生成素、CHI3L1、TXNIP、孕酮、空腹血糖、空腹胰岛素水平均高于妊娠结局良好组(n=69)和对照组(P<0.05),新生儿体重低于妊娠良好组和对照组(P<0.05)。PCOS患者血清CHI3L1、TXNIP表达水平与孕妇孕酮水平均呈正相关(P<0.05)。剖宫产率及新生儿体重、黄体生成素、CHI3L1、TXNIP、孕酮、空腹血糖、空腹胰岛素水平均为PCOS患者妊娠结局的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清CHI3L1、TXNIP单独和联合预测PCOS发生的曲线下面积(AUC)分别为0.822、0.844、0.915,联合诊断高于CHI3L1、TXNIP任意单独诊断(P<0.05)。结论PCOS患者CHI3L1、TXNIP水平升高,两者联合对PCOS患者妊娠结局的预测价值更高。

舒芬太尼调节AMPK/TXNIP/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的探讨舒芬太尼通过调节腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响。方法将人肺泡上皮Ⅱ型细胞(AECⅡ)细胞培养至对数期,然后分为对照组(正常葡萄糖培养)、脂多糖组(50μg/mL脂多糖诱导损伤)、低浓度舒芬太尼组(20μmol/L)、高浓度舒芬太尼组(40μmol/L)、高浓度舒芬太尼(40μmol/L)+AMPK-IN-3组(50μmol/L AMPK抑制剂)。MTT法检测细胞增殖能力,Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)双染色检测细胞焦亡,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR检测细胞焦亡相关因子半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、焦孔素D(GSDMD)mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中AMPK、磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、TXNIP、NLRP3蛋白表达。结果与对照组比较,脂多糖组AECⅡ细胞的细胞存活率降低,PI+阳性细胞增多,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α释放增加,Caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达增加,p-AMPK/AMPK表达减少,TXNIP、NLRP3表达增加(P<0.05)。与脂多糖组比较,低浓度舒芬太尼组、高浓度舒芬太尼组AECⅡ细胞的细胞存活率升高,PI+阳性细胞减少,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α释放减少,Caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达降低,p-AMPK/AMPK表达增多,TXNIP、NLRP3表达减少(P<0.05)。与高浓度舒芬太尼组比较,高浓度舒芬太尼+AMPK-IN-3组AECⅡ细胞存活率降低,PI+阳性细胞增多,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α释放增加,Caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达增加,p-AMPK/AMPK表达减少,TXNIP、NLRP3表达增加(P<0.05)。结论舒芬太尼可能通过调控AMPK/TXNIP/NLRP3信号通路改善脂多糖诱导的肺泡上皮细胞焦亡。

毛蕊花糖苷调节IRE1α/TXNIP/NLRP3信号通路对重症急性胰腺炎模型大鼠肺损伤的影响

目的探讨毛蕊花糖苷(acteoside,ACT)调节肌醇需求酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)通路对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型大鼠肺损伤的影响。方法大鼠随机分为SAP组、正常组、毛蕊花糖苷低剂量(ACT-L)组和高剂量(ACT-H)组、乌司他丁组、ACT-H+空载体组、ACT-H+IRE1α过表达腺病毒载体(Ad-IRE1α)组,每组12只。除正常组外,其他组大鼠均通过向胆胰管注入5%牛磺胆酸钠溶液的方式构建SAP模型,建模成功后给药2天,一天一次。检测血清脂肪酶、淀粉酶水平及肺湿重/干重比值的变化;HE染色检测胰腺、肺组织病理变化并评估病理评分;试剂盒检测肺组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;ELISA检测肺组织中白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平;蛋白质印迹检测肺组织中IRE1α、TXNIP、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)蛋白水平。结果与正常组相比,SAP组大鼠胰腺水肿,有大量细胞坏死以及炎症细胞浸润,肺组织炎症细胞浸润明显,肺泡充血、肺泡壁水肿严重,胰腺、肺组织病理评分、血清中脂肪酶、淀粉酶水平、肺湿重/干重比值、肺组织中MDA、ROS水平、IL-18、IL-1β水平及IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1蛋白升高,肺组织中SOD水平降低(P<0.05);与SAP组相比,ACT-L组、ACT-H组、乌司他丁组大鼠胰腺及肺组织损伤有所改善,胰腺、肺组织病理评分、血清中脂肪酶、淀粉酶水平、肺湿重/干重比值、肺组织中MDA、ROS水平、IL-18、IL-1β水平及IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1蛋白降低,肺组织中SOD水平升高(P<0.05);与ACT-H+空载体组相比,ACT-H+Ad-IRE1α组大鼠胰腺及肺组织损伤加剧,胰腺、肺组织病理评分、血清中脂肪酶、淀粉酶水平、肺湿重/干重比值、肺组织中MDA、ROS水平、IL-18、IL-1β水平及IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1蛋白升高,肺组织中SOD水平降低(P<0.05)。结论ACT改善SAP大鼠肺损伤的机制可能与抑制IRE1α/TXNIP/NLRP3通路活化有关。

藏红花素对膝关节骨性关节炎大鼠的治疗作用及TXNIP/NLRP3信号通路的影响

目的探究藏红花素对膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠的治疗作用及对硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3信号通路的影响。方法构建KOA大鼠模型,48只大鼠建模成功随机分为模型组,藏红花素低(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组,硫酸氨基葡萄糖(170 mg/kg)组,每组12只。另取12只作为假手术组(实验过程中仅打开关节腔不做其他处理)。各组给予对应药物灌胃28 d,1次/d。酶联免疫吸附试验检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠软骨组织病理学变化;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测大鼠软骨组织中MDA、SOD水平;荧光定量-聚合酶链反应(PCR)法检测软骨组织中TXNIP、NLRP3信使RNA(mRNA)水平;Western印迹检测软骨组织中TXNIP、NLRP3蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组软骨组织表面不光滑且滑膜增生,软骨细胞紊乱且减少,同时有大量炎性细胞浸润,血清中TNF-α、IL-1β水平,软骨组织中MDA水平、TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平显著升高,软骨组织SOD水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,藏红花素低、高剂量组软骨组织病理变化依次改善,血清中TNF-α、IL-1β水平,软骨组织中MDA水平、TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平显著降低,软骨组织SOD水平显著升高(P<0.05);硫酸氨基葡萄糖组和藏红花素高剂量组软骨组织病理变化及各项指标比较均无显著差异(P>0.05)。结论藏红花素可减轻KOA大鼠软骨损伤,改善炎症和氧化应激反应,其机制可能与抑制TXNIP/NLRP3信号通路相关。

原儿茶酸对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞炎症反应的保护作用及机制

目的探讨原儿茶酸对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)炎症反应的保护作用及其可能机制。方法(1)将HPDLF分为空白对照组、脂多糖组、脂多糖+5.00μmol/L原儿茶酸组和脂多糖+10.00μmol/L原儿茶酸组。除空白对照组外,其他3组均加入脂多糖(10μg/mL)及不同浓度的原儿茶酸(0μmol/L、5.00μmol/L、10.00μmol/L),均培养24 h后检测相关指标。(2)将HPDLF分为si-NC组、脂多糖+si-NC组、脂多糖+原儿茶酸+si-NC组、脂多糖+原儿茶酸+si-SIRT1组。先将si-NC和si-SIRT1转染至HPDLF,除si-NC组外,其他3组均加入脂多糖(10μg/mL),在此基础上,脂多糖+原儿茶酸+si-NC组、脂多糖+原儿茶酸+si-SIRT1组同时加入原儿茶酸(10μmol/L)。干预24 h后检测相关指标。采用细胞计数检测法检测HPDLF活力情况,采用流式细胞术检测HPDLF活性氧簇水平,采用蛋白质印迹法检测HPDLF中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、激活型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)和SIRT1蛋白的表达,采用酶联免疫吸附测定法检测HPDLF中白细胞介素(IL)-1β和IL-18的水平,采用实时荧光定量PCR检测SIRT1 mRNA表达水平。结果(1)与空白对照组相比,脂多糖+5.00μmol/L原儿茶酸组和脂多糖+10.00μmol/L原儿茶酸组细胞活力降低(均P<0.05),但脂多糖组的细胞活力与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,脂多糖组SIRT1 mRNA和蛋白表达水平降低,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平,TXNIP、NLRP3和激活型Caspase1蛋白表达水平升高(均P<0.05);与脂多糖组相比,脂多糖+5.00μmol/L原儿茶酸组和脂多糖+10.00μmol/L原儿茶酸组SIRT1 mRNA和蛋白表达水平升高,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平,TXNIP和激活型Caspase1蛋白表达水平降低,且脂多糖+10.00μmol/L原儿茶酸组细胞NLRP3蛋白表达水平低于脂多糖组(均P<0.05)。(2)与si-NC组相比,脂多糖+si-NC组细胞SIRT1蛋白表达水平降低,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平、TXNIP和NLRP3蛋白表达水平升高(均P<0.05);与脂多糖+si-NC组相比,脂多糖+原儿茶酸+si-NC组细胞SIRT1蛋白表达水平升高,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平、TXNIP和NLRP3蛋白表达水平降低(均P<0.05);与脂多糖+原儿茶酸+si-NC组相比,脂多糖+原儿茶酸+si-SIRT1组细胞SIRT1蛋白表达水平降低,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平、TXNIP和NLRP3蛋白表达水平升高(均P<0.05)。结论原儿茶酸可通过上调HPDLF中SIRT1的表达,抑制TXNIP-NLRP3轴的表达,在脂多糖诱导的HPDLF炎症损伤中发挥保护作用。

基于ROS/TXNIP/NLRP3通路的柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的观察柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞焦亡的影响,从ROS/TXNIP/NLRP3通路探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组和柴胡三参胶囊低、中、高剂量组,每组10只。柴胡三参胶囊低、中、高剂量组分别按0.15、0.3、0.6 g/kg灌胃,曲美他嗪组按5.4 mg/kg灌胃,假手术组和模型组予等体积生理盐水灌胃,28 d后造模。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型。HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构,ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β含量,DCFH-DA荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,免疫荧光染色检测心肌细胞焦亡,Western blot和RT-PCR分别检测心肌组织硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)蛋白和mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维结构不完整,细胞出现脂肪样变、间质水肿及出血,伴有少量炎性细胞浸润,胞质疏松,胞膜破裂严重、有大量孔隙形成;血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著增加;心肌组织ROS含量显著增加,细胞焦亡率显著升高,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠心肌纤维结构均有不同程度改善,心肌细胞脂肪样变减少,间质水肿及出血程度减轻,无明显炎性细胞浸润,胞质较致密,胞膜相对完整、孔隙减少;柴胡三参胶囊中、高剂量组和曲美他嗪组大鼠血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著减少,心肌组织ROS含量显著减少,细胞焦亡率显著降低,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论柴胡三参胶囊可有效减轻MIRI大鼠心肌细胞损伤,其机制可能与下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,抑制心肌细胞焦亡有关。