硫氧还蛋白还原酶抑制剂抗结直肠癌的作用机制研究进展

结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,也是全球第二大癌症相关死亡因素。近些年来,结直肠癌的发病率也在逐渐升高,对人们的生命安全造成严重的威胁。硫氧还蛋白还原酶(TrxR)主要分布在细胞内,是含硒同型二聚体酶的一种,在机体氧化还原稳定、细胞增殖及肿瘤转移中起到关键作用。TrxR的特有结合域是含硒C末端活性位点,其靶向抑制剂已成为了肿瘤治疗的研究重点。该文综述了TrxR抗结直肠癌的作用机制,以期为临床治疗结直肠癌提供参考。

蚯蚓组织中硫氧还蛋白还原酶抑制剂初探

目的研究蚯蚓组织成份对硫氧还蛋白系统的影响。方法乙酸盐缓冲液抽提蚯蚓组织成份 ,不同处理的蚯蚓提取液与硫氧还蛋白系统反应。在 340nm波长处 ,用NADPH作为被监测的反应底物来动态监测硫氧还蛋白还原酶 (TrxR)的催化活性。结果蚯蚓提取液与TrxR单独作用后 ,监测底物NADPH的吸光值几乎不发生变化。蚯蚓提取液的溶剂及煮沸后的上清液不具有以上作用。结论蚯蚓组织中含有能够抑制TrxR活性的物质 ,该物质的化学本质为蛋白质。

硫氧还蛋白还原酶及其抑制剂的研究进展

硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)是存在于细胞中的含硒同型二聚体黄素酶,其主要功能为调节氧化还原平衡,与细胞的增殖、凋亡以及肿瘤的发生、转移、血管生成中密切相关。含硒C末端活性位点是TrxR的特有结合域,对TrxR与底物的结合具有重要作用,其靶向抑制剂正成为治疗与肿瘤相关疾病的研究热点。本文从TrxR的结构特点及其与肿瘤相关的生理功能出发,根据其与底物结合能力进行分类,将TrxR抑制剂分为可逆和不可逆两类,对两类抑制剂的最新研究进展进行了综述。

精胺氧化酶靶向调控硫氧还蛋白还原酶1促进结肠癌恶性进展

目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)靶向调控硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TR1)对结肠癌恶性进展的影响。方法收集2018年9月至2019年6月就诊于南京市第一医院的30例结肠癌患者的结肠癌组织及其癌旁组织。采用免疫组织化学染色检测组织中的SMOX表达。采用Western blot实验检测结肠癌细胞株(HCT116、SW480、DLD-1、SW620、Caco-2、HCT-15、T84和LS123)和正常结肠细胞株NCM460的SMOX表达。利用基因表达谱互作分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)网站查询SMOX在结肠癌组织与癌旁组织中的表达情况和SMOX表达水平与患者总生存的关系。采用Western blot实验检测上述细胞和组织中代谢产物亚精胺合成酶的水平。利用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)结合流式细胞术和组织免疫荧光实验分别检测结肠细胞和组织中代谢副产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。选取SMOX表达水平最高的结肠癌细胞株HCT116和SW480为实验对象,构建慢病毒载体,用PLKO.1-puro-shCtrl、PLKO.1-puro-shSMOX、PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1和PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1-TR1分别转染细胞,分别为shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组。Western blot实验检测HCT116和SW480细胞shCtrl组和shSMOX组SMOX与TR1的表达情况,以及HCT116细胞shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的TR1表达水平。利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。PI/异硫氰酸荧光素-膜连蛋白(PI/fluorescein isothiocyanate-Annexin V,PI/FITC-Annexin V)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡/坏死情况。Transwell体外侵袭实验分析细胞侵袭能力。shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的HCT116细胞稀释至浓度为1×107个/mL的细胞悬液分别向裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 mL细胞悬液,建立裸鼠结肠癌移植瘤模型。4周后处死裸鼠,分离组织,剥取肿瘤称重。运用免疫组织化学染色检测裸鼠结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数。结果SMOX在8种结肠癌细胞株和结肠癌组织中的表达水平均高于正常结肠细胞株和癌旁组织,且与不良预后有关(均P<0.05)。与正常结肠细胞和癌旁组织比较,8种结肠癌细胞和结肠癌组织中的代谢产物亚精胺合成酶和ROS水平随SMOX的高表达同步升高(均P<0.05)。与shCtrl组比较,shSMOX组G_(0)/G_(1)期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目增加,细胞增殖活性降低,侵袭数量减少,SMOX和TR1表达水平降低(均P<0.05)。与shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组比较,shSMOX+TR1组TR1表达水平升高,S期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目减少,细胞增殖活性升高(均P<0.05)。裸鼠结肠癌移植瘤模型显示,注射后14 d,与shCtrl组比较,shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组肿瘤体积和重量均降低,结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数减少,而shSMOX+TR1组肿瘤体积、重量和结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数则较shSMOX+pcDNA3.1组增加(均P<0.05)。结论SMOX在结肠癌细胞和组织中表达上调,可能通过靶向提高TR1的表达促进细胞周期运转,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长,进而促进结肠癌恶性进展。

妊娠期糖尿病患者血清微小RNA-875-5p与血清硫氧还蛋白还原酶1对母婴结局的预测价值

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)、微小RNA-875-5p(miR-875-5p)对母婴结局的预测价值。方法选择2019年4月~2020年4月本院收治的GDM患者124例作为GDM组,另选本院同期体检的健康妊娠女性124例作为对照组。根据母体结局与围生儿结局将GDM组患者分别分为母体结局不良组(46例)、母体结局良好组(78例)及围生儿结局不良组(49例)、围生儿结局良好组(75例)。收集所有受试者一般临床资料,血清中TXNRD1、miR-875-5p相对表达水平、母体及围生儿不良结局并分组进行比较。采用多因素logistic回归分析评估GDM患者母婴不良结局的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-875-5p和TXNRD1对母婴不良结局的预测价值。结果GDM组患者血清miR-875-5p相对表达水平显著低于对照组,血清TXNRD1相对表达水平显著高于对照组(P<0.05);GDM组母体不良结局中羊水过多、胎膜早破、早产、剖宫产、产后出血比例及母体不良结局总发生率均显著高于对照组,围生儿不良结局中巨大儿、胎儿窘迫、新生儿窒息、新生儿低血糖、高胆红素血症比率及围生儿不良结局总发生率均显著高于对照组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,血清miR-875-5p均是GDM患者母体、围生儿不良结局的保护因素,年龄、孕前BMI、不良孕产史、血糖控制不良及血清TXNRD1均是其危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-875-5p、TXNRD1对母体、围生儿不良结局联合预测的AUC均大于二者单独预测。结论血清miR-875-5p、TXNRD1在GDM患者中分别为异常低、高表达,并均对母婴结局具有一定预测价值,且二者联合预测价值更高。

硫氧还蛋白还原酶活性检测试剂盒在恶性肿瘤辅助诊断中的价值

目的探讨硫氧还蛋白还原酶(TR)活性检测试剂盒在恶性肿瘤辅助诊断中的价值。方法检测不同地区、不同检验机构1122例健康人群TR活性,差异有无统计学意义;检测84例恶性肿瘤患者TR活性,并与健康人群比较,差异有无统计学意义,通过ROC曲线对检测结果进行分析评价。结果北京体检机构的TR活性均值为(2.6±4.1)U/mL,武汉体检机构的TR均值为(2.6±3.7)U/mL,湖北中医药大学附属医院的TR均值为(2.4±3.5)U/mL,各组间TR活性水平差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组TR活性均值为(9.2±6.4)U/mL,健康组TR活性为(2.5±3.7)U/mL,两者间差异有统计学意义(P<0.05)。固定健康组和肿瘤组的样本比例为4:1,不同的样本量间TR活性差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线下面积为0.812±0.029。结论组间均数比较U检验和ROC曲线评价均显示,TR活性检测试剂盒用于与异常增生密切相关的肿瘤生长的临床血样检测具有重要的实用价值。

硫氧还蛋白还原酶结构与肿瘤治疗的研究进展

硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)是硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)系统里主要的功能蛋白,在调节多种细胞氧化还原信号通路中起关键作用。近年来,TrxR/Trx被越来越多地认为是肿瘤发展的重要调节剂,因此靶向TrxR/Trx是一种很有前景的肿瘤治疗策略。该文对TrxR的结构特点、与肿瘤相关的生理功能、TrxR抑制剂进行综述,以对TrxR的研究提供参考。

硫氧还蛋白还原酶活性检测在食管癌60例临床诊断中的应用

目的 探究硫氧还蛋白还原酶(TR)活性检测在食管癌临床诊断中的应用。方法 2019年1月至2020年7月海安市人民医院收治的食管癌病人、食管良性病灶病人及同期于该院进行体检的健康者,即分为食管癌组、良性组和对照组,各60例。分别检测食管癌组、良性组和对照组病人血浆中TR活性;检测食管癌组织病人化疗前、化疗时和化疗后血浆中TR活性;比较食管癌组病人TR活性在不同分期、转移方面的差异;评估食管癌组病人手术预后,随访2年评估远期预后情况;确定TR活性检测对食管癌病人的诊断价值。结果 与对照组(3.16±0.79)U/mL相比,良性组(6.34±0.96)U/mL和食管癌组(8.12±1.25)U/mL病人血浆中TR活性均明显升高(P<0.05);且食管癌病人血浆中TR活性明显高于良性组(P<0.05)。与化疗前(8.12±1.25)U/mL相比,化疗时(4.65±0.87)U/mL和化疗后(3.37±0.62)U/mL食管癌病人血浆中TR活性均明显降低(P<0.05);且化疗后食管癌组病人血浆中TR活性明显低于化疗时(P<0.05)。TR活性表达和食管癌病人性别、年龄、肿瘤长径和肿瘤位置均无相关性(P>0.05),与病人淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05)。和Ⅰ&Ⅱ期食管癌病人相比,Ⅲ&Ⅳ期食管癌病人血浆中TR活性明显升高(P<0.05);和未转移食管癌病人相比,食管癌转移病人血浆中TR活性明显升高(P<0.05)。食管癌病人化疗后有39例病人得到了完全或部分缓解,病人总有效率为65%。对食管癌病人随访2年统计显示,食管癌病人2年生存率为75.0%(45例),TR高表达(>4 U/mL)2年生存人数为31(31/41)例,生存率为75.6%;TR低表达(<4 U/mL)2年生存率为14(14/19)例,生存率为73.7%;log-rank检验TR高表达和低表达病人生存率比较差异有统计学意义(P<0.05)。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析TR检测曲线下面积(AUC)值为0.92,特异度为83.2%,灵敏度为93.6%。结论 TR高表达于食管癌病人血浆中,其可用于食管癌的早期检测,提示病情的进展情况,对病人的治疗预后能有效评价。

良性增生性疾病和恶性肿瘤患者的硫氧还蛋白还原酶活性及其诊断价值分析

目的探讨良性增生性疾病和恶性肿瘤患者的硫氧还蛋白还原酶(TR)活性及其诊断价值。方法选取2021年1月至2022年12月南通大学附属江阴医院收治的202例恶性肿瘤患者为恶性肿瘤组、300例良性增生性疾病患者为良性增生组,选取同期在南通大学附属江阴医院进行体检的1846例健康志愿者为对照组。比较分析三组的TR活性。比较分析不同类型恶性肿瘤患者的TR活性以及不同类型良性增生性疾病患者的TR活性。采用受试者操作特征曲线分析TR活性对恶性肿瘤的诊断价值。结果恶性肿瘤组和良性增生组患者的TR活性水平均高于对照组,且恶性肿瘤组患者的TR活性水平高于良性增生组,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌等不同类型恶性肿瘤患者的TR活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。前列腺增生、胃肠息肉、结节类、囊肿类等不同类型良性增生性疾病患者的TR活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。受试者操作特征曲线分析结果显示,TR活性诊断恶性肿瘤的曲线下面积为0.893(95%CI 0.757~0.825),根据约登指数最大点确定TR活性对恶性肿瘤的诊断临界值为8.44U/ml。以TR活性≥8.44 U/ml为诊断标准,其诊断恶性肿瘤的敏感度为60.90%,特异度为90.00%,表明TR活性的诊断效能较高;Kappa系数为0.508,表明TR活性检测与实际诊疗结果比较,具有较好的一致性。结论良性增生性疾病患者以及恶性肿瘤患者的TR活性均显著升高,且TR活性检测对恶性肿瘤具有一定的诊断价值。

硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂研究进展

目的简要概述硫氧还蛋白体系与恶性肿瘤的关系,为开发新的肿瘤治疗药物提供参考。方法参考近年来已报道的相关文献,对硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂进行总结。结果概述了硫氧还蛋白体系以及其在肿瘤发生发展中的作用,总结了2017年至2023年发现的硫氧还蛋白还原酶抑制剂。结论研究靶向抑制硫氧还蛋白还原酶的候选药物和治疗策略,进一步开发调节活性氧稳态的小分子用来治疗癌症有很广阔的应用前景和重要意义。

血浆硫氧还蛋白还原酶在乳腺癌中表达及其临床价值研究

目的:研究血浆硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)在乳腺癌组织中的表达及其临床价值。方法:乳腺癌患者80例设为乳腺癌组,良性乳腺肿瘤患者48例设为良性对照组,50例健康体检人员设为正常对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血浆TrxR水平,化学发光法检测血清癌抗原(carcinoma antigen 153,CA153)水平。比较3组血浆TrxR水平,分析TrxR水平与乳腺癌患者临床病理参数的关系,采用Spearman相关性分析血浆TrxR与血清CA153的相关性,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评估血浆TrxR、血清CA153对乳腺癌的诊断价值,比较乳腺癌患者治疗前后TrxR水平的变化。结果:乳腺癌组血浆TrxR水平明显高于良性对照组及正常对照组,良性对照组血浆TrxR水平明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。组织学分级Ⅱ~Ⅲ级乳腺癌患者血浆TrxR水平明显高于Ⅰ级患者,发生淋巴结转移患者血浆TrxR水平明显高于无淋巴结转移患者,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者血浆TrxR水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,血浆TrxR和血清CA153具有一定的相关性(r=0.3805,P<0.05)。ROC曲线分析显示,TrxR诊断乳腺癌的敏感度为84.0%,特异度为75.0%,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.8470;CA153诊断乳腺癌的敏感度为70.0%,特异度为77.5%,AUC为0.7815。72例Ⅰ~Ⅲ期乳腺癌患者接受手术治疗及术后辅助治疗,治疗后2个月乳腺癌患者TrxR水平较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血浆TrxR可能成为有效的乳腺癌诊断指标,其在评估乳腺癌病情恶化程度、预测未来发展趋势等方面具有重要的临床意义。

硫氧还蛋白还原酶与冠心病患者介入术后造影剂肾病相关性的研究

目的:评估硫氧还蛋白还原酶(TR)与造影剂肾病(CIN)的相关性。方法:收集254例冠心病患者的术前TR水平以及其他基线资料,应用多因素Logistic回归分析CIN的危险因素。结果:共有25例患者发生了CIN,TR低水平组CIN的发生率(15.58%)高于TR高水平组(7.34%,P=0.043)。多元Logistic回归分析显示,TR是CIN的危险因素(OR=0.632,95%CI 0.458~0.871,P=0.005),其他危险因素包括年龄、糖尿病、中性粒细胞与尿酸。结论:低水平的TR可能会增加冠心病患者介入术后CIN的发病风险,但仍需进一步大样本的前瞻性研究证实。

吉西他滨诱导胰腺癌细胞株SW1990的耐药作用与硫氧还蛋白还原酶活性的改变

目的建立对吉西他宾耐药的胰腺癌细胞株,探讨硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在耐药过程中的作用。方法采用间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株SW1990对吉西他宾耐药,检测其生物学性状变化,并对比观察TrxR活性变化。结果药物培养9个月后,得到稳定传代的SW1990/GZ耐药细胞株;其形态学、生长特征等均发生了明显变化,细胞变圆、体积缩小、内质网扩张、颗粒样物质增多及细胞倍增时间延长;对吉西他滨、5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素的耐药性均显著增加;耐药细胞的TrxR活性也明显增高。结论SW1990/GZ有多药耐药现象,TrxR在耐药过程中起一定作用。

哈维氏弧菌硫氧还蛋白还原酶在大肠杆菌中的表达及对大菱鲆的免疫保护作用

从致病性哈维氏弧菌Vibrio harveyi SF1基因组中扩增获得含硫氧还蛋白还原酶(trxR)基因的1 133bp目的片段,连接至载体pMD19-T Simple。测序结果表明,目的片段含有960 bp trxR基因阅读框,编码为319个氨基酸残基的蛋白质。Blast分析结果显示,硫氧还蛋白还原酶蛋白氨基酸序列与哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌、副溶血弧菌、灿烂弧菌、弗氏弧菌的硫氧还蛋白还原酶蛋白序列的相似性分别为99%、98%、96%、94%、92%。构建表达质粒pET-28a(+)/TrxR后转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析显示,重组蛋白的相对分子质量为34 000。用Ni琼脂糖亲和层析柱分离得到纯化的重组蛋白,将该蛋白以50μg/尾的剂量肌肉注射免疫大菱鲆Scophthalmus maximus,用ELISA法检测免疫1～4周内鱼血清中特异性抗体的效价。结果表明,特异性抗体效价持续升高,第2周则达到1∶128。免疫4周后用哈维氏弧菌SF1对大菱鲆进行人工感染,对照组鱼的死亡率为100%,免疫组鱼的死亡率为25%,相对免疫保护力为75%。试验表明,哈维氏弧菌TrxR蛋白具有较好的免疫原性,可作为潜在的亚单位疫苗用于哈维氏弧菌病的免疫预防。

低硒大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶的活性和表达

目的探讨低硒状态下大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶(TR2)的活性和表达变化,分析体内硒水平改变对TR2活性的影响及其可能的机制。方法用低硒饲料喂养断乳2周的Wistar大鼠14周,分别采用生物化学方法、Western blot和Northern blot杂交检测心肌组织中TR2的活性改变及TR2蛋白、基因表达变化。结果低硒组大鼠心肌TR2活性降低至对照组的69.3%,差异有非常显著意义。蛋白杂交的峰面积密度扫描结果显示,常硒组为3 538,低硒组为2 167。Northern blot结果显示,低硒组与对照组差异无显著意义。结论低硒能够降低心肌TR2的活性和蛋白表达水平,但并不影响此酶的基因表达。提示低硒导致心肌TR2活性降低可能是由于TR2蛋白合成过程中SeCys插入减少所致。

小鼠H22肝癌皮下移植瘤的生长与血硫氧还蛋白还原酶活性的相关性

背景与目的:研究表明硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)在肿瘤组织中的表达较正常组织中明显增多且活性升高,但关于肿瘤生长与血TrxR活性的关系报道却很少。本实验的目的是研究小鼠H22肝癌皮下移植瘤的生长与血TrxR活性的关系。方法:建立H22肝癌昆明小鼠皮下移植瘤动物模型,分为5组:空白组不接种肿瘤细胞,模型组接种肿瘤细胞,这两组小鼠均给予5‰羧甲基纤维素钠灌胃作为对照;乙烷硒啉低、中、高剂量组均接种肿瘤细胞,并分别灌胃给予36mg/kg、72mg/kg、216mg/kg乙烷硒啉。于肿瘤接种前、肿瘤生长至100mm3给药前、给药第1天、给药第4天及给药第10天5个时间点行眼眶取血,二硫代双硝基苯甲酸(dithio-bis-nitrobenzoic acid,DTNB)法测定血浆TrxR活性。处死小鼠剥离皮下肿瘤,DTNB法测定肿瘤组织TrxR活性。结果:给药结束时低、中、高剂量乙烷硒啉组小鼠的抑瘤率分别达到59.5%、74.3%、74.9%。空白组小鼠血TrxR活性稳定;接种肿瘤后小鼠血TrxR活性随肿瘤体积增大而增加,呈明显正相关;给药结束时,低、中、高剂量乙烷硒啉组小鼠血TrxR活性抑制率分别为59.2%、68.4%、68.9%,而肿瘤组织中TrxR活性抑制率分别为15.3%、25.8%、29.8%。结论:H22肝癌小鼠血TrxR活性与其肿瘤生长呈正相关;不同剂量的TrxR抑制剂乙烷硒啉干预后,血TrxR活性能够被不同程度地抑制,与肿瘤生长的抑制呈一致性。

血浆硫氧还蛋白还原酶在肺癌中表达的初步研究

目的探讨血浆硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)在肺癌中的活性表达及临床意义。方法酶联免疫分析方法检测50例肺癌患者及50例健康体检者血浆中TrxR的活性表达,并作相关分析。结果肺癌患者血浆中TrxR活性高于健康体检者,且差异有统计学意义(P<0.05);肺腺癌、肺鳞癌、小细胞肺癌患者血浆TrxR活性均值分别为(3.96±5.22)U/mL、(6.31±6.20)U/mL、(6.98±7.04)U/mL,各组间TrxR活性水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TrxR活性表达与肺癌密切相关。TrxR活性表达在肺癌不同组织学分型间相同。

烟曲霉硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的原核表达及抗原性分析

目的克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性。方法用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化E.coliJM109。经序列分析证实后,提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因,与表达载体pET28a(+)连接,转化E.coli BL21(DE3),筛选重组表达质粒。用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白表达,用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质,并用亲和层析柱进行纯化。结果构建了含TR全长基因的重组表达质粒,IPTG诱导后可高效表达。免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别。结论成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,重组蛋白质具有良好的抗原性,为进一步研究奠定了基础。

应激对大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶表达的影响

目的 探讨硫氧还蛋白还原酶在大鼠心肌抗氧化应激反应中的作用。方法 将 Wistar大鼠冰泳 5min,采用 Northern blot和 Western blot检测大鼠冰泳前后心肌硫氧还蛋白还原酶的表达情况。结果 应激后大鼠心肌中硫氧还蛋白还原酶的基因和蛋白表达均增加。

低硒大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶的活性和表达研究

目的 探讨低硒状态下大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶（TR）的活性和表达变化,分析体内硒元素含量改变对硫氧还蛋白还原酶活性的影响及其可能的机制。方法 用低硒饲料喂养断乳2周的Wistar大鼠14周,分别采用生物化学方法、Western blot和Northern blot杂交检测心肌组织中TR的活性改变及TR蛋白、基因表达变化。结果 低硒组大鼠心肌TR活性降低至对照组的63.8％,差异有非常显著意义、蛋白杂交的峰面积密度扫描结果显示,常硒组为3 438,低硒组为 2 067。Northern blot结果显示低硒组与对照组无明显差异。结论 低硒能够降低心肌TR的活性和蛋白表达水平,但并不影响此酶的基因表达。提示低硒导致心肌TR活性降低可能是由于TR蛋白合成过程中SeCys插入减少所致。