荜茇宁对急性胰腺炎大鼠干扰素-γ及硫氧还蛋白过氧化物酶-4基因的表达影响

目的:探讨荜茇宁对胰腺组织硫氧还蛋白过氧化物酶-4(peroxiredoxin-4,Prdx-4)及炎症介质干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)表达的影响机制.方法:30只SD大鼠按数字表法随机分成假手术(S)组,模型[重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)]组,荜茇宁(P)组,每组10只.采用逆行胰胆管注射5%的牛黄胆酸钠(0.1mL/100 g)建立SAP模型,SO组以生理盐水代替牛黄胆酸钠,P组于建模后立即将荜茇宁注入大鼠腹腔(5 mg/kg),12h后处死大鼠留取标本,大鼠胰腺组织干燥箱烤至恒重后检测干湿比、荧光定量PCR检测Prdx-4mRNA表达、HE染色观察病理学变化、紫外分光光度计检测血清淀粉酶(amylase,AMS)及ELISA法检测血清IFN-γ变化.结果:3组大鼠胰腺组织干湿比、血清AMS和IFN-γ浓度及胰腺组织Prdx-4 mRNA相对表达量比较,SO组和P组均比SAP组明显降低,但P组比SO组增高,差异均具有统计学意义(P<0.05);病理评分P组比SAP组(3.86分±1.24分vs 8.24分±1.67分,P<0.05)降低,但较SO组高(P<0.05).结论:荜茇宁可降低SAP大鼠血清AMS和IFN-γ水平及下调胰腺组织中Prdx-4 mRNA表达量,改善胰腺病理损伤,推测荜茇宁可能通过抗炎作用改善SAP病情.

甜菜M14品系硫氧还蛋白过氧化物酶(BvM14-Tpx)基因在原核及真核细胞中的抗氧化及抗盐能力分析

甜菜M14品系是在栽培甜菜染色体基础上附加了野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有抗逆、无融合生殖等优异特性。在前期工作中,通过RACE技术获得了甜菜M14品系硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase,Tpx)编码基因BvM14-Tpx的cDNA全长,此基因参与各种过氧化物的清除反应从而提高植物的抗逆性。构建了BvM14-Tpx基因的大肠杆菌表达体系,对转BvM14-Tpx基因的大肠杆菌BL21(DE3)菌体在H2O2胁迫下的生长曲线进行了测定,结果显示转基因菌株比对照菌株提前1h进入生长期,说明BvM14-Tpx基因能够缓解H2O2对大肠杆菌生长的抑制;同时构建了BvM14-Tpx基因的酿酒酵母表达体系,对H2O2及NaCl胁迫下的转基因酿酒酵母的研究表明,转基因酵母的生长好于对照,说明BvM14-Tpx基因可以提高转基因酵母的抗氧化及耐盐能力。

M16添加硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ无法克服昆明小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞

目的观察硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ(Peroxiredoxin Ⅱ,PrxII)是否可以克服昆明(Kunming)小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞。方法取昆明小鼠1-细胞胚置于含PrxII蛋白的M16培养液中培养,观察PrxII对昆明小鼠早胚发育潜能和2-细胞胚内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平的影响;同时比较昆明和B6C3F1小鼠1-细胞胚在M16中各自的发育情况;激光扫描共聚焦显微镜分别检测比较昆明与B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平以及昆明小鼠体外培养与体内发育2-细胞胚内ROS水平。结果M16培养液中添加PrxII蛋白(1nmol/L和100nMol/L)可以明显降低昆明小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平(P<0.05),但不能克服昆明小鼠体外发育2-细胞阻滞;昆明小鼠1-细胞胚在M16中培养存在2-细胞阻滞现象,而B6C3F1小鼠无2-细胞阻滞现象;昆明小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平显著低于体内发育2-细胞胚(P<0.05),亦略低于B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平(P>0.05)。结论M16培养液中添加PrxII可以明显降低2-细胞胚内ROS水平,但并不能克服2-细胞阻滞。与昆明小鼠体内发育2-细胞和B6C3F1体外发育2-细胞胚相比,体外培养昆明小鼠2-细胞胚内ROS水平并不升高,这些结果提示昆明小鼠体外培养出现2-细胞阻滞的原因并非是胚内ROS水平升高引起。

敲低过氧化物酶4通过β-连环蛋白通路抑制胃癌细胞侵袭的实验研究

目的探讨敲低过氧化物酶4(PRDX4)抑制胃癌细胞侵袭的作用及β-连环蛋白(β-catenin)通路机制。方法培养永分化胃上皮细胞系GES-1及胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901、AGS并检测PRDX4的表达水平;SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-PRDX4组、si-PRDX4+SKL2001组,western blot检测MMP2、N-cadherin、E-cadherin、β-catenin、TCF4的表达水平,Transwell检测细胞侵袭数目。结果与GES-1比较,胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901、AGS中PRDX4的表达上调(P<0.05)且SGC-7901细胞中PRDX4表达上调最显著;与对照组及si-NC组比较,si-PRDX4组SGC-7901细胞的侵袭数目减少,细胞中MMP2、N-cadherin、β-catenin、TCF4的表达下调,E-cadherin的表达上调(P<0.05);与si-PRDX4组比较,si-PRDX4+SKL2001组SGC-7901细胞的侵袭数目增加,细胞中MMP2、N-cadherin、β-catenin、TCF4的表达上调,E-cadherin的表达下调(P<0.05)。结论敲低PRDX4能够抑制胃癌细胞侵袭,抑制β-catenin通路是可能的分子机制。

细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增EgTPx基因,克隆到原核表达载体pET-41b中,转化大肠杆菌BL21,经过IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,通过谷胱甘肽Sepharose4B层析柱分离纯化获得重组蛋白并免疫小鼠,制备抗血清。Western blot鉴定抗血清的特异性,ELISA测定抗体的效价。结果用PCR方法扩增获得的EgTPx基因长度为582bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgTPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为54kDa,鼠抗EgTPx抗体能与融合蛋白和天然原头蚴抗原发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶256000。结论成功地制备了鼠抗EgTPx抗体,并能够特异识别原核表达的融合蛋白EgTPx和天然原头蚴抗原,为研制有效的包虫病疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。

细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的表达及抗原性分析

目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性。方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法和ELISA鉴定重组EgTPx蛋白的抗原性。结果构建的重组表达质粒pET30a-EgTPx阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确;含有pET30a-EgTPx重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为27 kDa,而且主要以包涵体形式存在;Western-blot和ELISA结果表明EgTPx重组抗原可以被棘球蚴感染羊阳性血清特异性识别。结论成功构建了pET30a-EgTPx表达质粒,EgTPx重组蛋白得到了高效表达,表达产物具有良好的抗原性。

柽柳硫氧还蛋白过氧化物酶(ThPrx1)基因转入酵母的抗逆能力分析

从柽柳(Tamarix hispida)中克隆到了一个硫氧还蛋白过氧化物酶(Peroxiredoxin,Prx)家族基因(ThPrx1)。为了研究ThPrx1的抗逆功能,将ThPrx1基因构建到酵母表达载体pYES2中,转化到酿酒酵母(Saccha-romyces cerevisiae)中,获得重组酵母,并用转空pYES2质粒的酵母作为对照。分别用NaCl、KCl、高温、低温、Cu-SO4、CdCl2、山梨醇、Na2CO3、甲基紫精胁迫条件处理转ThPrx1基因酵母(pYES2-ThPrx1)与对照(pYES2)酵母,来检测ThPrx1基因的抗逆能力。结果表明,ThPrx1基因具有抗NaCl、KCl、高温、低温、CuSO4、CdCl2、山梨醇、Na2CO3、甲基紫精胁迫的能力。研究结果提示该基因参与了柽柳的抗逆调控过程。

阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆及序列分析(英文)

目的 :获取阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆 ,研究其还原烷基氢过氧化物和氢过氧化物的抗氧化作用 ,以及调节由氢过氧化物介导的信号转换。 方法 :提取阴道毛滴虫的总RNA ,用λTripIEx2噬菌体载体构建cDNA表达文库 ,阳性质粒cDNA克隆进行测序 ,并用生物软件RPS Blast,NCBIBlast和ClustalW等对 6个读码框架进行序列分析。 结果 :获得一株开放阅读框为 5 88对碱基的cDNA克隆 ,推测肽链有 196个氨基酸。序列分析表明 ,该肽链与衣滴虫过氧化物氧化还原酶 (Prx1蛋白 )及人的自然杀伤增强因子B分别有 5 6 %和 6 1%的同源性 ;除了两个高度保守的半胱氨酸作用基序外 ,还有蛋白激酶C磷酸化和酪氨酸激酶磷酸化作用基序 ,N 豆蔻酰化作用位点 ,脂质运载蛋白信号位点等。 结论 :该蛋白有 >5 6 %的可能性位于胞浆 ,和典型 2 CysPrx亚家族有很高 (5 6 %～ 6 2 % )的同源性 ,很可能是其中的一个新成员。

二色补血草硫氧还蛋白过氧化物酶基因LbTPx的克隆及其表达

从二色补血草(Limonium bicolor)cDNA文库中分离出一个新的硫氧还蛋白过氧化物酶基因(LbTPx)全长cDNA序列。基因全长1 016 bp,其中:5’非翻译区146 bp,3’非翻译区69 bp,开放读码框(ORF)801 bp,共编码266个氨基酸;编码蛋白的分子质量为47.99×10-24kg,理论等电点为(pI)8.83。利用荧光定量PCR方法研究了二色补血草LbTPx基因在NaCl、ABA、CuSO4、ZnCl2和CdCl2胁迫下不同时间的表达模式。结果表明:NaCl和CuSO4处理均能诱导LbTPx基因在二色补血草根和叶中的表达;ABA、ZnCl2和CdCl2处理则只能诱导LbTPx基因在二色补血草叶中的表达,而抑制其在二色补血草根中的表达。

多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆及序列分析

从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切及测序鉴定后进行序列分析。扩增获得大小为614bp的TmTPx基因cDNA,该基因的完整开放阅读框架(ORF,591bp)编码196个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为Mr 21690,等电点为7.61。生物信息学分析结果表明TmTPx具有一个典型的2-Cys Prx保守功能结构域。绦虫已知TPx的分子进化分析发现,多头带绦虫与亚洲牛带绦虫的亲缘关系最近,与猪带绦虫和肥头绦虫的亲缘关系次之,与细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的亲缘关系最远。

硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅵ在小鼠卵巢、输卵管和子宫中的分布

目的探讨硫氧还蛋白过氧化物酶VI(PrxVI)卵母细胞生长发育和早期胚胎发育中的可能作用。方法用免疫组织化学方法观察6～8周雌性昆明小鼠卵巢、输卵管和子宫PrxVI的分布。结果在卵巢中,PrxVI免疫阳性见于卵巢卵母细胞和黄体;在输卵管中,输卵管上皮呈PrxVI免疫阳性反应;在子宫中,PrxVI免疫阳性反应见于子宫内膜上皮、腺上皮和子宫内膜基质细胞。结论PrxVI的定位分布提示其可能参与小鼠卵母细胞生长发育和卵母细胞成熟过程的调节,并为受精卵和早期胚胎发育提供抗氧化的良好微环境。

中国青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶表达、纯化及活性特征

目的:将编码青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)的基因克隆于原核表达载体,并通过表达获得重组的TPx蛋白。方法:将已获得的TPxcDNA片段克隆于原核表达载体pET-32a(+)M,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pET-32a(+)M-TPx。37℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。获得的重组TPx蛋白再经过纯化,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白。并对重组蛋白进行活性鉴定和结构分析。结果:构建的重组质粒pET-32a(+)M-TPx在大肠杆菌中高效表达,经纯化后的重组TPx蛋白纯度可达90%以上,其单体相对分子质量为24460。重组TPx蛋白是以同源二聚体和单体混合的形式存在,在二硫苏糖醇(DTT)存在时具有还原H2O2活性和对超螺旋DNA或对硫醇基敏感蛋白的保护作用。结论:本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了重组TPx蛋白,并且证实其活性与其高级结构紧密相关。

硫氧环蛋白过氧化物酶3对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的影响

目的观察硫氧环蛋白过氧化物酶3(Prdx-3)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的作用,并探讨其作用机制。方法体外培养心肌细胞(H9C2)随机分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+转染对照组和AngⅡ+Prdx-3转染组。脂质体转染法将Prdx-3表达质粒转染心肌细胞,Western blot法检测Prdx-3蛋白表达,Real-time PCR法检测脑钠素(BNP)m RNA表达,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prdx-3表达质粒转染心肌细胞后,Prdx-3蛋白表达值为(0.88±0.12),高于转染对照组(0.38±0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,AngⅡ组BNP m RNA[(1.00±0.00)比(1.72±0.29)]、ROS[(3473±81)比(4439±111)]及Prdx-3蛋白表达水平[(0.33±0.05)比(0.72±0.14)]均明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。AngⅡ+转染对照组和AngⅡ组的BNP m RNA[(1.72±0.29)比(1.94±0.34)]、ROS[(4439±111)比(4285±167)]及Prdx-3蛋白水平[(0.72±0.14)比(0.75±0.11)]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+Prdx-3转染组BNP m RNA[(1.72±0.29)比(1.29±0.15)]和ROS水平[(4439±111)比(3648±254)]明显下降,但Prdx-3蛋白水平[(0.72±0.14)比(1.89±0.37)]显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 AngⅡ可通过ROS诱导心肌细胞肥大,而Prdx-3通过降低ROS抑制AngⅡ的作用。

人红细胞内血红蛋白与硫氧还蛋白过氧化物酶2的相互作用

目的研究人红细胞内硫氧还蛋白过氧化物酶2(Prx2)与血红蛋白(Hb)的相互作用。方法首先利用红细胞Hb再释放试验分离红细胞和溶血液电泳释放的4个区带,即Hb A、Hb A2、Hb A与Hb A2之间(Hb A-A2)及再释放Hb,将这些区带分别切下,通过反复冻融获得各区带所含蛋白;用葡聚糖G-25浓缩后再利用SDS-PAGE分离各区带所含蛋白组分,并用抗-Prx2做免疫印迹分析;最后用微量热泳动试验(MST)分别检测Prx2蛋白与Hb A和Hb A2之间的结合常数。结果红细胞电泳释放的区带Hb A、Hb A2、Hb A-A2及再释放Hb中均有Prx2;而溶血液电泳释放的Hb区带中,除Hb A2外其余各Hb区带中均有Prx2。MST检测显示,Prx2蛋白与Hb A的结合常数(Kd值)为(14±1.08)μmol/L,而与Hb A2之间的Kd值未被检测到。结论 Prx2与Hb A之间存在相互作用,但与Hb A2之间可能没有相互作用。

灯盏花素对UL补硒大鼠谷胱甘肽过氧化物酶和硫氧还蛋白还原酶基因表达和活性的影响

目的 观察灯盏花素对允许的最高摄入量硒大鼠肝脏、肾脏、睾丸组织中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因表达和活性的影响。方法 采用RT PCR方法和酶活性测定分析GSH Px和TR基因表达水平和活性。结果 UL硒能降低大鼠肝脏组织中GSH Px和TRmRNA表达水平及活性 ,灯盏花素能增加补硒大鼠肝脏中GSH Px和TRmRNA表达水平和活性。UL硒对大鼠肾脏、睾丸组织GSH Px和TRmRNA表达水平和活性无明显影响。结论 灯盏花素能有效拮抗UL硒所致的GSH Px和TRmRNA表达和活性的下降 ,且UL硒所致的GSH Px和TRmRNA表达和活性的下降具有组织特异性。

猪带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶的原核表达及其生物学特性分析

猪带绦虫(Ts)是一种重要的人畜共患寄生虫,硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)是猪带绦虫及其幼虫重要的功能蛋白。为研究TsTPx蛋白的功能和筛选猪囊虫高效免疫靶标,提取猪带绦虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增tstpx基因,测序分析后构建原核表达载体pET-30a(+)-tstpx,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,用镍离子亲和层析纯化TsTPx蛋白并进行生物学特性分析,包括抗氧化功能和抗原性。结果如下:SDS-PAGE分析表明,表达的TsTPx蛋白约25ku,主要以可溶性形式存在于菌体裂解上清中。抗氧化功能分析表明,在金属催化氧化(MCO)体系中,TsTPx蛋白对质粒DNA超螺旋结构的保护率与质量浓度呈正相关,20μg·mL-1时可100%保护,电泳图谱中被氧化的开环慢迁移带完全消失;H2O2还原体系中,TsTPx蛋白对H2O2的还原率与质量浓度呈正相关,100μg·mL-1时,在含二硫苏糖醇(DTT)体系中,还原率达69.9%,在不含DTT体系中为54.5%。抗原性分析:Western blotting显示TsTPx蛋白可被猪带绦虫囊尾蚴阶段阳性血清识别,具有良好的反应原性;用TsTPx蛋白免疫家兔,间接ELISA检测的抗体效价高达1∶320 000,具有良好的免疫原性。本研究表达的TsTPx蛋白具有生物学活性和良好的抗原性,为进一步阐明其生物学功能和研制猪囊虫病疫苗奠定了基础。

巨片形吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶的克隆、表达和免疫学诊断价值评价

目的免疫筛选巨片形吸虫成虫c DNA表达文库,并克隆和重组表达巨片形吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx),初步评价其免疫诊断价值。方法用巨片形吸虫病患者的混合血清免疫学筛选巨片形吸虫成虫λZAP c DNA表达文库,取阳性噬菌体进行克隆、测序及序列比对分析。将TPx基因全长片段和N段截短片段分别克隆至原核表达质粒p ET28a(+)中,用组氨酸标签亲和纯化柱(Ni-NTA树脂)纯化2种重组蛋白r Fg TPx和r Fg TPx_nt(N端截短型)。以间接ELISA法,检测27例巨片形吸虫病患者治疗前后的血清,15例日本血吸虫病和15例华支睾吸虫病的患者血清,32位健康人血清,评价重组蛋白的免疫诊断价值。结果克隆的巨片形吸虫TPx基因,经原核表达、纯化并复性,获得其可溶性重组蛋白r Fg TPx和r Fg TPx_nt,相对分子质量(Mr)分别为30 000和26 000。以重组蛋白r Fg TPx_nt为检测抗原的ELISA检测的敏感性为66.7%(18/27),特异性为96.8%(60/62),总符合率为87.6%(78/89),与日本血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清的交叉反应率分别为0和1/15。巨片形吸虫病患者治疗前后血清的A450值分别为0.233±0.088和0.129±0.072,差异有统计学意义(t=4.27,P<0.01)。结论筛选并克隆了巨片形吸虫TPx抗原基因,实现原核表达,并证明该重组蛋白作为人体巨片形吸虫病的免疫诊断抗原具有较好的诊断意义,亦有可能具有早期诊断和疗效考核价值。

硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ诱饵质粒的构建和检测

目的构建硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ(PrxⅡ)诱饵质粒,同时检测其在酵母菌内的表达和对酵母细胞的毒性。方法提取人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8细胞的RNA,利用RT-PCR获得其cDNA,PCR方法扩增PrxⅡ基因片段,纯化后以内切酶双酶切PrxⅡ和酵母表达载体pGBKT7,回收产物并连接,重组质粒命名为pGBKT7-PrxⅡ,将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用。结果构建的诱饵载体pGBKT7-PrxⅡ测序结果表明序列完全正确,融合区域的读码框正确。将pGBKT7-PrxⅡ成功转化入酵母感受态AH109,并证明PrxⅡ蛋白对酵母无毒性作用。结论证实了PrxⅡ蛋白无酵母毒性,诱饵质粒pGBKT7-PrxⅡ可以用于酵母双杂交研究前列腺癌发病机制。

犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶真核表达质粒的构建及初步免疫试验

为评价犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）真核表达质粒的免疫原性，本实验利用RT—PCR方法扩增TPx基因，将其克隆于真核表达载体pvAxloe构建重组质粒pVAXI—TPx，并对其进行体外表达鉴定及通过特异性抗体水平及相关的免疫因子的检测，评价其在体内诱导的免疫反应。

大片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的原核表达及免疫原性分析

构建大片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Fg.TPx)原核表达质粒,经大肠埃希菌Rosetta表达融合蛋白(Fg.TPx/His)并对其进行纯化和初步鉴定。PCR扩增Fg.TPx的基因片段,亚克隆至pET32a(+)中构建重组表达载体pPET32a-Fg.TPx。IPTG诱导表达,经镍离子亲和层析分离纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。重组质粒经限制性内切酶双酶切和测序分析表明构建成功,表达产物以可溶性和包涵体形式存在,纯度为90%,Wsetern blot证实该蛋白可与抗His单克隆抗体发生特异性结合反应,分子质量为TPx和His分子质量之和,表明是融合蛋白。重组蛋白可以被大片吸虫感染水牛阳性血清特异性识别。免疫家兔产生的抗体效价最高可达1∶4 000。成功构建了p ET32a-Fg.TPx原核表达质粒,重组蛋白得到高浓度表达,具有抗原性,为进一步研究其在大片吸虫病诊断中的应用奠定了基础。