硫氧还蛋白结构域包含蛋白9在胆囊癌组织的表达及其对胆囊癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨硫氧还蛋白结构域包含蛋白9(TXNDC9)在胆囊癌组织中的表达水平及其对胆囊癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:收集2017年1月至2022年12月浙江大学医学院附属第四医院手术切除的48例胆囊癌患者肿瘤组织和癌旁组织标本。通过免疫组织化学染色法检测TXNDC9蛋白表达,分析其与患者临床病理特征的相关性。采用RNA干扰技术沉默胆囊癌GBC-SD细胞中TXNDC9基因表达,细胞计数法(CCK-8)和Transwell实验检测细胞的增殖和侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达水平。组间比较采用χ^(2)检验和独立样本t检验。结果:胆囊癌组织中TXNDC9蛋白的阳性表达率明显高于癌旁组织[70.8%(34/48)比31.3%(15/48),χ^(2)=15.048,P<0.05],且TXNDC9表达与肿瘤分期(χ^(2)=9.708,P<0.05)和淋巴结转移(χ^(2)=7.987,P<0.05)显著相关。CCK-8实验结果表明,TXNDC9敲减组细胞的增殖能力显著低于对照组(吸光度值:0.453±0.054比0.822±0.085,t=8.991,P<0.05)。Transwell实验结果表明,TXNDC9敲减组细胞的侵袭能力显著低于对照组[穿膜细胞数:(71.800±8.526)个比(183.200±16.724)个,t=13.269,P<0.05]。Western blot实验结果表明,TXNDC9敲减组p-PI3K、p-Akt、N-cadherin、vimentin的相对表达量(0.224±0.056、0.238±0.046、0.273±0.037、0.386±0.045)均显著低于对照组(0.812±0.077、0.837±0.092、0.748±0.069、0.807±0.085),差异有统计学意义(t=10.684、10.138、10.471、7.567,P<0.05);TXNDC9敲减组E-cadherin的相对表达量显著高于对照组(0.898±0.095比0.294±0.039,t=10.209,P<0.05)。结论:TXNDC9在胆囊癌中表达升高,与肿瘤进展密切相关,并可通过PI3K/Akt信号通路调控胆囊癌细胞的增殖和侵袭能力。

富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路及视网膜血管通透性的影响

目的 探究富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管通透性及硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路的影响。方法 2020年6—9月,SD大鼠采用随机数字表法选取15只为空白组,其余大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)和高脂饲料喂养构建DR模型,造模成功的大鼠采用随机数字表法分为模型组、富氢水低、高剂量组(5、10 mL/kg),每组15只。连续给药28 d后,记录大鼠体质量,检测空腹血糖(FBG)水平;眼底照相和荧光素血管造影(FFA)观察大鼠右眼新生血管和荧光素渗漏现象;光学相干断层扫描(OCT)检测视网膜厚度;伊文思蓝-白蛋白复合物渗漏分析视网膜血管通透性;HE染色观察视网膜病理变化;免疫荧光染色观察新生血管形成情况;TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡;酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测量视网膜匀浆中血管生成素-1(Ang-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;WB法检测视网膜TXNIP/NLRP3通路和凋亡相关蛋白的表达。结果 与空白组相比,模型组大鼠FBG[(26.49±2.18)mmol/L比(5.76±1.09)mmol/L]、血-视网膜屏障(BRB)通透性[(32.51±2.05)μg/g比(11.24±1.76)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(23.31±2.14)%比(0.07±0.01)%]、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、TXNIP[(0.85±0.09)比(0.40±0.05)]、NLRP3[(0.93±0.10)比(0.48±0.07)]、IL-1β[(0.74±0.05)比(0.41±0.04)]、胱天蛋白酶-1(caspase-1)[(0.78±0.07)比(0.24±0.04)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(148.31±12.76)μm比(223.57±17.23)μm]显著降低(P<0.05),视网膜有较多新生血管和血管曲折,血管渗漏严重,视网膜细胞明显水肿,有大量炎性渗出,神经节细胞层(GCL)细胞数量减少;与模型组相比,富氢水低、高剂量组大鼠FBG[(20.85±3.45)mmol/L、(14.27±2.42)mmol/L比(26.49±2.18)mmol/L]、BRB通透性[(24.67±1.85)μg/g、(17.48±1.63)μg/g比(32.51±2.05)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(14.65±1.36)%、(9.85±1.22)%比(23.31±2.14)%]、Bax、Bcl-2、TXNIP[(0.64±0.09)、(0.52±0.08)比(0.85±0.09)]、NLRP3[(0.72±0.09)、(0.61±0.08)比(0.93±0.10)]、IL-1β[(0.62±0.06)、(0.53±0.05)比(0.74±0.05)]、caspase-1[(0.57±0.06)、(0.41±0.05)比(0.78±0.07)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(173.62±14.46)μm、(196.54±15.75)μm比(148.31±12.76)μm]明显增加(P<0.05),视网膜水肿情况减轻,GCL细胞数量明显增加,损伤得到改善。结论 富氢水可抑制新生血管形成,降低DR大鼠视网膜血管通透性,减轻视网膜神经元损伤;其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3通路的激活有关。

外源性硫氧还蛋白对高糖、高脂刺激引起的H9c2细胞损伤和凋亡的影响

目的 观察给予外源性硫氧还蛋白（Trx）后对高糖、高脂刺激引起的心肌细胞损伤和凋亡的影响,并分析其可能机制.方法 将处于对数生长期的H9c2心肌细胞随机分为三组：正常对照组（普通DMEM培养基葡萄糖5 mmol/L加入20 mmol/L甘露醇）、高糖高脂组（DMEM高糖25 mmol/L培养基加入高脂600 μmol/L软脂酸）和Trx干预组（在高糖高脂组的培养基中加入3 ＊9滋mol/L Trx）.培养48 h后,分别收集培养基上清与细胞,进行指标检测.结果 与正常对照组比较,高糖高脂组乳酸脱氢酶及caspase-3活性均显著升高（P＜0.01）.给予Trx干预后,与高糖高脂组比较,Trx干预组乳酸脱氢酶及caspase-3活性均显著下降（P＜0.01）.与正常组比较,高糖高脂组Trx的表达量未见明显改变（P＞0.05）,但是Trx活性显著下降（P＜0.01）.结论 高糖、高脂刺激可以引起H9c2心肌细胞损伤和凋亡,其机制与内源性Trx活性的降低有关.外源性补充Trx可明显提高Trx的活性,减轻心肌细胞的损伤和凋亡.

链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠坐骨神经硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的表达

目的初步探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路在链尿佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠坐骨神经中的作用。方法采用单次STZ腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠模型,取年龄、体重匹配的雄性大鼠作为正常对照组,监测血糖、体重变化,成模后12周应用电子Von Frey仪测定机械痛阈值,处死取坐骨神经进行坚牢蓝染色,采用免疫组织化学及Western blot法检测TXNIP、NLRP3、半胱天冬酶-1和白细胞介素(IL)-1β的表达,ELISA法测定血清中IL-1β、IL-18水平。结果糖尿病大鼠模型坐骨神经中TXNIP蛋白表达为3.78±0.08,较正常对照组0.99±0.06显著增加(t=26.980,P<0.0001);与正常对照组(0.97±0.05)相比,糖尿病组NLRP3蛋白表达(2.44±0.16)明显升高(t=8.885,P<0.0001);糖尿病组活化的半胱天冬酶-1蛋白表达为4.45±0.19,正常对照组为1.08±0.06,两组差异有统计学意义(t=16.900,P<0.0001)。糖尿病组IL-1β蛋白表达为4.50±0.16,较正常对照组1.19±0.08显著增加(t=18.630,P<0.0001);与正常对照组比较,糖尿病大鼠血清中IL-1β[(110.50±8.80)pg/ml比(17.97±3.18)pg/ml,t=9.892,P<0.0001]、IL-18[(591.70±8.78)pg/ml比(160.70±8.33)pg/ml,t=35.620,P<0.0001]均分泌增多。结论糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制可能与TXNIP表达增加、NLRP3炎症小体激活以及下游炎症反应有关,该通路可成为DPN治疗的新靶标。

肾小球系膜细胞中硫氧还蛋白1过表达对基质金属蛋白酶9表达的影响

为进一步探讨硫氧还蛋白1(thioredoxin1,Trx1)过表达对高糖环境下肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase9,MMP9)表达的影响.采用RT-PCR和明胶酶谱法检测细胞中MMP-9 mRNA和酶活性的变化,用脂质体介导瞬时转染法转染正义Trx1及反义Trx1,观察高糖环境Trx1过表达对MMP9表达的影响.结果表明,HBZY-1高糖组与正常糖组比较,MMP9 mRNA在12h,24h,48h时表达增加(P<0.05),同时酶活性于12h、24h、48h也明显增高(P<0.01).转染正义Trx1组细胞,MMP-9 mRNA水平及MMP9酶活性,在高糖组与正常糖组差异无统计学意义(P>0.05);但转染反义Trx1组和未转染组细胞的MMP9 mRNA水平及酶活性,高糖组均比正常糖组表达增加,差异有统计学意义(P<0.01).提示Trx1过表达可抑制高糖环境诱导的肾小球系膜细胞MMP9高表达.

肝细胞肝癌组织中硫氧还蛋白9表达水平与经肝动脉化疗栓塞术治疗疗效的关系

目的探究硫氧还蛋白9(TXNDC9)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达及其与TACE治疗疗效的关系。方法选择2013年1月至2016年1月诊断为HCC的97例患者作为研究对象。用改良实体瘤疗效评价标准(mRECIST)评价TACE疗效。用免疫印迹法检测HCC组织中TXNDC9水平,并分析其与HCC患者TACE治疗疗效的关系。结果完全缓解(CR)组(17例)、部分缓解(PR)组(30例)、疾病稳定(SD)组(21例)和疾病进展(PD)组(29例)HCC组织中TXNDC9水平分别为(0.66±0.09)、(0.75±0.09)、(0.94±0.12)和(1.08±0.11),差异有统计学意义(P<0.05)。HCC组织中TXNDC9水平与TACE治疗疗效呈负相关(P<0.05)。TXNDC9诊断HCC预后的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)、灵敏度和特异度分别为0.930、73.91%和96.08%。多因素Cox回归分析结果显示肿瘤直径、Child-Pugh分级和TXNDC9是HCC患者预后的独立影像因素(P<0.05)。结论HCC组织中TXNDC9水平高提示TACE治疗疗效较差,预后不良风险较高。

硫氧还蛋白(Trx)对糖尿病视网膜病变模型鼠血清补体Clq肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)表达的影响

目的探讨硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)模型鼠血清补体Clq肿瘤坏死因子相关蛋白9(complement Clq tumor necrosis factor-related protein 9,CTRP9)表达的影响。方法 24只SPF级雄性SD大鼠分为正常对照组(NC组)12只和高脂饮食组12只,NC组以标准大鼠饲料喂养,高脂饮食组以高脂高糖饲料喂养后以一次性腹腔注射链脲佐菌素(60 mg·kg^(-1))制造DR模型,造模成功的高脂饮食组大鼠随机分为DR组(6只)和治疗组(6只)。治疗组大鼠每天腹腔注射Trx(50 mg·kg^(-1))持续1周,NC组和DR组大鼠每天给予腹腔注射同等体积的PBS。酶联免疫吸附实验检测血清CTRP9水平,免疫组织化学检测CTRP9蛋白表达水平,同时进行视网膜细胞凋亡指数与活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光强度分析。结果所有高脂饮食组大鼠都造模成功,高脂饮食组大鼠血清中CTRP9含量和免疫组织化学检测CTRP9表达量均低于NC组,治疗组高于DR组(均为P<0.05)。高脂饮食组大鼠的视网膜荧光强度(67.29±1.94)显著高于NC组(5.39±1.29),治疗组(34.20±5.11)低于DR组(78.11±6.33),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot结果显示,高脂饮食组大鼠的CTRP9相对表达量低于NC组,治疗组高于DR组;高脂饮食组大鼠的PI3K相对表达量高于NC组,治疗组低于DR组(均为P<0.05)。结论 Trx可保护DR大鼠的视网膜细胞免受ROS的损伤,抑制细胞凋亡,促进CTRP9的表达,其机制可能与CTRP9改善PI3K信号通路有关。

硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域包含蛋白3信号通路与糖尿病及其慢性并发症的研究进展

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病,长期的慢性高血糖会激发机体的氧化应激、慢性炎症以及细胞程序性死亡等病理过程,进而导致不同器官的进行性病变、功能减退及衰竭。硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在高血糖及氧化应激条件下会结合核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域包含蛋白3(NLRP3)继而激活NLRP3炎症小体引起一系列炎症反应参与糖尿病及其慢性并发症的发生与发展。该文将就TXNIP/NLRP3信号通路与糖尿病及其慢性并发症的研究进展作一综述。

五味子乙素预处理对过氧化氢诱导的H9c2细胞焦亡及TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的基于硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路观察五味子乙素对过氧化氢(H 2O 2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤及焦亡的影响,探讨五味子乙素的心肌保护作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,实验设4组:正常组细胞常规孵育,五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h,H 2O 2组细胞加入1000μmol/L的H 2O 2孵育30 min,H 2O 2+五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h后再加入H 2O 2孵育30 min。CCK-8法检测细胞活力,DCFH-DA探针检测细胞中活性氧(ROS)含量,试剂盒检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测细胞中TXNIP、硫氧还蛋白(Trx)、NLRP3、裂解的半胱氨酸蛋白酶-1(Cleaved Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)-N蛋白表达情况,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果与正常组比较,H 2O 2组细胞活力明显下降(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显升高(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H 2O 2组比较,H 2O 2+五味子乙素组的细胞活力明显升高(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显降低(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论五味子乙素可能通过影响TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路,从而减轻H 2O 2诱导的H9c2细胞氧化损伤,抑制心肌细胞焦亡。

ERp29——一种新的内质网蛋白

蛋白二硫键异构酶是内质网非常重要的氧化还原酶和分子伴侣，硫氧还结构域的两个活性半胱氨酸是蛋白功能的物质基础。ERp29是近十年来发现的特殊内质网蛋白，硫氧还结构域与蛋白二硫键异构酶相似但缺失活性半胱氨酸。它在动物细胞广泛存在，不具备已知分子伴侣的特征（N端糖基化、与ATP结合、与Ca^2＋结合）。虽然人们对其进行深入研究，包括空间结构、组织分布、病理模型的表达变化，但是ERp29的生物学功能还不清楚，暂时将之归类为蛋白分泌因子和外运蛋白。

硫氧还蛋白1/硫氧还蛋白相互作用蛋白对腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的调控及机制研究

目的探究硫氧还蛋白1(Trx1)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(Txnip)对腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的调控作用及可能机制。方法前瞻性采用随机数字表法将人腹膜间皮细胞(HMrSV5)分为三组,一组采用10%胎牛血清(FBS)培养液(空白组)、一组采用转染小干扰RNA(siRNA)阴性对照的4.25%腹膜透析液(PDS)与10%FBS培养液(si-NC组),一组采用转染靶向沉默Txnip siRNA的4.25%PDS与10%FBS培养液(si-Txnip组)。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹法(WB)测定各组Trx1、Txnip、NLRP3 mRNA与蛋白表达水平;采用MTT法测定各组培养不同时间点细胞增殖情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清液白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平和半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)活性。结果si-NC组、si-Txnip组培养1、2、3 d HMrSV5增殖活性均低于空白组(P<0.05);并且si-Txnip组培养1、2、3 d HMrSV5增殖活性均高于si-NC组(0.402±0.009比0.372±0.010、0.554±0.016比0.482±0.008、0.700±0.013比0.590±0.010),差异有统计学意义(P<0.05)。si-NC组、si-Txnip组Txnip、NLRP3 mRNA表达均高于空白组(P<0.05);并且si-Txnip组Txnip、NLRP3 mRNA表达低于si-NC组(1.43±0.32比2.80±0.43、2.38±0.35比3.42±0.40),si-Txnip组Trx1 mRNA表达低于空白组、高于si-NC组(2.24±0.35比3.50±0.38、1.18±0.23),差异有统计学意义(P<0.05)。si-NC组、si-Txnip组Txnip、NLRP3蛋白表达均高于空白组(P<0.05);si-Txnip组Txnip、NLRP3蛋白表达低于si-NC组(0.453±0.108比0.754±0.116),si-Txnip组Trx1蛋白表达低于空白组、高于si-NC组(0.514±0.112比0.753±0.125、0.297±0.010),差异有统计学意义(P<0.05)。si-NC组、si-Txnip组上清液IL-1β、IL-6水平均高于空白组[(0.45±0.07)、(0.35±0.06)μg/L比(0.23±0.05)μg/L,(3.00±0.38)、(2.32±0.30)μg/L比(1.95±0.34)μg/L],si-Txnip组上清液IL-1β、IL-6水平低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-Txnip组上清液caspase-1活性小于si-NC组、大于空白组[(0.87±0.26)U比(1.65±0.40)、(0.62±0.20)U],差异有统计学意义(P<0.05)。结论Trx1/Txnip系统中下调Txnip能明显抑制腹膜间皮细胞NLRP3炎症小体及功能。

血清硫氧还蛋白相互作用蛋白、Ⅲ型纤维蛋白结构域结合蛋白5与糖尿病性心肌病的相关性及诊断价值分析

目的:分析血清硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、Ⅲ型纤维蛋白结构域结合蛋白5(FNDC5)与糖尿病性心肌病的相关性及诊断价值。方法:选择我院自2019年10月至2022年10月接诊的128例糖尿病患者作为研究对象,其中糖尿病性心肌病53例,作为观察组;左心室二维结构正常75例,作为对照组。检测两组血清TXNIP、FNDC5表达水平,分析糖尿病性心肌病患者血清TXNIP、FNDC5表达水平与左心功能指标的关系,使用多因素Logistic回归分析及ROC曲线分析血清TXNIP、FNDC5对糖尿病性心肌病的诊断价值。结果:观察组血清TXNIP表达水平高于对照组,FNDC5表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析,糖尿病性心肌病患者二尖瓣早期血流速度峰值(E)、左侧壁二尖瓣环早期峰值速度均值(e’)、左心室射血分数(LVEF)均与TXNIP呈负相关,与FNDC5呈正相关(P<0.05);经多因素Logistic回归分析,血清TXNIP、FNDC5均是糖尿病性心肌病的独立预测因素(P<0.05);经ROC曲线分析,血清TXNIP联合FNDC5诊断糖尿病性心肌病的AUC为0.926,明显大于单一指标TXNIP的0.671和FNDC5的0.685,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:血清TXNIP、FNDC5与糖尿病性心肌病发病及患者左心功能损害程度密切相关,两者联合诊断此病的效能较好,值得临床进一步研究应用。

PM_(2.5)暴露对氧糖剥夺后复氧复糖大鼠神经小胶质细胞的损伤作用及其机制

目的观察细颗粒物(PM_(2.5))暴露对氧糖剥夺后再复氧复糖(OGD/R)大鼠神经小胶质细胞系GMI-R1的损伤作用,并基于硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NLR家族Pyrin结构域3(NLRP3)通路探讨相关机制。方法培养GMI-R1细胞并分为对照组、模型组、实验组、TXNIP抑制剂组。模型组、实验组、TXNIP抑制剂组制作OGD/R模型,对照组常规培养。实验组和TXNIP抑制剂组在造模前先进行50μg/m L PM_(2.5)暴露24 h,TXNIP抑制剂组PM_(2.5)暴露前给予10μmol/L的TXNIP抑制剂鲁斯可皂苷元预处理30 min。复氧24 h后采用流式细胞术检测死亡细胞,采用ELISA法检测各组培养基上清中的白细胞介素(IL)-18和IL-1β,采用Western blotting法检测各组细胞中的TXNIP、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD),采用免疫荧光法检测GSDMD-N。结果对照组、模型组、实验组细胞死亡率及培养液上清中IL-18、IL-1β水平依次升高,TXNIP抑制剂组细胞死亡率及培养液上清中IL-18、IL-1β水平低于实验组(P均<0.01)。对照组、模型组、实验组细胞中TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及焦亡相关蛋白GSDMD、GSDMD-N表达依次增高,TXNIP抑制剂组NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N蛋白表达低于实验组(P均<0.05)。结论PM_(2.5)暴露能加重OGD/R下GMI-R1细胞的损伤,加重炎症反应,机制可能与促进TXNIP/NLRP3通路活化和细胞焦亡有关。

LncRNA ANRIL对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞焦亡及NLRP3炎性体通路的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)的INK4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)对缺氧/复氧(A/R)诱导的H9c2心肌细胞焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体通路的影响。方法qRT-PCR检测LncRNA ANRIL在A/R诱导的H9c2细胞中的表达;通过慢病毒转染构建抑制LncRNA ANRIL的H9c2心肌细胞系,分组为:空白组、si-NC组、si-ANRIL组,转染24 h后,利用荧光显微镜观察荧光变化;qRT-PCR检测LncRNA ANRIL表达以验证转染结果;将慢病毒转染成功的H9c2心肌细胞进行缺氧24 h复氧6 h处理,并分组为,正常对照组(Ctrl组,细胞正常培养,未经任何处理)、A/R组、si-NC+A/R组、si-ANRIL+A/R组,免疫荧光法检测各组细胞中caspase-1蛋白表达;ELISA法检测各组细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量;Western blot检测各组细胞中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达。结果 LncRNA ANRIL在A/R诱导的H9c2细胞中的表达水平显著高于正常细胞;荧光显微镜可观察到转染慢病毒的H9c2细胞呈现出绿色荧光,且si-ANRIL组H9c2细胞中ANRIL表达水平显著低于空白组和si-NC组(P<0.05),成功构建抑制ANRIL的H9c2心肌细胞系;与Ctrl组比较,A/R组H9c2细胞中IL-1β和IL-18含量、caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与A/R组和si-NC+A/R组比较,siANRIL+A/R组H9c2细胞中IL-1β和IL-18含量、caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论沉默LncRNA ANRIL可能通过抑制NLRP3炎性体通路来改善A/R诱导的H9C2心肌细胞焦亡。

七氟醚后处理对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞焦亡及TXNIP/NLRP3通路的影响

目的:基于硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路探究七氟醚后处理(SPostC)对缺氧复氧(HR)诱导的H9C2心肌细胞焦亡的影响。方法:体外培养H9C2心肌细胞,将细胞分为4组:正常对照组(NC组)、HR组、HR+SPostC组、HR+SPostC+TXNIP/NLRP3通路抑制剂白藜芦醇组(HR+SPostC+RES组)。采用CCK-8检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量;采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞膜孔的形成;采用Western blot法检测细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18及TXNIP/NLRP3通路相关蛋白TXNIP、NLRP3的表达;采用实时荧光定量PCR法检测TXNIP/NLRP3通路相关基因TXNIP、NLRP3的表达。结果:与NC组相比,其余3组细胞活力显著降低,而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显升高(P<0.05);与HR组相比,HR+SPostC组和HR+SPostC+RES组细胞活力显著升高(P<0.05),而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显降低(P<0.05);与HR+SPostC组相比,HR+SPostC+RES组细胞活力显著升高(P<0.05),而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显降低(P<0.05)。结论:SPostC可能通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路进而抑制HR诱导的H9C2心肌细胞焦亡。

血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平预测急性肺栓塞严重程度及预后的价值

目的探讨血浆信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE-1)、A解聚素和金属蛋白酶及血小板反应蛋白基序-9(ADAMTS-9)及血管生成素-2(ANG-2)水平预测急性肺栓塞(APE)严重程度及预后的价值。方法选取收治的APE患者121例,依据CT肺动脉栓塞指数(PAOI)分为轻度组34例(PAOI<30%)、中度组45例(30%≤PAOI≤50%)和重度组42例(PAOI>50%),根据APE患者预后情况分为预后良好组86例和预后不良组35例。采用酶联免疫吸附法测定血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平。应用多元logistic回归分析影响APE预后不良的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平对APE预后不良的预测价值。采用Pearson相关分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与心功能指标的相关性。结果预后不良组血浆SCUBE-1[(24.63±11.70)ng/mL vs.(10.17±5.12)ng/mL]、ADAMTS-9[(47.50±13.25)ng/mL vs.(24.28±7.63)ng/mL]及ANG-2[(15.38±6.27)ng/mL vs.(4.15±1.52)ng/mL]水平均明显高于预后良好组(P<0.001)。APE患者病情越重,血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平越高,重度组>中度组>轻度组(P<0.001)。多元logistic回归分析显示,PAOI、CRP、cTnI、BNP、D-二聚体、SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高是影响APE预后不良的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2三项联合预测APE预后不良的曲线下面积最大(0.931,95%CI:0.868~0.996),其准确度为88.4%。相关分析显示,APE患者血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与CRP、cTnI、BNP、D-二聚体及PAOI均呈正相关(P<0.05)。结论血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高与APE严重程度和预后不良有关,是APE预后不良的危险因素,三项联合对APE预后不良有较好的预测价值。

血清白脂素、CTRP9、TXNIP与2型糖尿病视网膜病变的相关性分析

目的探讨血清白脂素、Clq/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)与2型糖尿病视网膜病变的相关性分析。方法选取2020年7月至2022年8月诊治的150例2型糖尿病视网膜病变作为研究对象,并设立为观察组,同期选取150例单纯2型糖尿病患者设立为对照组,并根据严重程度将观察组分为增生性糖尿病视网膜病变(PDR)组(n=62)和非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)组(n=88),对比血清白脂素、CTRP9、TXNIP水平。结果观察组的白脂素、CTRP9均低于对照组,而TXNIP高于对照组(t=7.431、5.963、10.425,P<0.05)。PDR组的白脂素、CTRP9低于NPDR组,而TXNIP高于NPDR组(t=4.564、8.808、5.549,P<0.05)。Kendall's tau-b相关性分析显示,血清白脂素、CTRP9与视网膜病变严重程度呈正相关,TXNIP与视网膜病变严重程度呈负相关(r=0.289、0.510、0.344,P<0.05)。ROC曲线分析显示,白脂素、CTRP9、TXNIP预测2型糖尿病患者并发视网膜病变的AUC值分别为(0.707、0.711、0.782,P<0.05);敏感度分别为94.00%、62.00%、58.00%;特异度分别为49.30%、871.30%、92.00%。结论血清白脂素、CTRP9、TXNIP在2型糖尿病视网膜病变患者呈异常表达趋势,检测其水平变化对及时发现2型糖尿病患者并发视网膜病变具有重要意义。

2-十一烷酮通过调控重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白信号改善小鼠哮喘的研究

目的研究2-十一烷酮对实验性哮喘小鼠重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白(Nrf2/TXNIP/TrX)信号的影响。方法将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、对照组、实验组和联合组,每组6只。正常组未行造模,其余4组给予抗原混合液200μL致敏+1%OVA激发建模。在此基础上,对照组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮;实验组给予30 mg·kg^(-1)ML385;联合组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮+30 mg·kg^(-1)ML385;正常组和模型组均给予等量0.9%NaCl。用苏木精-伊红染色法观察肺组织炎性细胞的浸润情况,用酶联免疫吸附试验法检测血清免疫球蛋白E(IgE)和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)水平,用蛋白质印迹法检测Nrf2、TXNIP、TrX和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的表达水平。结果实验组、对照组、联合组、模型组和正常组的炎症评分分别为(4.33±0.65)、(1.00±0.41)、(3.00±1.21)、(3.33±0.32)和(0.67±0.31)分,血清IgE分别为(24.17±4.59)、(87.51±9.91)、(49.43±8.49)、(129.38±13.75)和(78.00±11.35)ng·mL^(-1),BALF中IL-1β分别为(44.17±7.11)、(154.45±17.75)、(87.04±15.72)、(216.29±19.64)和(134.87±23.83)pg·mL^(-1),Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.46±0.02、0.71±0.03、0.30±0.02和0.48±0.02,TXNIP蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.16±0.57、1.55±0.21、5.25±0.18和3.59±0.24,TrX蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.38±0.02、0.79±0.01、0.24±0.03和0.42±0.02,NLRP3蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.33±0.42、2.26±0.31、5.21±0.44和3.67±0.29。实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论2-十一烷酮对OVA诱导的小鼠哮喘具有明显的治疗作用,其机制可能与调节Nrf2/TXNIP/TrX信号,抑制NLRP3炎症小体活化有关。

高糖环境下Trx1过表达对HBZY-1细胞中MMP9表达的影响

硫氧还蛋白1(thioredoxin1,Trx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要的作用.为了探讨高糖环境下Trx1过表达对肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells)HBZY-1中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)表达水平的影响,本实验采用脂质体介导的瞬时转染实现Trx1蛋白过表达;采用RT-PCR和明胶酶谱法检测HBZY-1中MMP9 mRNA及酶活性的变化;通过流式细胞仪检测细胞内活性氧的含量.实验结果显示,高糖状态下,细胞中MMP9的mRNA和酶活性分别在12 h、24 h、48 h时表达增加(P<0.05);HBZY-1细胞中转染正义Trx1组,MMP9 mRNA水平及MMP9酶活性,高糖组与正常糖组无明显差异(P>0.05),转染反义Trx1组和未转染组中,高糖组均比正常糖组表达增加,差异有统计学意义(P<0.01);细胞中活性氧含量,高糖作用12 h、24 h、48 h均较正常糖组明显增多(P<0.01),高糖环境下转染正义Trx1质粒较转染反义Trx1质粒,细胞中活性氧含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).实验提示,高糖环境下,Trx1过表达对MMP9的抑制作用是通过减少细胞内活性氧含量来实现的.本实验为Trx1的抗氧化作用提供新的证据,也为继续探讨Trx1在糖尿病肾病的预防和治疗提供新的思路.

缺血再灌注对大鼠心肌H9c2细胞活性、凋亡的影响及其机制

目的观察缺血再灌注对大鼠H9c2心肌细胞活性、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 H9c2细胞分为A、B组,1×10~4/孔接种于96孔板,每组6个复孔。细胞贴壁生长24 h时B组吸弃原培养基,加入人工缺氧液100μL,置于含94%N_2、1%O_2、5%CO_2的三气培养箱中培养90 min;吸弃缺氧液,加入DMEM高糖培养基,置于正常培养箱中培养90 min备用。A组仅加入DMEM高糖培养基,置于正常培养箱中培养90 min备用。采用MTT法检测细胞活性,TUNEL法检测凋亡细胞,采用激光共聚焦显微镜观察并计算两组细胞活性氧簇（ROS）含量及线粒体膜电位（MMP）,采用Western blotting法检测心肌细胞热休克蛋白60（HSP60）、过氧化物氧化还原酶（Prx）、硫氧还原蛋白（Trx）、线粒体分裂蛋白（Fis1）。结果 A、B组心肌细胞活性分别为0.77±0.01、0.40±0.02,二者比较,P〈0.05。A、B组心肌细胞凋亡率分别为2.24%±0.12%、41.78%±1.43%,二者比较,P〈0.05。A组细胞ROS含量及MMP分别为0.58%±0.02%、1.12%±0.05%,B组分别为1.13%±0.05%、0.76%±0.01%,组间比较,P均〈0.05。与B组相比,A组心肌细胞HSP60、Fis1蛋白表达升高,Prx2、Trx1蛋白表达降低,P均〈0.05。结论缺血再灌注后H9c2细胞出现细胞活性下降、细胞凋亡,其机制可能与缺血再灌注促进细胞HSP60、Fis1蛋白表达,抑制Prx2、Trx1蛋白表达有关。