电针对帕金森病小鼠肠道硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体3信号通路的影响

目的:观察电针“风府”“太冲”“足三里”对帕金森病(PD)小鼠α-突触核蛋白(α-syn)、咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1(Claudin-1)及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体3(NLRP3)的影响,探讨电针对PD肠道屏障功能及炎性反应的影响及作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组,每组12只。采用鱼藤酮灌胃复制PD小鼠模型。电针组予“风府”“太冲”“足三里”电针治疗,30 min/次,1次/d,连续治疗14 d。观察各组小鼠行为学评分,旷场实验检测小鼠自主运动总路程,免疫组织化学法检测小鼠中脑黑质区和结肠组织中α-syn的阳性表达,阿尔新蓝染色法观察结肠形态及杯状细胞分布情况,实时荧光定量PCR法检测结肠组织中Occludin、Claudin-1、TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠行为学评分升高(P<0.01);旷场实验自主运动总路程减少(P<0.01);中脑黑质区和结肠组织α-syn阳性表达升高(P<0.01);结肠组织中杯状细胞、隐窝减少,肌层变薄;结肠组织中Occludin、Claudin-1 mRNA表达水平降低(P<0.01),TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠行为学评分降低(P<0.01);旷场实验自主运动总路程增加(P<0.01);中脑黑质区和结肠组织α-syn阳性表达降低(P<0.01);结肠组织中表面绒毛较完整,杯状细胞、隐窝增加,肌层增厚;结肠组织中Occludin、Claudin-1 mRNA表达水平升高(P<0.05),TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论:电针“风府”“太冲”“足三里”可清除PD小鼠中脑黑质区和结肠组织中异常聚集的α-syn,改善肠道屏障受损,调节TXNIP/NLRP3信号通路,延缓PD的发生发展。

五味子乙素预处理对过氧化氢诱导的H9c2细胞焦亡及TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的基于硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路观察五味子乙素对过氧化氢(H 2O 2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤及焦亡的影响,探讨五味子乙素的心肌保护作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,实验设4组:正常组细胞常规孵育,五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h,H 2O 2组细胞加入1000μmol/L的H 2O 2孵育30 min,H 2O 2+五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h后再加入H 2O 2孵育30 min。CCK-8法检测细胞活力,DCFH-DA探针检测细胞中活性氧(ROS)含量,试剂盒检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测细胞中TXNIP、硫氧还蛋白(Trx)、NLRP3、裂解的半胱氨酸蛋白酶-1(Cleaved Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)-N蛋白表达情况,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果与正常组比较,H 2O 2组细胞活力明显下降(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显升高(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H 2O 2组比较,H 2O 2+五味子乙素组的细胞活力明显升高(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显降低(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论五味子乙素可能通过影响TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路,从而减轻H 2O 2诱导的H9c2细胞氧化损伤,抑制心肌细胞焦亡。

芍药苷预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤氧化应激的保护作用及对Nrf-2/TXNIP/NLRP-3信号通路的影响

目的探讨芍药苷(PF)对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)大鼠氧化应激的影响及其可能作用机制。方法选取65只SD大鼠采用结扎冠状动脉(冠脉)左前降支建立MIRI模型,造模成功后随机分为模型组、PF低、高剂量(60 mg/kg、120 mg/kg)组和西药(1 mg/kg盐酸地尔硫卓)组各15只,另设对照组。检测大鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察心肌组织病理学变化;RT-PCR和Western blot检测心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体蛋白3(NLRP-3)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,各实验组AST、CK、CK-MB、LDH、MDA水平、TXNIP、NLRP-3 mRNA和蛋白水平降低,GSH-Px、SOD、CAT水平、Nrf2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与PF低剂量组比较,PF高剂量组以上指标效果更佳(P<0.05)。结论PF可减轻MIRI大鼠氧化应激,改善心肌损伤,可能与Nrf2/TXNIP/NLRP-3信号通路有关。

2-十一烷酮通过调控重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白信号改善小鼠哮喘的研究

目的研究2-十一烷酮对实验性哮喘小鼠重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白(Nrf2/TXNIP/TrX)信号的影响。方法将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、对照组、实验组和联合组,每组6只。正常组未行造模,其余4组给予抗原混合液200μL致敏+1%OVA激发建模。在此基础上,对照组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮;实验组给予30 mg·kg^(-1)ML385;联合组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮+30 mg·kg^(-1)ML385;正常组和模型组均给予等量0.9%NaCl。用苏木精-伊红染色法观察肺组织炎性细胞的浸润情况,用酶联免疫吸附试验法检测血清免疫球蛋白E(IgE)和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)水平,用蛋白质印迹法检测Nrf2、TXNIP、TrX和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的表达水平。结果实验组、对照组、联合组、模型组和正常组的炎症评分分别为(4.33±0.65)、(1.00±0.41)、(3.00±1.21)、(3.33±0.32)和(0.67±0.31)分,血清IgE分别为(24.17±4.59)、(87.51±9.91)、(49.43±8.49)、(129.38±13.75)和(78.00±11.35)ng·mL^(-1),BALF中IL-1β分别为(44.17±7.11)、(154.45±17.75)、(87.04±15.72)、(216.29±19.64)和(134.87±23.83)pg·mL^(-1),Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.46±0.02、0.71±0.03、0.30±0.02和0.48±0.02,TXNIP蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.16±0.57、1.55±0.21、5.25±0.18和3.59±0.24,TrX蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.38±0.02、0.79±0.01、0.24±0.03和0.42±0.02,NLRP3蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.33±0.42、2.26±0.31、5.21±0.44和3.67±0.29。实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论2-十一烷酮对OVA诱导的小鼠哮喘具有明显的治疗作用,其机制可能与调节Nrf2/TXNIP/TrX信号,抑制NLRP3炎症小体活化有关。

血清CHI3L1、TXNIP水平对多囊卵巢综合征患者妊娠结局的预测价值

目的探究血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)水平对多囊卵巢综合征(PCOS)患者妊娠结局的预测价值。方法选取2021年6月至2023年1月临清市人民医院诊治的112例PCOS患者作为PCOS组,另选取同时间段同院孕检的健康孕妇105例作为对照组。比较PCOS组与对照组、PCOS组不同妊娠结局患者的临床指标,采用Pearson检验分析血清CHI3L1、TXNIP表达与孕酮水平、新生儿体重的相关性,采用多因素Logistic回归分析PCOS患者妊娠结局的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CHI3L1、TXNIP表达对PCOS患者妊娠结局的预测价值。结果妊娠结局不良组(n=43)的孕妇剖宫产率及黄体生成素、CHI3L1、TXNIP、孕酮、空腹血糖、空腹胰岛素水平均高于妊娠结局良好组(n=69)和对照组(P<0.05),新生儿体重低于妊娠良好组和对照组(P<0.05)。PCOS患者血清CHI3L1、TXNIP表达水平与孕妇孕酮水平均呈正相关(P<0.05)。剖宫产率及新生儿体重、黄体生成素、CHI3L1、TXNIP、孕酮、空腹血糖、空腹胰岛素水平均为PCOS患者妊娠结局的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清CHI3L1、TXNIP单独和联合预测PCOS发生的曲线下面积(AUC)分别为0.822、0.844、0.915,联合诊断高于CHI3L1、TXNIP任意单独诊断(P<0.05)。结论PCOS患者CHI3L1、TXNIP水平升高,两者联合对PCOS患者妊娠结局的预测价值更高。

电针调控TXNIP/NLRP3通路介导的焦亡途径对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用研究

目的:探究电针对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的保护作用及机制。方法:将新生SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、HIBD组、电针组、电针+TXNIP NC组和电针+TXNIP OE组,除Sham组外,其余各组采用改良RICE法建立大鼠HIBD模型;电针组、电针+TXNIP NC组和电针+TXNIP OE组大鼠进行电针治疗,电针+TXNIP NC组、电针+TXNIP OE组大鼠分别经脑室注射TXNIP NC CRISPR质粒、TXNIP OE CRISPR质粒溶液,电针组注射无菌生理盐水;治疗周期完成后,采用莫里斯水迷宫测试大鼠学习记忆能力;红四氮唑(TTC)法检测脑梗死体积,尼氏(Nissl)和苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经细胞形态;免疫荧光法检测海马区细胞焦亡;蛋白免疫印迹法检测大鼠海马组织含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cleaved-caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-caspase-1)、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)表达;酶联免疫吸附法检测大鼠海马组织白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平。结果:Sham组无脑梗死,海马区神经细胞排列规则致密;与Sham组比较,HIBD组海马区神经细胞排列错乱疏松,脑梗死体积、逃避潜伏期、海马区cleaved-caspase-1+TUNEL+细胞、海马组织cleaved-caspase-1/pro-caspase-1、ASC、TXNIP、NLRP3蛋白及IL-18、IL-1β水平明显增加,穿越平台的次数明显减少(P<0.05);与HIBD组比较,电针组、电针+TXNIP NC组海马区细胞损伤明显改善,脑梗死体积、逃避潜伏期、海马区cleaved-caspase-1+TUNEL+细胞、海马组织cleaved-caspase-1/pro-caspase-1、ASC、TXNIP、NLRP3蛋白及IL-18、IL-1β水平减少,穿越平台的次数增加(P<0.05);与电针组、电针+TXNIP NC组比较,电针+TXNIP OE组海马区细胞损伤加重,脑梗死体积、逃避潜伏期、海马区cleaved-caspase-1+TUNEL+细胞、海马组织cleaved-caspase-1/pro-caspase-1、ASC、TXNIP、NLRP3蛋白及IL-18、IL-1β水平增加,穿越平台的次数减少(P<0.05)。结论:在大鼠HIBD模型中,电针可能通过抑制TXNIP/NLRP3通路介导的细胞焦亡,减轻神经细胞损伤,改善其学习记忆能力。

舒芬太尼调节AMPK/TXNIP/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的探讨舒芬太尼通过调节腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响。方法将人肺泡上皮Ⅱ型细胞(AECⅡ)细胞培养至对数期,然后分为对照组(正常葡萄糖培养)、脂多糖组(50μg/mL脂多糖诱导损伤)、低浓度舒芬太尼组(20μmol/L)、高浓度舒芬太尼组(40μmol/L)、高浓度舒芬太尼(40μmol/L)+AMPK-IN-3组(50μmol/L AMPK抑制剂)。MTT法检测细胞增殖能力,Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)双染色检测细胞焦亡,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR检测细胞焦亡相关因子半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、焦孔素D(GSDMD)mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中AMPK、磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、TXNIP、NLRP3蛋白表达。结果与对照组比较,脂多糖组AECⅡ细胞的细胞存活率降低,PI+阳性细胞增多,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α释放增加,Caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达增加,p-AMPK/AMPK表达减少,TXNIP、NLRP3表达增加(P<0.05)。与脂多糖组比较,低浓度舒芬太尼组、高浓度舒芬太尼组AECⅡ细胞的细胞存活率升高,PI+阳性细胞减少,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α释放减少,Caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达降低,p-AMPK/AMPK表达增多,TXNIP、NLRP3表达减少(P<0.05)。与高浓度舒芬太尼组比较,高浓度舒芬太尼+AMPK-IN-3组AECⅡ细胞存活率降低,PI+阳性细胞增多,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α释放增加,Caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达增加,p-AMPK/AMPK表达减少,TXNIP、NLRP3表达增加(P<0.05)。结论舒芬太尼可能通过调控AMPK/TXNIP/NLRP3信号通路改善脂多糖诱导的肺泡上皮细胞焦亡。

基于ROS/TXNIP/NLRP3通路的柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的观察柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞焦亡的影响,从ROS/TXNIP/NLRP3通路探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组和柴胡三参胶囊低、中、高剂量组,每组10只。柴胡三参胶囊低、中、高剂量组分别按0.15、0.3、0.6 g/kg灌胃,曲美他嗪组按5.4 mg/kg灌胃,假手术组和模型组予等体积生理盐水灌胃,28 d后造模。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型。HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构,ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β含量,DCFH-DA荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,免疫荧光染色检测心肌细胞焦亡,Western blot和RT-PCR分别检测心肌组织硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)蛋白和mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维结构不完整,细胞出现脂肪样变、间质水肿及出血,伴有少量炎性细胞浸润,胞质疏松,胞膜破裂严重、有大量孔隙形成;血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著增加;心肌组织ROS含量显著增加,细胞焦亡率显著升高,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠心肌纤维结构均有不同程度改善,心肌细胞脂肪样变减少,间质水肿及出血程度减轻,无明显炎性细胞浸润,胞质较致密,胞膜相对完整、孔隙减少;柴胡三参胶囊中、高剂量组和曲美他嗪组大鼠血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著减少,心肌组织ROS含量显著减少,细胞焦亡率显著降低,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论柴胡三参胶囊可有效减轻MIRI大鼠心肌细胞损伤,其机制可能与下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,抑制心肌细胞焦亡有关。

原儿茶酸对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞炎症反应的保护作用及机制

目的探讨原儿茶酸对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)炎症反应的保护作用及其可能机制。方法(1)将HPDLF分为空白对照组、脂多糖组、脂多糖+5.00μmol/L原儿茶酸组和脂多糖+10.00μmol/L原儿茶酸组。除空白对照组外,其他3组均加入脂多糖(10μg/mL)及不同浓度的原儿茶酸(0μmol/L、5.00μmol/L、10.00μmol/L),均培养24 h后检测相关指标。(2)将HPDLF分为si-NC组、脂多糖+si-NC组、脂多糖+原儿茶酸+si-NC组、脂多糖+原儿茶酸+si-SIRT1组。先将si-NC和si-SIRT1转染至HPDLF,除si-NC组外,其他3组均加入脂多糖(10μg/mL),在此基础上,脂多糖+原儿茶酸+si-NC组、脂多糖+原儿茶酸+si-SIRT1组同时加入原儿茶酸(10μmol/L)。干预24 h后检测相关指标。采用细胞计数检测法检测HPDLF活力情况,采用流式细胞术检测HPDLF活性氧簇水平,采用蛋白质印迹法检测HPDLF中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、激活型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)和SIRT1蛋白的表达,采用酶联免疫吸附测定法检测HPDLF中白细胞介素(IL)-1β和IL-18的水平,采用实时荧光定量PCR检测SIRT1 mRNA表达水平。结果(1)与空白对照组相比,脂多糖+5.00μmol/L原儿茶酸组和脂多糖+10.00μmol/L原儿茶酸组细胞活力降低(均P<0.05),但脂多糖组的细胞活力与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,脂多糖组SIRT1 mRNA和蛋白表达水平降低,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平,TXNIP、NLRP3和激活型Caspase1蛋白表达水平升高(均P<0.05);与脂多糖组相比,脂多糖+5.00μmol/L原儿茶酸组和脂多糖+10.00μmol/L原儿茶酸组SIRT1 mRNA和蛋白表达水平升高,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平,TXNIP和激活型Caspase1蛋白表达水平降低,且脂多糖+10.00μmol/L原儿茶酸组细胞NLRP3蛋白表达水平低于脂多糖组(均P<0.05)。(2)与si-NC组相比,脂多糖+si-NC组细胞SIRT1蛋白表达水平降低,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平、TXNIP和NLRP3蛋白表达水平升高(均P<0.05);与脂多糖+si-NC组相比,脂多糖+原儿茶酸+si-NC组细胞SIRT1蛋白表达水平升高,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平、TXNIP和NLRP3蛋白表达水平降低(均P<0.05);与脂多糖+原儿茶酸+si-NC组相比,脂多糖+原儿茶酸+si-SIRT1组细胞SIRT1蛋白表达水平降低,而活性氧簇、IL-1β和IL-18水平、TXNIP和NLRP3蛋白表达水平升高(均P<0.05)。结论原儿茶酸可通过上调HPDLF中SIRT1的表达,抑制TXNIP-NLRP3轴的表达,在脂多糖诱导的HPDLF炎症损伤中发挥保护作用。

NASH患者外周血单个核细胞TXNIP/NLRP3水平变化及其临床意义探讨

目的探讨非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者外周血单个核细胞(PBMCs)硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)水平变化及其临床意义。方法2019年1月~2021年1月我院收治的150例NASH患者和同期体检的单纯性脂肪肝患者45例,取外周血分离PBMCs,并检测TXNIP/NLRP3 mRNA。对NASH患者行两次肝穿刺活检,将肝组织病变程度分为轻度、中度和重度及进展和无进展组。结果NASH患者血清ALT和AST水平分别为(72.2±6.9)U/L和(61.8±5.1)U/L,显著高于单纯性脂肪肝组【分别为(33.4±4.0)U/L和(31.3±3.1)U/L,P<0.05】;NASH组PBMCs TXNIP mRNA、NLRP3 mRNA和TXNIP/NLRP3比值分别为(1.9±0.1)、(1.5±0.1)和(1.3±0.1),显著高于单纯性脂肪肝组【分别为(0.7±0.1)、(0.6±0.1)和(1.1±0.1),P<0.05】;33例重度NASH组PBMCs TXNIP mRNA、NLRP3 mRNA和TXNIP/NLRP3比值分别为(2.4±0.2)、(1.9±0.2)和(1.6±0.1),显著高于49例轻度组【分别为(1.5±0.1)、(1.2±0.1)和(1.0±0.1),P<0.05】或68例中度组【分别为(2.0±0.2)、(1.5±0.1)和(1.4±0.1),P<0.05】;31例进展期NASH组PBMCs TXNIP mRNA、NLRP3 mRNA和TXNIP/NLRP3比值分别为(2.1±0.2)、(1.7±0.2)和(1.5±0.1),显著高于119例无进展组【分别为(1.8±0.1)、(1.4±0.1)和(1.2±0.1),P<0.05】。结论NASH患者PBMCs TXNIP/NLRP3基因水平显著升高,与肝功能损害程度明显存在某种关系。积极监测患者PBMCs这些基因的动态变化可能对评估病情和疾病转归有重要的意义,值得深入研究。

靶向激活miR-148b-3p对缺血性脑卒中小鼠脑功能的影响及机制

目的观察激活miR-148b-3p对小鼠缺血性脑卒中的影响,探讨硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴在该影响中的作用。方法将50只健康雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、栓塞模型组(MCAO组)、NLRP3抑制剂组(MCC950组)、miR阴性对照转染组(NC agomiR组)、miR-148b-3p激动剂转染组(miR-148b-3p agomiR组),每组10只。假手术组仅做手术损伤;其他各组小鼠采用线栓致大脑中动脉阻塞(MCAO)法建立小鼠缺血性脑卒中模型,使小鼠接受脑缺血1 h和再灌注72 h。MCC950组于手术后即刻腹腔注射50 mg/kg体重的NLRP3抑制剂MCC950。Sham组和MCAO组于手术后即刻腹腔注射同等容积的磷酸缓冲盐溶液(PBS)。NC agomiR组、miR-148b-3p agomiR组在手术前60 min通过侧脑室注射30 pmol/g体重的agomiR阴性对照品或miR-148b-3p agomiR。再灌注72 h后评估小鼠脑功能缺陷程度,氯化三苯基四氮唑染色法检测脑梗死灶体积百分数,RT-PCR法检测脑组织miR-148b-3p表达量,蛋白质印迹技术检测脑组织TXNIP、NLRP3蛋白表达量。另外,在小鼠神经瘤母细胞N2a细胞系上,采用双荧光素酶实验验证miR-148b-3p对TXNIP mRNA的靶向调节作用。结果与Sham组比较,MCAO组小鼠脑功能缺陷评分和脑梗死灶体积百分数均明显增大,缺血区脑组织miR-148b-3p表达量减少,TXNIP、NLRP3蛋白表达量增多;与miR转染阴性对照组比较,miR-148b-3p激动剂转染组小鼠脑功能缺陷评分和脑梗死灶体积百分数均明显降低,缺血区脑组织miR-148b-3p表达量增多,TXNIP、NLRP3蛋白表达量减少;与MCAO组比较,MCC950组小鼠脑功能缺陷评分和脑梗死灶体积百分数均明显降低。荧光素酶实验显示,TXNIP是miR-148b-3p的1个直接调节靶。结论内源性miR-148b-3p的表达下调可能与小鼠缺血性脑卒中发生相关;激活miR-148b-3p则对小鼠缺血性脑卒中有一定保护性作用,其机制与其抑制促炎性TXNIP/NLRP3信号轴有关。

TXNIP/NLRP3在脓毒症所致ALI/ARDS患者外周血中的表达

为探讨硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)/NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NODlike receptor family pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)炎症小体通路在急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)发病机制中的作用,收集2017年1月—2018年12月因脓毒症导致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)/ARDS重症住院的患者及同期健康体检者各40例为研究对象,其中病例组按照采血时间分为治疗D0、D3、D7组。采用qRT-PCR测定研究对象PBMC中NLRP3和TXNIP mRNA表达水平,同时采用Western blotting测定PBMC中NLRP3和TXNIP的蛋白表达水平。结果显示,病例治疗D0组、D3组、D7组的TXNIP、NLRP3 mRNA和TXNIP、NLRP3蛋白表达水平均显著高于对照组(均P<0.05);病例治疗D7组TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平较治疗D0组显著降低(均P<0.05);治疗D3组的TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平较治疗D0组显著降低(均P<0.05);病例组TXNIP、NLRP3 mRNA水平均与序贯器官衰竭估计评分(sequential organ failure assessment,SOFA)呈正相关(r≥0.782)。由此,TXNIP/NLRP3炎症小体通路可能参与脓毒症所致ALI/ARDS的发生、发展。

槲皮素诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

目的探究槲皮素(Quer)诱导乳腺癌细胞凋亡的机制。方法将人乳腺癌细胞MCF-7分为4组,分别为对照组、实验组、阴性对照(NC)组和miR-373-3pmimics组。对照组细胞在正常条件下培养;实验组用80μmol·L^(-1)槲皮素处理;NC组用80μmol·L^(-1)槲皮素处理后,转染50nmol·L^(-1)miR-373-3p的阴性对照;miR-373-3pmimics组用80μmol·L^(-1)槲皮素处理,转染50nmol·L^(-1)miR-373-3p。用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中微小核糖核酸-373-3p(miR-373-3p)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达情况,用原位末端标记法(Tunel)实验检测各处理组细胞的凋亡率。结果对照组、实验组、NC组、miR-373-3pmimics组的miR-373-3p相对表达水平分别为1.00±0.15、0.61±0.08、0.67±0.05和1.19±0.16,TXNIPmRNA相对表达水平分别为1.00±0.12、1.83±0.21、1.71±0.19和1.26±0.14,NLRP3mRNA相对表达水平分别为1.00±0.11、0.73±0.06、0.65±0.08和1.27±0.15,Bcl-2mRNA相对表达水平分别为1.00±0.15、0.43±0.06、0.37±0.04和0.83±0.11,BaxmRNA相对表达水平分别为1.00±0.12、2.13±0.25、1.96±0.21和1.38±0.17,凋亡率分别为(100.00±13.55)%、(217.24±25.13)%、(196.37±21.53)%和(134.71±16.42)%。实验组的上述指标与对照组比较,miR-373-3pmimics组的上述指标与NC比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论槲皮素通过调控miR-373-3p/TXNIP/NLRP3通路诱导乳腺癌细胞凋亡。

牛舌草总黄酮通过ROS/TXNIP/NLRP3抑制炎症小体活化抗心肌缺血再灌注损伤

目的从炎症小体活化和活性氧/硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体蛋白3(ROS/TXNIP/NLRP3)通路考察牛舌草总黄酮(total flavonoids of Anchusa italica Retz.,TF)抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法小鼠采用冠状动脉左前降支结扎模型模拟心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤。将模型制备成功的30只小鼠随机分为模型组(I/R)、TF 30 mg·kg^(-1)处理组(I/R+TF30)和100 mg·kg^(-1)处理组(I/R+TF100),再灌同时给予生理盐水、TF。于再灌注24 h时,检测小鼠心功能,测定心肌梗死范围和血清心肌酶谱,心肌冰冻切片染色观察活性氧(ROS)水平,Western blotting分析NLRP3炎症小体活化以及TXNIP与NLRP3相互作用的变化。结果TF在剂量为30和100 mg·kg^(-1)时均可改善心功能,减少心肌梗死范围,降低血清心肌酶水平。另外,TF处理减少心肌炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)α含量,降低心肌ROS水平。TF在30和100 mg·kg^(-1)均显著降低TXNIP、NLRP3、cleaved caspase-1和cleaved IL-1β,并抑制TXNIP/NLRP3相互作用。结论牛舌草总黄酮通过抑制ROS/TXNIP/NLRP3通路,从而减轻NLRP3炎症小体活化,发挥抗心肌缺血再灌注损伤作用。