硒蛋白硫氧还蛋白还原酶2(TXNRD2)在肿瘤组织中的表达及其对生存预后的影响

目的:以硒蛋白硫氧还蛋白还原酶2基因(TXNRD2)为研究靶点,探讨TXNRD2与肿瘤微环境中的免疫细胞及免疫浸润的相关性,旨在揭示TXNRD2对人类恶性肿瘤发生和发展的影响,为肿瘤的免疫治疗和预后预测提供新的靶点。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库,基因型-组织表达(GTEx)数据库,癌症细胞系百科全书(CCLE)和人类蛋白质图集等采集数据,描述33种肿瘤中TXNRD2的表达、预后、免疫微环境、免疫新抗原、肿瘤突变负担(TMB)和微卫星不稳定性(MSI)。采用Kaplan-Meier Plotter分析TXNRD2在肿瘤中的差异生存曲线。采用单因素和多因素COX回归分析皮肤黑色素瘤(SKCM)和脑下级脑胶质瘤(LGG)的总体生存率(OS)的影响因素,采用多因素回归和Nomogram列线图建立SKCM、LGG预测评分模型。结果:TXNRD2在多种肿瘤中普遍高表达,且其可以预测多种肿瘤患者的生存率。同时,TXNRD2表达水平与肿瘤免疫浸润、肿瘤微环境和免疫肿瘤抗原明显相关。单因素COX回归分析显示,TXNRD2、年龄、种族和pTNM-stage是SKCM患者的总生存期的危险因素,TXNRD2、年龄、分级、放射治疗是LGG患者的总生存期的危险因素。除此之外,TXNRD2的会表达影响DNA修饰基因(MMRs)和甲基转移酶的表达。结论:TXNRD2对人类恶性肿瘤的发生和发展有重要影响,可为肿瘤的免疫治疗和预后预测提供新的靶点,从而为癌症的预防诊断和治疗提供参考。

硫氧还蛋白还原酶TrxR2在颅脑损伤大鼠皮质的表达变化

目的探究硫氧还蛋白还原酶2(TrxR2)在颅脑损伤大鼠皮质的动态表达变化。方法 54只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(n=6)和颅脑损伤组(n=48)。颅脑损伤组采用改良的Freeny’s自由落体装置制作颅脑损伤大鼠模型,正常对照组不做处理。伤后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot检测挫伤区周围皮质TrxR2 mRNA和蛋白的表达变化情况。结果 qRT-PCR结果显示:皮质中TrxR2 mRNA颅脑损伤后1 h表达增加,24 h达到高峰,7 d恢复正常;颅脑损伤组伤后1 h^3 d各时间点TrxR2 mRNA表达明显高于正常对照组(均P<0.05)。Western blot检测显示:TrxR2蛋白在颅脑损伤后1 h表达增加,24 h达到高峰,14 d恢复正常;颅脑损伤组1 h^7 d各时间点TrxR2蛋白表达高于正常对照组(均P<0.05)。结论颅脑损伤后TrxR2表达增多,提示TrxR2作为一种急性应激反应蛋白参与颅脑损伤早期抗氧化应激反应。

硫氧还蛋白还原酶-2在非小细胞肺癌中的表达及预后

目的:探讨硫氧还蛋白还原酶-2(thioredoxin reductase-2,TrxR2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对患者预后的影响。方法:免疫组化法检测90例手术后NSCLC癌组织及癌旁正常肺组织中TrxR2的表达,分析TrxR2表达与患者临床病理特征及生存预后的关系。结果:TrxR2在NSCLC组织中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05),TrxR2的表达与患者性别、是否吸烟、肿瘤组织分级、TNM分期无相关性(P>0.05),而与年龄及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。随访90例患者发现TrxR2高表达组的患者预后更差(P<0.05)。结论:TrxR2在NSCLC中高表达,有望成为NSCLC转移及预后判断的重要指标。

硫氧还蛋白还原酶2在恶性肿瘤中的研究进展

硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是广泛分布于生物体内的抗氧化系统家族成员,主要作用是对酶和转录因子以及细胞水平的氧化还原状态的调节,参与细胞的生长、增殖和凋亡,同时也为恶性肿瘤的发生和进展创造了有利条件。TrxR共有三种同工酶,其中TrxR2主要分布于线粒体中,最近研究发现TrxR2在多种恶性肿瘤组织中表达上调,且表达情况远高于癌旁正常组织。另外,TrxR2的表达与多种恶性肿瘤患者的临床病理特征及其生存预后存在相关性。推测TrxR2可能参与恶性肿瘤的发生、发展和转移,本文将对TrxR2在几种恶性肿瘤中的研究进展进行综述,以探究TrxR2是否能成为恶性肿瘤的生物学标志物,并作为肿瘤治疗的新靶点。

五味子乙素预处理对过氧化氢诱导的H9c2细胞焦亡及TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的基于硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路观察五味子乙素对过氧化氢(H 2O 2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤及焦亡的影响,探讨五味子乙素的心肌保护作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,实验设4组:正常组细胞常规孵育,五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h,H 2O 2组细胞加入1000μmol/L的H 2O 2孵育30 min,H 2O 2+五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h后再加入H 2O 2孵育30 min。CCK-8法检测细胞活力,DCFH-DA探针检测细胞中活性氧(ROS)含量,试剂盒检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测细胞中TXNIP、硫氧还蛋白(Trx)、NLRP3、裂解的半胱氨酸蛋白酶-1(Cleaved Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)-N蛋白表达情况,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果与正常组比较,H 2O 2组细胞活力明显下降(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显升高(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H 2O 2组比较,H 2O 2+五味子乙素组的细胞活力明显升高(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显降低(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论五味子乙素可能通过影响TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路,从而减轻H 2O 2诱导的H9c2细胞氧化损伤,抑制心肌细胞焦亡。

T2DM患者外周血氧化应激变化及其与合并NAFLD的关系研究

目的检测2型糖尿病(T2DM)患者外周血氧化应激变化,并分析其与合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的关系。方法选取本单位2016年1月至2017年12月收治的133例T2DM患者,随访5年,统计NAFLD发生率。根据是否发生NAFLD记为发生组(n=98)和未发生组(n=35),比较2组患者一般资料和外周血超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)水平;采用Logistic回归分析探讨T2DM患者并发NAFLD的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平单独与联合对T2DM患者并发NAFLD的预测价值。结果T2DM患者中NAFLD发生率为73.68%(98/133);NAFLD发生患者外周血MDA、TXNIP水平均高于NAFLD未发生患者(P<0.05),SOD、GSH-PX水平低于NAFLD未发生患者(P<0.05);病程>5年,未进行胰岛素降糖,空腹血糖,外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平均是T2DM并发NAFLD的影响因素(OR=3.062、3.725、4.350、0.649、4.328、0.551、4.697,P<0.05);外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平联合预测T2DM并发NAFLD的灵敏度均高于单独预测(P<0.01),AUC均高于单独预测(P<0.05),特异度均与单独预测差异无统计学意义(P>0.05)。结论外周血氧化应激水平升高可增加T2DM并发NAFLD的风险,外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平联合预测并发NAFLD的效能高。

急性脑梗死患者ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白水平变化

目的探讨急性脑梗死患者非对称性二甲基精氨酸(ADMA)、人Sestrin 2蛋白(SESN2)、内皮素-1、硫氧还蛋白水平变化及意义.方法选取86例急性脑梗死患者为急性脑梗死组,根据治疗手段不同分为静脉溶栓组61例,静脉溶栓联合介入治疗组25例,另收集同期健康志愿者40名为健康对照组.采集参与研究者清晨空腹肘静脉血5 mL,酶联免疫吸附法检测血清ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白水平,并行NIHSS评分.使用改良Rankin量表(mRS)评估急性脑梗死患者出院1 a的预后情况,将患者分为预后良好组(mRS≤2分)、预后不良组(mRS>2分).结果急性脑梗死组患者血清ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白水平明显高于健康对照组(P<0.05).治疗后14 d,血清ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白水平均明显低于治疗前(P<0.05);其中静脉溶栓联合介入治疗组患者血清ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白水平明显低于静脉溶栓组(P<0.05).血清ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白水平在不同病情严重程度的患者间比较差异具有统计学意义(P<0.05);随着病情严重程度的增加,急性缺血性脑梗死患者血清ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白水平明显提升.预后不良组患者中合并冠心病、房颤比例,NIHSS评分及血清ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白水平明显高于预后良好组(P<0.05).年龄、男性比例、合并高血压比例、合并糖尿病比例、起病至入院时间在两组间比较差异无统计学意义(P>0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,房颤、NIHSS评分、ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白是急性脑梗死患者预后的独立影响因素.ROC曲线分析显示,ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白对急性脑梗死患者预后均具有较高的预测价值(P<0.05).其中,各项指标联合检测的预测价值最高(AUC=0.962),灵敏度、阳性预测值均明显高于各指标单独检测.结论急性脑梗死患者ADMA、SESN2、内皮素-1、硫氧还蛋白水平高表达,且与病情严重程度密切相关,联合检测可用于急性脑梗死患者的预后评估.

硫氧还蛋白与泌尿系结石疾病的研究进展

泌尿系结石疾病是一种非常常见的外科疾病,影响着全球10%的人口,而且泌尿系结石的发病率和患病率每年都在增加。目前,尿路结石的治疗方法很多,但其机制尚未完全阐明。主流观点认为氧化应激是结石形成及后续发展的关键。硫氧还蛋白系统是广泛存在于各种细胞中的一种抗氧化系统,在控制氧化应激中发挥着重要作用。据此,我们推测硫氧还蛋白可能在泌尿系结石中发挥着生物学作用。本文就Trx在泌尿系结石形成机制中的研究进展作一综述。

高氧对人肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2表达的影响

目的研究高浓度氧暴露对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)表达的影响,探讨Trx-2对高氧肺损伤线粒体的保护作用。方法体外传代培养A549细胞系,待其在37℃、5%CO2培养箱中生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧浓度>90%,CO2浓度为5%;空气组仍置于含5%CO2培养箱中。两组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx-2 mRNA的表达;采用Western blot检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果①与空气组相比,A549细胞高氧暴露24 h Trx-2 mRNA表达显著增强(P<0.05);48 h后Trx-2mRNA呈下降趋势,其表达较空气组减弱,但两者差异无显著性意义(P>0.05)。②与空气组相比,A549细胞高氧暴露后12 h Trx-2蛋白表达水平显著增强(P<0.05),随后逐渐减弱,至48 h显著减弱(P<0.05)。结论高浓度氧暴露诱导A549细胞中Trx-2动态表达的变化,这种变化表明Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用。

硫氧还蛋白-2在氧化损伤的人晶状体上皮细胞中的表达及其意义

目的:探讨硫氧还蛋白-2(thioredoin-2,Trx-2)是否参与白内障的发病过程及其对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响。方法:选取志愿者(因外伤行透明晶状体取出术患者)10例和行超声乳化白内障手术患者(年龄大于60岁)30例的晶状体前囊膜,采用链霉素亲生物素蛋白-过氧化物酶标免疫组织化学法检测志愿者和白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白的表达情况。体外培养SRA01/04细胞,根据不同处理分为空白对照组、20μmol/L H_2O_2组、50μmol/L H_2O_2组、100μmol/L H_2O_2组、阴性对照组(转染对照空p CMV6质粒并用100μmol/L H_2O_2处理)和过表达Trx-2组(转染p CMV6-Trx-2过表达质粒并用100μmol/L H_2O_2处理)。采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法检测各组细胞活力;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡;采用化学比色法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用Western印迹检测各组细胞中Trx-2以及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)的表达。结果:与志愿者相比,白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,20,50,100μmol/L H_2O_2组Trx-2蛋白表达量均明显降低(均P<0.05)。与空白对照组相比,100μmol/L H_2O_2组和阴性对照组细胞存活率降低、凋亡率增加,细胞内SOD和CAT活性降低、GSH含量减少、MDA含量增加,Trx-2和Bcl-2蛋白表达降低,Bax和caspase-3蛋白表达增加(均P<0.05)。与阴性对照组比较,过表达Trx-2组细胞存活率增加、凋亡率降低,SOD和CAT活性增加、GSH含量升高、MDA含量降低,Trx-2和Bcl-2蛋白表达增加,Bax和caspase-3蛋白表达减少(均P<0.05)。结论:Trx-2参与白内障发病中上皮细胞的凋亡,过表达Trx-2能够减少H_2O_2诱导的细胞凋亡,这可能与拮抗H_2O_2诱导的氧化损伤有关。

新诊断2型糖尿病患者血清硫氧还蛋白、硫氧还蛋白相互作用蛋白与颈动脉粥样硬化的相关性

目的探讨新诊断2型糖尿病(T2DM)患者血清硫氧还蛋白(Trx)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)的相关性。方法选取2014年2月-2015年11月于河北省唐山市工人医院内分泌科就诊的新诊断T2DM患者160例作为病例组。根据颈动脉超声检查结果将患者分为T2DM伴CAS组(CAS组,n=65例)和T2DM不伴CAS组(NCAS组,n=95例)。同时从医院健康体检中心选取非糖尿病健康人群140例作为正常组。记录其年龄、性别、体重指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP),收集其临床检验结果,包括空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(Hb A1C)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、同型半胱氨酸(Hcy),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清Trx、TXNIP含量,采用胰岛素还原法检测血清Trx活性。结果与正常组比较,T2DM患者FPG、Hb A1c、HOMA-IR、Trx、TXNIP水平升高,Trx活性下降(均P<0.05);T2DM患者CAS组较NCAS组年龄较大,FPG、Hb A1c、SBP、Trx、TXNIP水平较高,Trx活性下降(均P<0.05);在T2DM患者中,Trx与Hb A1c呈正相关,TXNIP与Hb A1c、HOMA-IR呈正相关,Trx活性与TXNIP呈负相关(均P<0.05);在T2DM患者中,年龄、Hb A1c、Trx、TXNIP及Trx活性为合并CAS的影响因素,其中年龄(OR=1.134,P=0.032)、Hb A1c(OR=1.275,P=0.021)、Trx(OR=1.532,P=0.015)、TXNIP(OR=1.731,P=0.005)为CAS发生的危险因素,而Trx活性(OR=0.507,P=0.002)为CAS发生的保护因素。结论新诊断T2DM患者血清Trx、TXNIP、Trx活性与其CAS相关,提示Trx系统可能参与了CAS的发生及发展。

2型糖尿病患者检测血清硫氧还蛋白相互作用蛋白与唾液酸的临床价值

目的探讨血清硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin interacting protein,TXNIP)诊断与其他血液学指标联合诊断2型糖尿病的价值及临床意义.方法回顾性分析2型糖尿病患者(270例)与同时期健康体检者(73例)血清TXNIP水平(ELISA法)、一般临床资料和相关血液学指标.结果2型糖尿病组血清TXNIP与唾液酸(SA)水平显著高于健康对照组(P<0.01).ROC曲线分析结果显示:血清TXNIP与SA单独诊断2型糖尿病的线下面积AUC分别为0.606(敏感度0.815,特异性0.438,约登指数0.253,P=0.003)与0.646(敏感度0.632,特异性0.616,约登指数0.248,P=0.000).TXNIP联合SA、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、收缩压等联合诊断2型糖尿病的线下面积AUC=0.749(敏感度0.494,特异性0.903,约登指数0.397),差异具有统计学意义(P=0.000).结论血清TXNIP检测可对2型糖尿病诊断提供一定的参考价值,同时为预防和治疗2型糖尿病的分子生物学靶点提供了方向.

人硫氧还蛋白对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2/Bax的影响

目的:探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及人硫氧还蛋白对凋亡及其相关基因的影响。方法:健康清洁级Wistar大鼠84只,随机分为对照组、肺缺血再灌注1h、3h、5h组和人硫氧还蛋白干预1h、3h和5h组。复制肺缺血再灌注损伤模型。采用电子显微镜和原位缺口末端标记法观测肺组织细胞凋亡的变化和凋亡指数,免疫组化技术检测肺组织细胞Bcl-2、Bax及凋亡信号调节激酶1(ASK1)蛋白表达的变化。结果:肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数、ASK1、Bcl-2和Bax蛋白表达均显著高于对照组(均P<0.01),超微结构呈严重损伤性改变。人硫氧还蛋白干预组ASK1、Bax的表达显著下降(均P<0.01),Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax比值显著上调(P<0.05或P<0.01),肺组织细胞凋亡指数也显著低于缺血再灌注组(P<0.01)。肺组织细胞凋亡指数分别与ASK1、Bax蛋白之间均呈显著正相关(分别r=0.775、r=0.814;均P<0.01);与Bcl-2/Bax蛋白呈显著负相关关系(r=-0.275,P<0.05)。结论:Bcl-2/Bax比值下调启动的肺组织细胞凋亡可能参与了肺缺血再灌注损伤的发生。人硫氧还蛋白可能通过下调ASK1的表达,提高Bcl-2/Bax的比值减少肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。

硫氧还蛋白-2和细胞色素C在高氧暴露下A549细胞中的表达和意义

目的观察高体积分数氧(高氧)暴露后人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(Trx-2)和细胞色素C(Cytc)的动态表达,探讨Trx-2和Cytc表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法复苏液氮罐中冻存的人肺腺癌A549细胞系后,加入100 g/L胎牛血清的MEM培养基,置于37℃50 mL/L二氧化碳(CO2)饱和湿度培养箱中培养。然后体外传代培养A549细胞,待其生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组,每组18瓶A549细胞(50 mL培养瓶)。高氧组持续暴露于常压高氧中,氧体积分数为900 mL/L,CO2体积分数为50 mL/L;空气组仍置于50 mL/LCO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h后提取A549细胞总RNA,半定量反转录聚合酶链反应检测Trx-2和Cytc mRNA水平;蛋白印迹法检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果1.与空气组比较,高氧组24 h Trx-2 mRNA的表达显著增强(P<0.05);48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,二组比较无显著性差异(P>0.05)。2.与空气组比较,高氧组12 h Cytc mRNA的表达显著增强(P<0.05);24 h Cytc mRNA的表达减弱,二组比较无显著性差异(P>0.05);48 h显著减弱(P<0.05)。3.与空气组比较,高氧组12 h Trx-2蛋白的表达显著增强(P<0.05);24 h仍增强,二组比较无显著差异(P>0.05);48 h显著减弱(P<0.05)。结论高氧暴露可诱导A549细胞中Trx-2和Cytc异常表达,提示Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用,Cytc在高氧肺损伤细胞凋亡发生发展中起重要作用。

低硒大鼠心肌线粒体硫氧还蛋白2的动态表达和心肌的损伤情况

目的:检测低硒大鼠心肌线粒体中硫氧还蛋白2(thioredoxin 2,Trx2)的蛋白表达水平,观察在体心功能及心肌细胞凋亡情况,分析Trx2与心功能及心肌细胞凋亡指数之间的相关性,探讨Trx2在心肌损伤中的作用。方法:构建低硒大鼠模型,以常硒组为对照,分别于喂养20周、30周和40周时颈动脉插管测其心功能;提取心肌线粒体,Western blotting法检测线粒体中Trx2的表达水平;免疫组织化学技术(SP法)对Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)进行原位染色,衡量心肌细胞凋亡情况。结果:(1)各时点对照组大鼠心肌线粒体Trx2的表达无明显差异,低硒组与相应时点的对照组相比Trx2表达均降低,且随低硒喂养时间延长降低更为明显,差异显著(P<0.05);(2)与对照组相比,低硒组大鼠心脏收缩及舒张功能均降低,以收缩功能指标——左室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)和左心室内压最大上升速率(maximum rate of left ventricular pressure rise,+dp/dtmax)降低更为明显(P<0.05);免疫组化染色显示,随着喂养时间的延长,低硒组大鼠心肌细胞凋亡加重;(3)相关性分析显示,Trx2与LVSP和+dp/dtmax呈正相关,与心肌细胞凋亡指数呈负相关(P<0.01)。结论:低硒可通过影响大鼠心肌线粒体中Trx2蛋白的表达,参与心脏功能减退和心肌细胞凋亡;线粒体Trx2对心肌细胞具有保护作用。

外源性硫氧还蛋白对高糖、高脂刺激引起的H9c2细胞损伤和凋亡的影响

目的 观察给予外源性硫氧还蛋白（Trx）后对高糖、高脂刺激引起的心肌细胞损伤和凋亡的影响,并分析其可能机制.方法 将处于对数生长期的H9c2心肌细胞随机分为三组：正常对照组（普通DMEM培养基葡萄糖5 mmol/L加入20 mmol/L甘露醇）、高糖高脂组（DMEM高糖25 mmol/L培养基加入高脂600 μmol/L软脂酸）和Trx干预组（在高糖高脂组的培养基中加入3 ＊9滋mol/L Trx）.培养48 h后,分别收集培养基上清与细胞,进行指标检测.结果 与正常对照组比较,高糖高脂组乳酸脱氢酶及caspase-3活性均显著升高（P＜0.01）.给予Trx干预后,与高糖高脂组比较,Trx干预组乳酸脱氢酶及caspase-3活性均显著下降（P＜0.01）.与正常组比较,高糖高脂组Trx的表达量未见明显改变（P＞0.05）,但是Trx活性显著下降（P＜0.01）.结论 高糖、高脂刺激可以引起H9c2心肌细胞损伤和凋亡,其机制与内源性Trx活性的降低有关.外源性补充Trx可明显提高Trx的活性,减轻心肌细胞的损伤和凋亡.

2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者血糖、血脂和硫氧还蛋白互作蛋白水平研究及相关性分析

目的研究2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者血糖、血脂、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)水平,并探讨其相关性。方法 102例非酒精性脂肪肝患者分为血糖正常组(空腹血糖<6.1 mmol/L,餐后2 h血糖<7.8 mmol/L)、糖耐量异常组(空腹血糖6.1~6.9 mmol/L,或餐后2 h血糖7.8~11.0 mmol/L)、2型糖尿病组(空腹血糖≥7.0 mmol/L,餐后2 h血糖≥11.1 mmol/L)。观察3组患者血糖(空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白)、空腹胰岛素、血脂[低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)]、TXNIP水平,并对其进行相关性分析。结果糖耐量异常组和2型糖尿病组空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、空腹胰岛素水平均高于血糖正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。2型糖尿病组空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白水平均高于糖耐量异常组,差异有统计学意义(P<0.05),2组空腹胰岛素水平比较,差异无统计学意义(P<0.05)。2型糖尿病组LDL-C、TG、TC水平高于糖耐量异常组和血糖正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。糖耐量异常组TG、TC水平高于血糖正常组,差异有统计学意义(P<0.05),糖耐量异常组LDL-C水平高于血糖正常组,但差异无统计学意义(P>0.05)。3组HDL-C水平比较,差异无统计学意义(0P>0.05)。糖耐量异常组、2型糖尿病组TXNIP水平高于血糖正常组,2型糖尿病组TXNIP水平高于糖耐量异常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析表明,TXNIP水平与空腹血糖、糖化血红蛋白、餐后2 h血糖、空腹胰岛素、LDL-C、TG、TC水平呈正相关(r值分别为0.818、0.875、0.202、0.689、0.849、0.674,P<0.05)。以TXNIP为应变量,空腹血糖、糖化血红蛋白、餐后2 h血糖、空腹胰岛素、LDL-C、HDL-C、TG、TC为自变量进行多重线性逐步回归分析,结果显示,在排除多种因素相互影响后,TXNIP与餐后2 h血糖、LDL-C、空腹血糖呈正相关(P<0.05)。结论合并非酒精性脂肪肝糖耐量异常和2型糖尿病患者均有明显的血糖升高和血脂代谢紊乱,TXNIP与血糖、LDL-C有相关性,可能参与了2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的发病过程。

SiRNA抑制高氧暴露下A549细胞硫氧还蛋白-2表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系

目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞。将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92%O2,5%CO2)中;空气组仍置于5%CO2培养箱中。4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA。采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C(CytC)mRNA的表达;Western-blot检测Trx-2蛋白表达;流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响。结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51%)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P<0.05)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P<0.05)。干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P<0.05)。结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。

2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者炎性因子、氧化应激、硫氧还蛋白互作蛋白水平研究及相关性分析

目的研究2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者炎性因子、氧化应激、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)水平,并探讨其相关性。方法 102例非酒精性脂肪肝患者分为血糖正常组(空腹血糖<6.1 mmol/L,餐后2 h血糖<7.8 mmol/L)、糖耐量异常组(空腹血糖6.1~6.9 mmol/L,或餐后2 h血糖7.8~11.0 mmol/L)、2型糖尿病组(空腹血糖≥7.0 mmol/L,餐后2 h血糖≥11.1 mmol/L)。观察3组患者炎性因子[C-反应蛋白(CRP)、白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脂联素]、氧化应激[还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶T-SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)]、TXNIP水平,并对其进行相关性分析。结果糖耐量异常组和2型糖尿病组CRP、IL-6、TNF-α水平均高于血糖正常组,脂联素水平低于血糖正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2型糖尿病组CRP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均高于血糖正常组和糖耐量异常组,脂联素水平低于血糖正常组和糖耐量异常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。糖耐量异常组IL-1β水平与血糖正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖耐量异常组、2型糖尿病组GSH水平高于血糖正常组,T-SOD、GSH-Px、CAT水平低于血糖正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2型糖尿病组T-SOD、GSH-Px、CAT水平低于糖耐量异常组,差异均有统计学意义(P<0.05),2组GSH水平比较,差异无统计学意义(P<0.05)。糖耐量异常组、2型糖尿病组TXNIP水平高于血糖正常组,2型糖尿病组TXNIP水平高于糖耐量异常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析表明,TXNIP水平与CRP、IL-6、TNF-α、GSH水平呈正相关,与脂联素、T-SOD、GSH-Px和CAT呈负相关(P<0.05)。以TXNIP为应变量,CRP、IL-6、TNF-α、GSH、脂联素、T-SOD、GSH-Px和CAT为自变量进行多重线性逐步回归分析,结果显示,在排除多种因素相互影响后,TXNIP与CRP、IL-6和TNF-α呈正相关(P<0.05)。结论合并非酒精性脂肪肝糖耐量异常和2型糖尿病患者均有明显的炎性反应,且有氧化应激损伤,TXNIP可能参与了2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的发病过程。

硫氧还蛋白相互作用蛋白在2型糖尿病患者血清中的变化及临床意义

目的本研究拟分析血清硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)在2型糖尿病(T2DM)患者血清中的变化规律。方法收集2013年11月至2014年7月在解放军总医院内分泌科住院、明确诊断为2型糖尿病患者(270例)与同时期健康体检者(73例)血清,分别检测血清TXNIP(ELISA法)、血清葡萄糖(Glu)、糖化血红蛋白(HbA1c)等指标。结果①2型糖尿病慢性并发症患病率为视网膜病变20.5%、糖尿病肾病20.1%、神经病变34.3%、高血压50.4%、冠心病12.6%。②血清TXNIP水平在年龄与并发症分组中差异具有统计学意义(P<0.05)。在年龄分组中,年龄<45岁组血清TXNIP水平显著高于年龄45~60岁组(P=0.026),年龄>60岁组血清TXNIP水平显著高于年龄45~60岁组(P=0.021),其余无统计学差异。在并发症分组中,D组TXNIP水平显著高于A组(P=0.025),C组TXNIP水平显著高于E组(P=0.025),D组TXNIP水平显著高于E组(P=0.002),D组TXNIP水平显著高于F组(P=0.045),G组TXNIP水平显著高于E组(P=0.028)。③血清TXNIP水平随Glu与HbA1c分层变化趋势呈波动状态。④相关性分析显示,血清TXNIP与身体质量指数(BMI)呈正相关(r=0.160,P=0.009),与血小板(PLT)呈负相关(r=-0.125,P=0.041)。结论血清TXNIP水平改变与2型糖尿病慢性并发症密切相关,在2型糖尿病及其血管并发症中起着重要的作用。控制血清TXNIP水平可能有助于控制2型糖尿病患者血管并发症的发生与发展。