良性增生性疾病和恶性肿瘤患者的硫氧还蛋白还原酶活性及其诊断价值分析

目的探讨良性增生性疾病和恶性肿瘤患者的硫氧还蛋白还原酶(TR)活性及其诊断价值。方法选取2021年1月至2022年12月南通大学附属江阴医院收治的202例恶性肿瘤患者为恶性肿瘤组、300例良性增生性疾病患者为良性增生组,选取同期在南通大学附属江阴医院进行体检的1846例健康志愿者为对照组。比较分析三组的TR活性。比较分析不同类型恶性肿瘤患者的TR活性以及不同类型良性增生性疾病患者的TR活性。采用受试者操作特征曲线分析TR活性对恶性肿瘤的诊断价值。结果恶性肿瘤组和良性增生组患者的TR活性水平均高于对照组,且恶性肿瘤组患者的TR活性水平高于良性增生组,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌等不同类型恶性肿瘤患者的TR活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。前列腺增生、胃肠息肉、结节类、囊肿类等不同类型良性增生性疾病患者的TR活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。受试者操作特征曲线分析结果显示,TR活性诊断恶性肿瘤的曲线下面积为0.893(95%CI 0.757~0.825),根据约登指数最大点确定TR活性对恶性肿瘤的诊断临界值为8.44U/ml。以TR活性≥8.44 U/ml为诊断标准,其诊断恶性肿瘤的敏感度为60.90%,特异度为90.00%,表明TR活性的诊断效能较高;Kappa系数为0.508,表明TR活性检测与实际诊疗结果比较,具有较好的一致性。结论良性增生性疾病患者以及恶性肿瘤患者的TR活性均显著升高,且TR活性检测对恶性肿瘤具有一定的诊断价值。

浅谈POCT及硫氧还蛋白还原酶活性检测在肿瘤领域的应用与进展

目的:通过对日立7600-110全自动生化仪和日立7170 s全自动生化分析仪测定结果比对,探讨不同仪器间天门冬氨酸氨基恶性肿瘤已成为我国最常见的导致死亡的疾病。由于病因与发病机制复杂,且缺乏早期诊断的特异性指标,导致诊断和治疗滞后,病死率极高。肿瘤标志物对于肿瘤的早期发现具有重要的提示意义,但目前肿瘤标志物检测大多依赖于专业实验室,成本高,检测周期长,且在医疗资源匮乏地区难以推广。近期新兴的POCT检验模式发展迅猛,因其设备便携,获得结果迅速且操作简单,故有利于人群中肿瘤标志物的筛查。硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性检测,是一种新型的肿瘤标志物检测,其在体内的表达和活性水平在一定程度上反应了体内细胞的异常增生程度。因此,POCT和TrxR活性检测的联合应用将有望成为癌症预防的新策略。

低硒大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶的活性和表达

目的探讨低硒状态下大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶(TR2)的活性和表达变化,分析体内硒水平改变对TR2活性的影响及其可能的机制。方法用低硒饲料喂养断乳2周的Wistar大鼠14周,分别采用生物化学方法、Western blot和Northern blot杂交检测心肌组织中TR2的活性改变及TR2蛋白、基因表达变化。结果低硒组大鼠心肌TR2活性降低至对照组的69.3%,差异有非常显著意义。蛋白杂交的峰面积密度扫描结果显示,常硒组为3 538,低硒组为2 167。Northern blot结果显示,低硒组与对照组差异无显著意义。结论低硒能够降低心肌TR2的活性和蛋白表达水平,但并不影响此酶的基因表达。提示低硒导致心肌TR2活性降低可能是由于TR2蛋白合成过程中SeCys插入减少所致。

低硒大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶的活性和表达研究

目的 探讨低硒状态下大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶（TR）的活性和表达变化,分析体内硒元素含量改变对硫氧还蛋白还原酶活性的影响及其可能的机制。方法 用低硒饲料喂养断乳2周的Wistar大鼠14周,分别采用生物化学方法、Western blot和Northern blot杂交检测心肌组织中TR的活性改变及TR蛋白、基因表达变化。结果 低硒组大鼠心肌TR活性降低至对照组的63.8％,差异有非常显著意义、蛋白杂交的峰面积密度扫描结果显示,常硒组为3 438,低硒组为 2 067。Northern blot结果显示低硒组与对照组无明显差异。结论 低硒能够降低心肌TR的活性和蛋白表达水平,但并不影响此酶的基因表达。提示低硒导致心肌TR活性降低可能是由于TR蛋白合成过程中SeCys插入减少所致。

健康人外周血烟曲霉硫氧还蛋白还原酶抗原特异性T淋巴细胞检测与结果评价

目的为评估烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)抗原是否具有免疫保护作用,文中建立并优化检测健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中TR抗原特异性T淋巴细胞(TR/AST)分泌干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)与白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)的酶联免疫斑点法(enzyme linked immunospot assay,ELISPOT)检测技术,以探讨TR抗原特异性T淋巴细胞在侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)中的作用。方法采用方阵滴定法优化ELISPOT反应条件。以烟曲霉TR为特异性刺激物,阳性细胞刺激剂为对照,用ELISPOT技术检测20名健康人外周血PBMC分泌IFN-γ、IL-4的阳性斑点形成细胞(spot forming cell,SFC)频数。结果方阵滴定法结果显示,10μg TR抗原、健康人PBMC终浓度为3×105/孔时ELISPOT检测结果最佳。20名健康人特异性分泌IFN-γ和IL-4的SFC频数分别为15(3.5,59.5)个和0(0,0)个,IFN-γ的SFC频数显著高于IL-4,差异有统计学意义(P<0.001)。TR可刺激所有20名健康人产生IFN-γ应答,其中9例产生强IFN-γ应答(SFC>20个/3×105PBMC),占45%;而19名健康人在TR刺激后不产生IL-4应答,仅1例产生弱IL-4应答(SFC=1)。结论烟曲霉TR抗原诱导的T细胞免疫以Th1型免疫应答占绝对优势,因此,该抗原具有成为保护性抗原的潜能。

硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化

目的探讨肺癌病人的血浆硫氧还蛋白还原酶(TR)活性及化疗前后的变化。方法收集2012年10月至2013年1月本院49例肺癌病人化疗前后的血浆和同期49例健康查体人员的血浆,进行硫氧还蛋白还原酶活性检测。结果 49例肺癌病人化疗前血浆TR活性值为4.34±6.52 U/m L,化疗后为3.93±6.30 U/m L,健康查体人员为-5.61±7.39 U/m L,数据均采用LOG(X+4IQR)转换,并经t检验,结果显示,化疗前、后TR活性与健康查体组(对照组)相比较,P均<0.05。化疗前、后TR活性的变化,有统计学差异。结论肺癌病人的TR活性高;肺癌病人化疗前后血浆TR活性随疾病好转有降低。

枯草芽孢杆菌硫氧还蛋白还原酶的原核表达及活性分析

硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是一种NADPH依赖的、含硒的黄素蛋白,在细胞增殖和分化、维持细胞内外氧化还原平衡中起重要作用。通过基因特异性引物从枯草芽孢杆菌BS04菌株中扩增TrxR编码基因,亚克隆至p ET-28a(+)原核表达载体并转化大肠埃希菌BL21(DE3),经过IPTG诱导表达后采用Ni离子亲和层析进行重组蛋白纯化及活性分析。结果表明,枯草芽孢杆菌BS04菌株的TrxR基因全长1 011 bp,编码336个氨基酸,与已知枯草芽孢杆菌TrxR氨基酸同源性达99%。SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析发现,重组蛋白分子量约37 ku,与预期相符。DTNB还原法测定TrxR活性及酶动力学常数结果表明,其对DTNB具有较高的还原活性,其Km和Kcat值分别为3.06 mmol·L-1和324.71 min-1。该研究结果为进一步了解TrxR的功能提供了参考依据。

应激对大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶表达的影响

目的 探讨硫氧还蛋白还原酶在大鼠心肌抗氧化应激反应中的作用。方法 将 Wistar大鼠冰泳 5min,采用 Northern blot和 Western blot检测大鼠冰泳前后心肌硫氧还蛋白还原酶的表达情况。结果 应激后大鼠心肌中硫氧还蛋白还原酶的基因和蛋白表达均增加。

低硒心肌损伤与硫氧还蛋白还原酶的关系研究

目的 研究长期低硒心肌硫氧还蛋白还原酶的活性和表达改变 ,探讨硫氧还蛋白还原酶与心肌损伤的关系。方法 用低硒饲料喂养Wistar大鼠 14周 ,通过透射电镜观察心肌的病理学改变 ,采用生物化学方法和Westernblot杂交检测心肌组织中硫氧还蛋白还原酶的活性及蛋白表达。结果 低硒导致大鼠心肌线粒体轻度损伤。低硒组大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶活性降低至对照组的 6 3.8% ,经t检验P <0 .0 1。蛋白杂交扫描结果显示 ,常硒组峰面积为 3438,低硒组峰面积为 2 0 6 7。结论 低硒降低硫氧还蛋白还原酶的活性和蛋白表达水平 ,使心肌抗氧化能力减低 ,引起心肌损伤。

硫氧还蛋白还原酶：一种新型有效的胃癌化疗疗效监测标志物

胃癌是国际上发病率较高的肿瘤,寻找新型有效的肿瘤标志物用于胃癌的诊断和疗效评估,对于胃癌的临床治疗有较大的帮助。本研究选取经临床确诊的155例胃癌患者为研究对象,探究血浆硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)在胃癌化疗后临床获益人群与未获益人群中检测水平的差异,以及其与治疗效果的关系。结果显示,未获益组TR阳性率为82益组TR阳性率(48显示,未获益组人群与获益组人群的TR活性诊断阈值为8the curve,AUC)为0瘤特异性抗原(cancer antigen,CA)19?9和CA72?4。同时,TR与常规胃癌标志物的联合检测提高阳性检出率至98有较高的一致性。

乙型肝炎病毒X蛋白上调硫氧还蛋白还原酶1基因表达的研究

目的 探讨乙型肝炎病毒 (HBV)X蛋白 (HBxAg)对硫氧还蛋白还原酶 1(TXNRD1)启动子转录的激活作用。方法 利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域 (TXNRD1p) ,聚合酶链反应 (PCR)技术扩增TXNRD1p ,克隆至真核报告载体pCAT3_Basic中 ,构建pCAT3_TXNRD1p报告载体 ;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测报告基因氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性 ;并与HBxAg真核表达载体pcDNA3 1(-)_X共转染HepG2细胞系 ,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果 结果表明 ,pCAT3_TXNRD1p和pcDNA3 1(-)_X瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3_Basic空载体的 19 3倍 ,pCAT3_TXNRD1p的 3 9倍。结论 克隆的TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性 ;HBxAg具有对TXNRDl的反式激活作用。

人肝再生增强因子上调硫氧还蛋白还原酶1基因表达的研究

目的探讨人肝再生增强因子(hALR)对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用。方法以我室构建的hALR的cDNA基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域(TXNRD1p),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRD1p,亚克隆至真核报告载体pCAT3Basic中,构建pCAT3TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与表达载体pcDNA31(-)ALR共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果pCAT3TXNRD1p和pcDNA31(-)ALR瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3Basic空载体的104倍,pcAT3TXNRD1p的21倍。本实验进一步验证了我室利用基因表达谱技术研究ALR蛋白反式激活作用的结果。结论我室克隆的TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;hALR蛋白具有对TXNRD1的反式激活作用。

TK1联合“TrxR活性检测”在食管癌临床诊断中的应用研究

探究胸苷激酶1(TK1)联合硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性检测在食管癌临床诊断中的应用价值。方法:2020年4月至2021年6月期间分别收集我院50例食管炎症性疾病(设为炎症组)、食管癌(设为癌症组)患者的血样本,并另选择同期50例健康体检者设为对照组。采用NRM411全自动化学发光测定仪检测血清TK1水平;采用KEA-TR100检测仪测定血浆TrxR活性,比较各组血清TK1值、血浆TrxR活性水平的差异,并应用ROC曲线分析TK1、TrxR活性水平单独、联合检测对食管癌的诊断效能。结果:三组血清TK1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。而癌症组的血浆TrxR活性水平显著高于炎症组、对照组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,TK1、TrxR活性水平联合检测的灵敏度、曲线下面积高于单一检测。结论:血清TK1检测特异性较高,血浆TrxR活性检测灵敏度较高,两者联合检测优势互补,应用于食管癌诊断中能够提高诊断准确性,具有较高的临床价值。

基于硫氧还蛋白还原酶1探究堆心菊灵对人前列腺癌细胞中活性氧产生的影响

目的 探究堆心菊灵在人前列腺癌细胞中的抗癌作用及其潜在的作用机制。方法 人前列腺癌DU145和PC-3细胞分别以不同浓度的堆心菊灵处理48 h,CCK-8法检测细胞存活率;qRT-PCR法检测硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase1,TrxR1)m RNA表达情况。从人类蛋白免疫组化表达数据库中检测前列腺癌组织和正常组织中TrxR1蛋白表达情况;经堆心菊灵或活性氧(reactive oxygen species,ROS)抑制剂处理后,采用DCFH-DA染色法检测ROS的产生;敲除或过表达TrxR1,经堆心菊灵处理后,检测2种细胞中ROS水平。结果 堆心菊灵显著抑制前列腺癌细胞存活率和TrxR1 m RNA表达水平(P<0.05、0.001),呈剂量相关性。与正常组织相比,TrxR1在前列腺癌组织中高表达。堆心菊灵显著诱导了前列腺癌细胞中ROS的产生,敲除TrxR1显著提高了前列腺癌细胞中ROS水平,过表达TrxR1抑制了前列腺癌细胞中ROS产生;而堆心菊灵可改善TrxR1过表达对ROS产生的抑制作用。结论 堆心菊灵可以通过靶向人前列腺癌细胞中的TrxR1来促进ROS的产生,进而发挥抗前列腺癌的作用。

TXNRD1在肝细胞癌中活性氧相关细胞凋亡导致多药耐药性中的作用

目的耐药性是肝细胞癌(HCC)化疗失败的主要原因,硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)作为活性氧(ROS)代谢的主要影响因素,已被证明与HCC患者的不良预后有关。本研究探究TXNRD1在HCC多药耐药机制中的作用。方法选取BEL-7402细胞系的BEL/FU细胞作为多重耐药细胞株。siRNA用来干预细胞TXNRD1的表达;实时定量PCR和蛋白质印迹检测TXNRD1的表达;CCK-8法检测和流式细胞术检测用来评估TXNRD1对肝癌细胞ROS蓄积、5-氟尿嘧啶(5-Fu)和多柔比星(DOX)耐药性以及体外凋亡的影响;异种肿瘤移植模型的构建用来研究金诺芬(AUR)在体内对细胞耐药性的影响。计量资料两组间比较采用独立样本t检验。结果BEL/FU作为多重耐药HCC细胞系表现出TXNRD1 mRNA与蛋白水平的高表达(P值均<0.05)。AUR作为TXNRD1的抑制剂,联合化疗药物5-FU及DOX处理与单一化疗药物处理相比,细胞克隆集落形成数目明显减少(P值均<0.01),凋亡比例明显增加(P值均<0.001)。N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为ROS的清除剂,可以明显削弱siRNA敲低TXNRD1表达对BEL/FU细胞耐药性的影响,应用NAC可以有效降低干扰后细胞的凋亡比例(P值均<0.001)。动物实验也证实,5-Fu与AUR联合治疗相对于单一5-Fu治疗,裸鼠的肿瘤质量更轻(P<0.001),体积更小(P<0.001)。结论TXNRD1在HCC耐药中扮演重要角色,抑制其在细胞水平作用可有效改善耐药性,AUR作为TXNRD1抑制剂在HCC综合治疗中也具备极大的应用前景。

超声BI-RADS 3级乳腺小肿块联合TR活性检测的应用分析

目的探讨乳腺超声联合硫氧还蛋白还原酶(TR)活性检测在提高BI-RADS 3级乳腺小肿块恶性病检出的应用价值。方法选取2015年1月—2016年1月湖北医药学院附属人民医院健康管理中心乳腺超声检查确诊BI-RADS 3级乳腺肿块(直径≤2 cm),同时TR活性检测结果异常,并行活检的被检者102例作为观察组,同期随机选取未行TR活性检测,仅行活检的被检者110例作为对照组。对比分析两组被检者一般资料及术后乳腺恶性病检出率的差异。结果两组在是否绝经、月经初潮年龄、不同活检方法等方面差异无统计学意义(P>0.05)。观察组TR活性检测结果阳性比例与观察组术后病理阳性比例间具有较好的一致性。观察组术后病理良性病变比例(92.4%)与对照组比较(93.5%),差异无统计学意义(P>0.05)。观察组术后病理阳性率(8.9%)高于对照组(1.8%)(P<0.05)。结论超声BI-RADS 3级乳腺小肿块(≤2 cm)联合TR活性检测,可筛查出部分潜在高危被检者,提高乳腺恶性病(乳腺癌)的检出率,值得临床推广、应用。

甘草查尔酮A对结肠癌细胞中氧化还原稳态调控的影响

目的研究甘草查尔酮A对结肠癌细胞氧化还原调控的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测甘草查尔酮A对结肠癌细胞活性的影响;经甘草查尔酮A或活性氧(ROS)抑制剂处理后,流式细胞术和Western blot法检测结肠癌细胞凋亡率、凋亡蛋白和ROS水平;酶学实验和试剂盒检测甘草查尔酮A对硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性的影响;分子对接和Western blot法检测甘草查尔酮A对TrxR1蛋白的作用;沉默结肠癌细胞中TrxR1蛋白,经甘草查尔酮A处理后,检测ROS水平及凋亡率变化;经甘草查尔酮A或还原型谷胱甘肽(GSH)抑制剂处理后,检测细胞GSH水平及凋亡率。结果甘草查尔酮A能抑制结肠癌细胞活性(P<0.05,P<0.01),诱导结肠癌细胞发生凋亡(P<0.05,P<0.01),并上调其ROS水平;ROS抑制剂能逆转甘草查尔酮A引起的ROS水平上升和促凋亡作用(P<0.01);甘草查尔酮A能选择性抑制TrxR1活性(P<0.05,P<0.01),对TrxR1蛋白表达则几乎无影响(P>0.05);沉默TrxR1和GSH抑制剂均能协同甘草查尔酮A的促凋亡作用(P<0.01),甘草查尔酮A对GSH水平几乎无影响(P>0.05)。结论甘草查尔酮A可能通过抑制TrxR1蛋白活性、上调ROS水平的方式诱导结肠癌细胞凋亡。

硫氧还蛋白还原酶2基因抗砷作用

目的研究硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase,TrxR2)基因在抗砷细胞(As-ECV304)中的抗砷作用。方法蛋白印迹法(Western Blot)检测As-ECV304和对照组细胞TrxR2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞周期分布,化学合成TrxR2基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染As-ECV304细胞,Western Blot验证干扰效率,细胞急性毒性试验检测细胞抗砷性的改变。结果As-ECV304细胞中TrxR2蛋白水平较对照组细胞高,As-ECV304细胞G0/G1期细胞所占比例高于对照细胞。3个siRNA中有一个能特异性抑制TrxR2基因表达,干扰组细胞的生存率低于阴性对照组和未干扰组,3组细胞的半数抑制率IC50分别为9.13,15.88和18.52μmol/L。结论siRNA干扰TrxR2基因表达后能明显降低抗砷细胞的抗砷性,提示该基因在细胞抗砷机制中发挥了重要作用。

日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达及特性分析

目的制备具有生物活性的重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)硒蛋白。方法采用PCR法,在SjTGR基因开放阅读框的末端融合大肠埃希菌(E.coli)硒蛋白转译的硒代半胱氨酸插入序列以构建一个嵌合基因,将此嵌合基因亚克隆到表达载体pET-41a中形成重组表达质粒SjTGR-pET-41a。将重组表达质粒SjTGR-pET-41a和质粒pSUABC共转化到E.coliBL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达SjTGR蛋白。用阿糖胞苷-2',5'-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析从表达产物中纯化重组SjTGR蛋白。以重组SjTGR免疫小鼠制备TGR多克隆血清,免疫印迹试验分析日本血吸虫体内是否存在天然TGR。采用生物化学方法分析重组SjTGR硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白的酶活性。结果含有E.coli硒代半胱氨酸插入序列的SjTGR嵌合基因构建成功。含SjTGR基因的重组质粒SjTGR-pET-41a的转化子细菌在静止生长期经IPTG诱导,24℃培养24h可表达出可溶性SjTGR蛋白,质粒pSUABC表达产物可促进硒代半胱氨酸整合,增加硒蛋白的产量。免疫印迹试验结果显示,纯化重组SjTGR多克隆抗体可以识别血吸虫成虫体内天然的TGR。生化分析结果显示,SjTGR是一种具有硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白活性的多功能酶。结论具有生物活性的SjTGR已被成功表达,为进一步研究其功能与应用价值奠定了基础。