良性增生性疾病和恶性肿瘤患者的硫氧还蛋白还原酶活性及其诊断价值分析

目的探讨良性增生性疾病和恶性肿瘤患者的硫氧还蛋白还原酶(TR)活性及其诊断价值。方法选取2021年1月至2022年12月南通大学附属江阴医院收治的202例恶性肿瘤患者为恶性肿瘤组、300例良性增生性疾病患者为良性增生组,选取同期在南通大学附属江阴医院进行体检的1846例健康志愿者为对照组。比较分析三组的TR活性。比较分析不同类型恶性肿瘤患者的TR活性以及不同类型良性增生性疾病患者的TR活性。采用受试者操作特征曲线分析TR活性对恶性肿瘤的诊断价值。结果恶性肿瘤组和良性增生组患者的TR活性水平均高于对照组,且恶性肿瘤组患者的TR活性水平高于良性增生组,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌等不同类型恶性肿瘤患者的TR活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。前列腺增生、胃肠息肉、结节类、囊肿类等不同类型良性增生性疾病患者的TR活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。受试者操作特征曲线分析结果显示,TR活性诊断恶性肿瘤的曲线下面积为0.893(95%CI 0.757~0.825),根据约登指数最大点确定TR活性对恶性肿瘤的诊断临界值为8.44U/ml。以TR活性≥8.44 U/ml为诊断标准,其诊断恶性肿瘤的敏感度为60.90%,特异度为90.00%,表明TR活性的诊断效能较高;Kappa系数为0.508,表明TR活性检测与实际诊疗结果比较,具有较好的一致性。结论良性增生性疾病患者以及恶性肿瘤患者的TR活性均显著升高,且TR活性检测对恶性肿瘤具有一定的诊断价值。

硫氧还蛋白还原酶活性检测在食管癌60例临床诊断中的应用

目的 探究硫氧还蛋白还原酶(TR)活性检测在食管癌临床诊断中的应用。方法 2019年1月至2020年7月海安市人民医院收治的食管癌病人、食管良性病灶病人及同期于该院进行体检的健康者,即分为食管癌组、良性组和对照组,各60例。分别检测食管癌组、良性组和对照组病人血浆中TR活性;检测食管癌组织病人化疗前、化疗时和化疗后血浆中TR活性;比较食管癌组病人TR活性在不同分期、转移方面的差异;评估食管癌组病人手术预后,随访2年评估远期预后情况;确定TR活性检测对食管癌病人的诊断价值。结果 与对照组(3.16±0.79)U/mL相比,良性组(6.34±0.96)U/mL和食管癌组(8.12±1.25)U/mL病人血浆中TR活性均明显升高(P<0.05);且食管癌病人血浆中TR活性明显高于良性组(P<0.05)。与化疗前(8.12±1.25)U/mL相比,化疗时(4.65±0.87)U/mL和化疗后(3.37±0.62)U/mL食管癌病人血浆中TR活性均明显降低(P<0.05);且化疗后食管癌组病人血浆中TR活性明显低于化疗时(P<0.05)。TR活性表达和食管癌病人性别、年龄、肿瘤长径和肿瘤位置均无相关性(P>0.05),与病人淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05)。和Ⅰ&Ⅱ期食管癌病人相比,Ⅲ&Ⅳ期食管癌病人血浆中TR活性明显升高(P<0.05);和未转移食管癌病人相比,食管癌转移病人血浆中TR活性明显升高(P<0.05)。食管癌病人化疗后有39例病人得到了完全或部分缓解,病人总有效率为65%。对食管癌病人随访2年统计显示,食管癌病人2年生存率为75.0%(45例),TR高表达(>4 U/mL)2年生存人数为31(31/41)例,生存率为75.6%;TR低表达(<4 U/mL)2年生存率为14(14/19)例,生存率为73.7%;log-rank检验TR高表达和低表达病人生存率比较差异有统计学意义(P<0.05)。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析TR检测曲线下面积(AUC)值为0.92,特异度为83.2%,灵敏度为93.6%。结论 TR高表达于食管癌病人血浆中,其可用于食管癌的早期检测,提示病情的进展情况,对病人的治疗预后能有效评价。

吉西他滨诱导胰腺癌细胞株SW1990的耐药作用与硫氧还蛋白还原酶活性的改变

目的建立对吉西他宾耐药的胰腺癌细胞株,探讨硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在耐药过程中的作用。方法采用间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株SW1990对吉西他宾耐药,检测其生物学性状变化,并对比观察TrxR活性变化。结果药物培养9个月后,得到稳定传代的SW1990/GZ耐药细胞株;其形态学、生长特征等均发生了明显变化,细胞变圆、体积缩小、内质网扩张、颗粒样物质增多及细胞倍增时间延长;对吉西他滨、5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素的耐药性均显著增加;耐药细胞的TrxR活性也明显增高。结论SW1990/GZ有多药耐药现象,TrxR在耐药过程中起一定作用。

小鼠H22肝癌皮下移植瘤的生长与血硫氧还蛋白还原酶活性的相关性

背景与目的:研究表明硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)在肿瘤组织中的表达较正常组织中明显增多且活性升高,但关于肿瘤生长与血TrxR活性的关系报道却很少。本实验的目的是研究小鼠H22肝癌皮下移植瘤的生长与血TrxR活性的关系。方法:建立H22肝癌昆明小鼠皮下移植瘤动物模型,分为5组:空白组不接种肿瘤细胞,模型组接种肿瘤细胞,这两组小鼠均给予5‰羧甲基纤维素钠灌胃作为对照;乙烷硒啉低、中、高剂量组均接种肿瘤细胞,并分别灌胃给予36mg/kg、72mg/kg、216mg/kg乙烷硒啉。于肿瘤接种前、肿瘤生长至100mm3给药前、给药第1天、给药第4天及给药第10天5个时间点行眼眶取血,二硫代双硝基苯甲酸(dithio-bis-nitrobenzoic acid,DTNB)法测定血浆TrxR活性。处死小鼠剥离皮下肿瘤,DTNB法测定肿瘤组织TrxR活性。结果:给药结束时低、中、高剂量乙烷硒啉组小鼠的抑瘤率分别达到59.5%、74.3%、74.9%。空白组小鼠血TrxR活性稳定;接种肿瘤后小鼠血TrxR活性随肿瘤体积增大而增加,呈明显正相关;给药结束时,低、中、高剂量乙烷硒啉组小鼠血TrxR活性抑制率分别为59.2%、68.4%、68.9%,而肿瘤组织中TrxR活性抑制率分别为15.3%、25.8%、29.8%。结论:H22肝癌小鼠血TrxR活性与其肿瘤生长呈正相关;不同剂量的TrxR抑制剂乙烷硒啉干预后,血TrxR活性能够被不同程度地抑制,与肿瘤生长的抑制呈一致性。

硫氧还蛋白还原酶活性检测试剂盒在恶性肿瘤辅助诊断中的价值

目的探讨硫氧还蛋白还原酶(TR)活性检测试剂盒在恶性肿瘤辅助诊断中的价值。方法检测不同地区、不同检验机构1122例健康人群TR活性,差异有无统计学意义;检测84例恶性肿瘤患者TR活性,并与健康人群比较,差异有无统计学意义,通过ROC曲线对检测结果进行分析评价。结果北京体检机构的TR活性均值为(2.6±4.1)U/mL,武汉体检机构的TR均值为(2.6±3.7)U/mL,湖北中医药大学附属医院的TR均值为(2.4±3.5)U/mL,各组间TR活性水平差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组TR活性均值为(9.2±6.4)U/mL,健康组TR活性为(2.5±3.7)U/mL,两者间差异有统计学意义(P<0.05)。固定健康组和肿瘤组的样本比例为4:1,不同的样本量间TR活性差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线下面积为0.812±0.029。结论组间均数比较U检验和ROC曲线评价均显示,TR活性检测试剂盒用于与异常增生密切相关的肿瘤生长的临床血样检测具有重要的实用价值。

癫痫大鼠海马硫氧还蛋白还原酶活性及cleaved caspase-3表达检测

目的研究海人酸诱导癫痫大鼠海马组织硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性及cleaved caspase-3表达变化。方法 Sprague-Dawley大鼠随机分为癫痫对照组(NS组)和癫痫组(KA组)。采用脑室注射海人酸制作大鼠癫痫模型。海人酸注射6h取海马组织匀浆,应用5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)还原法对海马TrxR活性进行测定,采用western blotting法检测cleaved caspase-3表达。结果 NS组、KA组TrxR活性分别为:(71±19)、(116±40)U/mg;KA组cleaved caspase-3的表达较NS组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论癫痫大鼠海马组织TrxR活性明显增加,引起caspase-3裂解,导致神经元凋亡。

不同程度溶血对硫氧还蛋白还原酶活性检测的影响

近年，全世界肿瘤发病率呈逐年递增趋势。2010年全球有超过800万人死于恶性肿瘤，癌症已取代心血管类疾病成为致死率最高的病症存在。随着肿瘤发病率的不断提高，肿瘤标志物检测在肿瘤诊治方面的重要作用被公认且受到临床的高度重视。硫氧还蛋白还原酶（thioredoxinre—ductase，TR）活性检测是针对体内异常增生的酶活性进行的检测。

硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化

目的探讨肺癌病人的血浆硫氧还蛋白还原酶(TR)活性及化疗前后的变化。方法收集2012年10月至2013年1月本院49例肺癌病人化疗前后的血浆和同期49例健康查体人员的血浆,进行硫氧还蛋白还原酶活性检测。结果 49例肺癌病人化疗前血浆TR活性值为4.34±6.52 U/m L,化疗后为3.93±6.30 U/m L,健康查体人员为-5.61±7.39 U/m L,数据均采用LOG(X+4IQR)转换,并经t检验,结果显示,化疗前、后TR活性与健康查体组(对照组)相比较,P均<0.05。化疗前、后TR活性的变化,有统计学差异。结论肺癌病人的TR活性高;肺癌病人化疗前后血浆TR活性随疾病好转有降低。

浅谈POCT及硫氧还蛋白还原酶活性检测在肿瘤领域的应用与进展

目的:通过对日立7600-110全自动生化仪和日立7170 s全自动生化分析仪测定结果比对,探讨不同仪器间天门冬氨酸氨基恶性肿瘤已成为我国最常见的导致死亡的疾病。由于病因与发病机制复杂,且缺乏早期诊断的特异性指标,导致诊断和治疗滞后,病死率极高。肿瘤标志物对于肿瘤的早期发现具有重要的提示意义,但目前肿瘤标志物检测大多依赖于专业实验室,成本高,检测周期长,且在医疗资源匮乏地区难以推广。近期新兴的POCT检验模式发展迅猛,因其设备便携,获得结果迅速且操作简单,故有利于人群中肿瘤标志物的筛查。硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性检测,是一种新型的肿瘤标志物检测,其在体内的表达和活性水平在一定程度上反应了体内细胞的异常增生程度。因此,POCT和TrxR活性检测的联合应用将有望成为癌症预防的新策略。

低硒大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶的活性和表达

目的探讨低硒状态下大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶(TR2)的活性和表达变化,分析体内硒水平改变对TR2活性的影响及其可能的机制。方法用低硒饲料喂养断乳2周的Wistar大鼠14周,分别采用生物化学方法、Western blot和Northern blot杂交检测心肌组织中TR2的活性改变及TR2蛋白、基因表达变化。结果低硒组大鼠心肌TR2活性降低至对照组的69.3%,差异有非常显著意义。蛋白杂交的峰面积密度扫描结果显示,常硒组为3 538,低硒组为2 167。Northern blot结果显示,低硒组与对照组差异无显著意义。结论低硒能够降低心肌TR2的活性和蛋白表达水平,但并不影响此酶的基因表达。提示低硒导致心肌TR2活性降低可能是由于TR2蛋白合成过程中SeCys插入减少所致。

精胺氧化酶靶向调控硫氧还蛋白还原酶1促进结肠癌恶性进展

目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)靶向调控硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TR1)对结肠癌恶性进展的影响。方法收集2018年9月至2019年6月就诊于南京市第一医院的30例结肠癌患者的结肠癌组织及其癌旁组织。采用免疫组织化学染色检测组织中的SMOX表达。采用Western blot实验检测结肠癌细胞株(HCT116、SW480、DLD-1、SW620、Caco-2、HCT-15、T84和LS123)和正常结肠细胞株NCM460的SMOX表达。利用基因表达谱互作分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)网站查询SMOX在结肠癌组织与癌旁组织中的表达情况和SMOX表达水平与患者总生存的关系。采用Western blot实验检测上述细胞和组织中代谢产物亚精胺合成酶的水平。利用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)结合流式细胞术和组织免疫荧光实验分别检测结肠细胞和组织中代谢副产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。选取SMOX表达水平最高的结肠癌细胞株HCT116和SW480为实验对象,构建慢病毒载体,用PLKO.1-puro-shCtrl、PLKO.1-puro-shSMOX、PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1和PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1-TR1分别转染细胞,分别为shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组。Western blot实验检测HCT116和SW480细胞shCtrl组和shSMOX组SMOX与TR1的表达情况,以及HCT116细胞shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的TR1表达水平。利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。PI/异硫氰酸荧光素-膜连蛋白(PI/fluorescein isothiocyanate-Annexin V,PI/FITC-Annexin V)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡/坏死情况。Transwell体外侵袭实验分析细胞侵袭能力。shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的HCT116细胞稀释至浓度为1×107个/mL的细胞悬液分别向裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 mL细胞悬液,建立裸鼠结肠癌移植瘤模型。4周后处死裸鼠,分离组织,剥取肿瘤称重。运用免疫组织化学染色检测裸鼠结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数。结果SMOX在8种结肠癌细胞株和结肠癌组织中的表达水平均高于正常结肠细胞株和癌旁组织,且与不良预后有关(均P<0.05)。与正常结肠细胞和癌旁组织比较,8种结肠癌细胞和结肠癌组织中的代谢产物亚精胺合成酶和ROS水平随SMOX的高表达同步升高(均P<0.05)。与shCtrl组比较,shSMOX组G_(0)/G_(1)期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目增加,细胞增殖活性降低,侵袭数量减少,SMOX和TR1表达水平降低(均P<0.05)。与shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组比较,shSMOX+TR1组TR1表达水平升高,S期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目减少,细胞增殖活性升高(均P<0.05)。裸鼠结肠癌移植瘤模型显示,注射后14 d,与shCtrl组比较,shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组肿瘤体积和重量均降低,结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数减少,而shSMOX+TR1组肿瘤体积、重量和结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数则较shSMOX+pcDNA3.1组增加(均P<0.05)。结论SMOX在结肠癌细胞和组织中表达上调,可能通过靶向提高TR1的表达促进细胞周期运转,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长,进而促进结肠癌恶性进展。

妊娠期糖尿病患者血清微小RNA-875-5p与血清硫氧还蛋白还原酶1对母婴结局的预测价值

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)、微小RNA-875-5p(miR-875-5p)对母婴结局的预测价值。方法选择2019年4月~2020年4月本院收治的GDM患者124例作为GDM组,另选本院同期体检的健康妊娠女性124例作为对照组。根据母体结局与围生儿结局将GDM组患者分别分为母体结局不良组(46例)、母体结局良好组(78例)及围生儿结局不良组(49例)、围生儿结局良好组(75例)。收集所有受试者一般临床资料,血清中TXNRD1、miR-875-5p相对表达水平、母体及围生儿不良结局并分组进行比较。采用多因素logistic回归分析评估GDM患者母婴不良结局的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-875-5p和TXNRD1对母婴不良结局的预测价值。结果GDM组患者血清miR-875-5p相对表达水平显著低于对照组,血清TXNRD1相对表达水平显著高于对照组(P<0.05);GDM组母体不良结局中羊水过多、胎膜早破、早产、剖宫产、产后出血比例及母体不良结局总发生率均显著高于对照组,围生儿不良结局中巨大儿、胎儿窘迫、新生儿窒息、新生儿低血糖、高胆红素血症比率及围生儿不良结局总发生率均显著高于对照组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,血清miR-875-5p均是GDM患者母体、围生儿不良结局的保护因素,年龄、孕前BMI、不良孕产史、血糖控制不良及血清TXNRD1均是其危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-875-5p、TXNRD1对母体、围生儿不良结局联合预测的AUC均大于二者单独预测。结论血清miR-875-5p、TXNRD1在GDM患者中分别为异常低、高表达,并均对母婴结局具有一定预测价值,且二者联合预测价值更高。

低硒大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶的活性和表达研究

目的 探讨低硒状态下大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶（TR）的活性和表达变化,分析体内硒元素含量改变对硫氧还蛋白还原酶活性的影响及其可能的机制。方法 用低硒饲料喂养断乳2周的Wistar大鼠14周,分别采用生物化学方法、Western blot和Northern blot杂交检测心肌组织中TR的活性改变及TR蛋白、基因表达变化。结果 低硒组大鼠心肌TR活性降低至对照组的63.8％,差异有非常显著意义、蛋白杂交的峰面积密度扫描结果显示,常硒组为3 438,低硒组为 2 067。Northern blot结果显示低硒组与对照组无明显差异。结论 低硒能够降低心肌TR的活性和蛋白表达水平,但并不影响此酶的基因表达。提示低硒导致心肌TR活性降低可能是由于TR蛋白合成过程中SeCys插入减少所致。

硫氧还蛋白还原酶结构与肿瘤治疗的研究进展

硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)是硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)系统里主要的功能蛋白,在调节多种细胞氧化还原信号通路中起关键作用。近年来,TrxR/Trx被越来越多地认为是肿瘤发展的重要调节剂,因此靶向TrxR/Trx是一种很有前景的肿瘤治疗策略。该文对TrxR的结构特点、与肿瘤相关的生理功能、TrxR抑制剂进行综述,以对TrxR的研究提供参考。

硫氧还蛋白还原酶生物学活性及其与人类疾病的关系

硫氧还蛋白还原酶 (TrxR)是吡啶核苷酸和二硫化物氧化还原酶的黄素蛋白家族成员之一 ,包含保守的 Cys Val Asn Val Gly Cys 氧化还原位点 ,催化依赖硫氧还蛋白NADPH还原反应。TrxR含有存在于许多底物中的氧化还原活性位点 ,催化多种内源和外源性复合物。TrxR具有多种生物学活性 ,调节机体氧化还原反应和细胞生长与增殖 ,与人类某些疾病发病机制有关 。

依达拉奉对癫痫大鼠海马硫氧还蛋白还原酶活性影响的研究

目的研究依达拉奉(Ed)对海人酸(KA)诱导癫痫大鼠海马组织硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性的影响。方法 SD大鼠随机分为癫痫对照组(saline组)、癫痫组(KA组)和药物对照组(KA+saline组)及药物组(Ed+KA组)。采用脑室注射KA制作大鼠癫痫模型,Ed于KA注射前40 min腹腔用药。KA注射6h取海马组织匀浆,应用DTNB还原法对海马TrxR活性进行测定,用Western blot法检测cleaved caspase-3的表达。结果 Saline组、KA组、KA+saline组、Ed+KA组TrxR活性分别为(U/mg protein):66±18、111±42、102±40、75±12;KA组和KA+saline组cleaved caspase-3的表达均较saline组增加(均P<0.05),而Ed+KA组较KA+saline组则降低(P<0.05)。结论 KA诱导癫痫大鼠海马组织TrxR活性增加,依达拉奉可能通过抑制TrxR的活性以增加对神经元的保护作用。

血浆硫氧还蛋白还原酶在乳腺癌中表达及其临床价值研究

目的:研究血浆硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)在乳腺癌组织中的表达及其临床价值。方法:乳腺癌患者80例设为乳腺癌组,良性乳腺肿瘤患者48例设为良性对照组,50例健康体检人员设为正常对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血浆TrxR水平,化学发光法检测血清癌抗原(carcinoma antigen 153,CA153)水平。比较3组血浆TrxR水平,分析TrxR水平与乳腺癌患者临床病理参数的关系,采用Spearman相关性分析血浆TrxR与血清CA153的相关性,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评估血浆TrxR、血清CA153对乳腺癌的诊断价值,比较乳腺癌患者治疗前后TrxR水平的变化。结果:乳腺癌组血浆TrxR水平明显高于良性对照组及正常对照组,良性对照组血浆TrxR水平明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。组织学分级Ⅱ~Ⅲ级乳腺癌患者血浆TrxR水平明显高于Ⅰ级患者,发生淋巴结转移患者血浆TrxR水平明显高于无淋巴结转移患者,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者血浆TrxR水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,血浆TrxR和血清CA153具有一定的相关性(r=0.3805,P<0.05)。ROC曲线分析显示,TrxR诊断乳腺癌的敏感度为84.0%,特异度为75.0%,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.8470;CA153诊断乳腺癌的敏感度为70.0%,特异度为77.5%,AUC为0.7815。72例Ⅰ~Ⅲ期乳腺癌患者接受手术治疗及术后辅助治疗,治疗后2个月乳腺癌患者TrxR水平较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血浆TrxR可能成为有效的乳腺癌诊断指标,其在评估乳腺癌病情恶化程度、预测未来发展趋势等方面具有重要的临床意义。

灯盏花素对UL补硒大鼠谷胱甘肽过氧化物酶和硫氧还蛋白还原酶基因表达和活性的影响

目的 观察灯盏花素对允许的最高摄入量硒大鼠肝脏、肾脏、睾丸组织中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因表达和活性的影响。方法 采用RT PCR方法和酶活性测定分析GSH Px和TR基因表达水平和活性。结果 UL硒能降低大鼠肝脏组织中GSH Px和TRmRNA表达水平及活性 ,灯盏花素能增加补硒大鼠肝脏中GSH Px和TRmRNA表达水平和活性。UL硒对大鼠肾脏、睾丸组织GSH Px和TRmRNA表达水平和活性无明显影响。结论 灯盏花素能有效拮抗UL硒所致的GSH Px和TRmRNA表达和活性的下降 ,且UL硒所致的GSH Px和TRmRNA表达和活性的下降具有组织特异性。

枯草芽孢杆菌硫氧还蛋白还原酶的原核表达及活性分析

硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是一种NADPH依赖的、含硒的黄素蛋白,在细胞增殖和分化、维持细胞内外氧化还原平衡中起重要作用。通过基因特异性引物从枯草芽孢杆菌BS04菌株中扩增TrxR编码基因,亚克隆至p ET-28a(+)原核表达载体并转化大肠埃希菌BL21(DE3),经过IPTG诱导表达后采用Ni离子亲和层析进行重组蛋白纯化及活性分析。结果表明,枯草芽孢杆菌BS04菌株的TrxR基因全长1 011 bp,编码336个氨基酸,与已知枯草芽孢杆菌TrxR氨基酸同源性达99%。SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析发现,重组蛋白分子量约37 ku,与预期相符。DTNB还原法测定TrxR活性及酶动力学常数结果表明,其对DTNB具有较高的还原活性,其Km和Kcat值分别为3.06 mmol·L-1和324.71 min-1。该研究结果为进一步了解TrxR的功能提供了参考依据。

哈维氏弧菌硫氧还蛋白还原酶在大肠杆菌中的表达及对大菱鲆的免疫保护作用

从致病性哈维氏弧菌Vibrio harveyi SF1基因组中扩增获得含硫氧还蛋白还原酶(trxR)基因的1 133bp目的片段,连接至载体pMD19-T Simple。测序结果表明,目的片段含有960 bp trxR基因阅读框,编码为319个氨基酸残基的蛋白质。Blast分析结果显示,硫氧还蛋白还原酶蛋白氨基酸序列与哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌、副溶血弧菌、灿烂弧菌、弗氏弧菌的硫氧还蛋白还原酶蛋白序列的相似性分别为99%、98%、96%、94%、92%。构建表达质粒pET-28a(+)/TrxR后转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析显示,重组蛋白的相对分子质量为34 000。用Ni琼脂糖亲和层析柱分离得到纯化的重组蛋白,将该蛋白以50μg/尾的剂量肌肉注射免疫大菱鲆Scophthalmus maximus,用ELISA法检测免疫1～4周内鱼血清中特异性抗体的效价。结果表明,特异性抗体效价持续升高,第2周则达到1∶128。免疫4周后用哈维氏弧菌SF1对大菱鲆进行人工感染,对照组鱼的死亡率为100%,免疫组鱼的死亡率为25%,相对免疫保护力为75%。试验表明,哈维氏弧菌TrxR蛋白具有较好的免疫原性,可作为潜在的亚单位疫苗用于哈维氏弧菌病的免疫预防。