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MIF活性区域相互作用蛋白的筛选
被引量:
1
1
作者
肖定璋
陈少贤
+3 位作者
陈景
罗琼
黄曙方
丁红
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期1861-1867,共7页
目的:筛选与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)催化巯基蛋白质氧化还原酶(TPOR)活性域相互结合的蛋白。方法:采用酵母双杂交系统进行筛选。首先构建pBTM116-MIF诱饵质粒,转化酵母菌株L40;将表达MIF催化TPOR活性域的L40酵母菌株制备成感受态菌,...
目的:筛选与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)催化巯基蛋白质氧化还原酶(TPOR)活性域相互结合的蛋白。方法:采用酵母双杂交系统进行筛选。首先构建pBTM116-MIF诱饵质粒,转化酵母菌株L40;将表达MIF催化TPOR活性域的L40酵母菌株制备成感受态菌,在人骨肉瘤cDNA文库中筛选。通过组氨酸(HIS3报告基因活性和β半乳糖苷酶实验,初步确定与催化TPOR活性域片段相互作用的蛋白,最终通过免疫共沉淀和免疫荧光技术来确认。结果:分别构建含野生型MIF的pBTM116-MIF和野生型硫氧还蛋白样蛋白2(TXNL2)的pACT2-TXNL2质粒,将其共转染L40酵母菌。HIS3报告基因活性检测和β半乳糖苷酶阳性实验结果提示TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白。将重组质粒pcDNA3.1-Myc-TXNL2转染MCF7细胞,免疫共沉淀实验结果表明MIF抗体能够共沉淀Myc-TXNL2蛋白;免疫荧光结果显示Myc-TXNL2与MIF在细胞质中位置分布相同。结论:TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白。本研究为MIF氧化还原机制的研究提供了新的实验依据。
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关键词
巨噬细胞移动抑制因子
巯基
蛋白
质
氧
化还原酶
酵母双杂交系统
蛋白
质相互作用
硫氧还蛋白样蛋白2
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职称材料
题名
MIF活性区域相互作用蛋白的筛选
被引量:
1
1
作者
肖定璋
陈少贤
陈景
罗琼
黄曙方
丁红
机构
广东省人民医院
广东省人民医院广东省医学科学院血液科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期1861-1867,共7页
基金
广东省建设中医药强省科研基金资助项目(No.2010238)
广东省医学科学基金资助项目(No.A2011027)
文摘
目的:筛选与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)催化巯基蛋白质氧化还原酶(TPOR)活性域相互结合的蛋白。方法:采用酵母双杂交系统进行筛选。首先构建pBTM116-MIF诱饵质粒,转化酵母菌株L40;将表达MIF催化TPOR活性域的L40酵母菌株制备成感受态菌,在人骨肉瘤cDNA文库中筛选。通过组氨酸(HIS3报告基因活性和β半乳糖苷酶实验,初步确定与催化TPOR活性域片段相互作用的蛋白,最终通过免疫共沉淀和免疫荧光技术来确认。结果:分别构建含野生型MIF的pBTM116-MIF和野生型硫氧还蛋白样蛋白2(TXNL2)的pACT2-TXNL2质粒,将其共转染L40酵母菌。HIS3报告基因活性检测和β半乳糖苷酶阳性实验结果提示TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白。将重组质粒pcDNA3.1-Myc-TXNL2转染MCF7细胞,免疫共沉淀实验结果表明MIF抗体能够共沉淀Myc-TXNL2蛋白;免疫荧光结果显示Myc-TXNL2与MIF在细胞质中位置分布相同。结论:TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白。本研究为MIF氧化还原机制的研究提供了新的实验依据。
关键词
巨噬细胞移动抑制因子
巯基
蛋白
质
氧
化还原酶
酵母双杂交系统
蛋白
质相互作用
硫氧还蛋白样蛋白2
Keywords
Macrophage migration - inhibitory factor
Thiol - protein oxidoreductase
Yeast two - hybrid system
Protein interaction
Thioredoxin -like
2
protein
分类号
R363.21 [医药卫生—病理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
MIF活性区域相互作用蛋白的筛选
肖定璋
陈少贤
陈景
罗琼
黄曙方
丁红
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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