妊娠期糖尿病患者血清微小RNA-875-5p与血清硫氧还蛋白还原酶1对母婴结局的预测价值

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)、微小RNA-875-5p(miR-875-5p)对母婴结局的预测价值。方法选择2019年4月~2020年4月本院收治的GDM患者124例作为GDM组,另选本院同期体检的健康妊娠女性124例作为对照组。根据母体结局与围生儿结局将GDM组患者分别分为母体结局不良组(46例)、母体结局良好组(78例)及围生儿结局不良组(49例)、围生儿结局良好组(75例)。收集所有受试者一般临床资料,血清中TXNRD1、miR-875-5p相对表达水平、母体及围生儿不良结局并分组进行比较。采用多因素logistic回归分析评估GDM患者母婴不良结局的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-875-5p和TXNRD1对母婴不良结局的预测价值。结果GDM组患者血清miR-875-5p相对表达水平显著低于对照组,血清TXNRD1相对表达水平显著高于对照组(P<0.05);GDM组母体不良结局中羊水过多、胎膜早破、早产、剖宫产、产后出血比例及母体不良结局总发生率均显著高于对照组,围生儿不良结局中巨大儿、胎儿窘迫、新生儿窒息、新生儿低血糖、高胆红素血症比率及围生儿不良结局总发生率均显著高于对照组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,血清miR-875-5p均是GDM患者母体、围生儿不良结局的保护因素,年龄、孕前BMI、不良孕产史、血糖控制不良及血清TXNRD1均是其危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-875-5p、TXNRD1对母体、围生儿不良结局联合预测的AUC均大于二者单独预测。结论血清miR-875-5p、TXNRD1在GDM患者中分别为异常低、高表达,并均对母婴结局具有一定预测价值,且二者联合预测价值更高。

硫氧还蛋白1、活化T细胞趋化因子在脑梗死病人血清中的水平及与认知功能、预后的关系

目的探究硫氧还蛋白1(Trx1)、活化T细胞趋化因子(RANTES)在脑梗死病人血清中的水平及与认知功能、预后的关系。方法选取2020年3月至2022年6月在无锡市人民医院诊治的168例脑梗死病人作为观察组,及同期165例健康体检志愿者作为对照组进行研究。参照蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分对所有病人的认知能力进行评估,分为认知功能障碍组112例,认知功能正常组56例;根据改良Rankin量表(MRS)评分分为预后良好组90例,预后不良组78例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清Trx1、RANTES水平;Spearman法分析脑梗死病人血清中Trx1、RANTES水平与MoCA评分的相关性;对影响脑梗死病人发生认知功能障碍及预后的因素进行logistic回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清Trx1、RANTES水平对脑梗死病人发生认知功能障碍的诊断价值。结果与对照组相比,观察组病人血清Trx1水平显著降低[(6.78±1.62)μg/L比(11.05±1.89)μg/L,P<0.05],RANTES水平明显升高[(35.12±4.84)ng/L比(23.51±3.28)ng/L,P<0.05];认知功能障碍组脑梗死病人血清Trx1水平明显低于认知功能正常组[(6.02±1.59)μg/L比(8.30±1.68)μg/L,P<0.05],RANTES水平显著高于认知功能正常组[(38.57±5.25)ng/L比(28.22±4.02)ng/L,P<0.05];与预后良好组对比,预后不良组脑梗死病人血清Trx1水平明显降低[(5.42±1.55)μg/L比(7.96±1.68)μg/L,P<0.05],血清RANTES水平显著升高[(38.58±5.29)ng/L比(32.12±4.45)ng/L,P<0.05];脑梗死病人血清Trx1水平与MoCA评分呈正相关(rs=0.40,P<0.05),RANTES水平与MoCA评分呈负相关(rs=−0.56,P<0.05);logistic回归分析显示,受教育程度、Trx1是影响脑梗死病人发生认知功能障碍及预后的保护因素(P<0.05),脑梗死区域、RANTES是影响脑梗死病人发生认知功能障碍及预后的危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清Trx1、RANTES、二者联合诊断脑梗死病人发生认知功能障碍的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.82、0.94、0.97,二者联合诊断均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Trx1)=4.00,P<0.001;Z_(二者联合-RANTES)=2.03,P=0.021)。结论脑梗死病人血清Trx1水平降低,RANTES水平升高,二者均与认知功能及预后有密切关系。

硫氧还蛋白-1(Trx1)氧化还原状态的检测

硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx1)是一种广泛存在于生物体内的氧化还原调节蛋白,其氧化还原状态的变化是细胞内发挥氧化还原调控作用的重要过程.本文建立了Trx1氧化还原状态的检测方法—氧化还原蛋白免疫印迹法(redox Western blot),即通过碘乙酸(IAA)标记Trx1,根据蛋白所带负电荷的不同,达到分离蛋白氧化与还原状态的目的,并根据能斯特方程计算出相应的氧化还原电势.本方法是在蛋白免疫印迹(Western blot)的基础上建立的,具有低成本、易操作的特点.实验中分别采用H2O2和DTT处理样本,利用此方法检测了细胞裂解液中、细胞内及过表达Trx1氧化还原电势的变化;并检测了HEK293细胞不同生长时期Trx1的氧化还原状态.

精胺氧化酶靶向调控硫氧还蛋白还原酶1促进结肠癌恶性进展

目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)靶向调控硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TR1)对结肠癌恶性进展的影响。方法收集2018年9月至2019年6月就诊于南京市第一医院的30例结肠癌患者的结肠癌组织及其癌旁组织。采用免疫组织化学染色检测组织中的SMOX表达。采用Western blot实验检测结肠癌细胞株(HCT116、SW480、DLD-1、SW620、Caco-2、HCT-15、T84和LS123)和正常结肠细胞株NCM460的SMOX表达。利用基因表达谱互作分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)网站查询SMOX在结肠癌组织与癌旁组织中的表达情况和SMOX表达水平与患者总生存的关系。采用Western blot实验检测上述细胞和组织中代谢产物亚精胺合成酶的水平。利用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)结合流式细胞术和组织免疫荧光实验分别检测结肠细胞和组织中代谢副产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。选取SMOX表达水平最高的结肠癌细胞株HCT116和SW480为实验对象,构建慢病毒载体,用PLKO.1-puro-shCtrl、PLKO.1-puro-shSMOX、PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1和PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1-TR1分别转染细胞,分别为shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组。Western blot实验检测HCT116和SW480细胞shCtrl组和shSMOX组SMOX与TR1的表达情况,以及HCT116细胞shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的TR1表达水平。利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。PI/异硫氰酸荧光素-膜连蛋白(PI/fluorescein isothiocyanate-Annexin V,PI/FITC-Annexin V)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡/坏死情况。Transwell体外侵袭实验分析细胞侵袭能力。shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的HCT116细胞稀释至浓度为1×107个/mL的细胞悬液分别向裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 mL细胞悬液,建立裸鼠结肠癌移植瘤模型。4周后处死裸鼠,分离组织,剥取肿瘤称重。运用免疫组织化学染色检测裸鼠结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数。结果SMOX在8种结肠癌细胞株和结肠癌组织中的表达水平均高于正常结肠细胞株和癌旁组织,且与不良预后有关(均P<0.05)。与正常结肠细胞和癌旁组织比较,8种结肠癌细胞和结肠癌组织中的代谢产物亚精胺合成酶和ROS水平随SMOX的高表达同步升高(均P<0.05)。与shCtrl组比较,shSMOX组G_(0)/G_(1)期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目增加,细胞增殖活性降低,侵袭数量减少,SMOX和TR1表达水平降低(均P<0.05)。与shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组比较,shSMOX+TR1组TR1表达水平升高,S期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目减少,细胞增殖活性升高(均P<0.05)。裸鼠结肠癌移植瘤模型显示,注射后14 d,与shCtrl组比较,shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组肿瘤体积和重量均降低,结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数减少,而shSMOX+TR1组肿瘤体积、重量和结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数则较shSMOX+pcDNA3.1组增加(均P<0.05)。结论SMOX在结肠癌细胞和组织中表达上调,可能通过靶向提高TR1的表达促进细胞周期运转,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长,进而促进结肠癌恶性进展。

膜联蛋白A1、硫氧还蛋白1及前白蛋白对急性心衰患者的检测意义及对短期预后的预测价值分析

目的探讨膜联蛋白A1、硫氧还蛋白1(Trx-1)及前白蛋白(PAB)对急性心力衰竭(AHF)患者的检测意义及对短期预后的预测价值。方法回顾性选取2020年1月至2021年12月新疆生产建设兵团医院收治的120例AHF患者作为观察组,另选取同期来本院体检的120名健康志愿者作为对照组。检测两组受检者膜联蛋白A1、Trx-1、PAB表达水平,并建立受试者操作特征(ROC)曲线分析膜联蛋白A1、Trx-1、PAB对AHF的诊断价值。对比不同心功能分级AHF患者膜联蛋白A1、Trx-1、PAB表达水平;应用Spearman相关分析法分析膜联蛋白A1、Trx-1、PAB与AHF严重程度的相关性。随后对所有患者出院后进行90 d随访,将90 d内由于AHF发作再入院或死亡的40例患者分为预后不良组,其余80例患者分为预后良好组,采用多因素Logistics回归模型分析影响AHF患者预后的因素。结果观察组的膜联蛋白A1、Trx-1水平分别为(2.26±0.39)μg/L、(9.93±2.64)ng/mL,均明显高于对照组[(1.23±0.28)μg/L、(5.64±1.14)ng/mL],观察组PAB为(158.78±35.11)mg/L,明显低于对照组[(312.64±43.67)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。膜联蛋白A1、Trx-1、PAB联合检测对AHF的诊断敏感度为92.68%、特异度为83.79%,曲线下面积值为0.887,高于单一指标诊断。不同Killip心功能分级患者膜联蛋白A1、Trx-1、PAB表达水平差异显著,Ⅳ级患者膜联蛋白A1、Trx-1水平分别为(2.83±0.33)μg/L、(12.57±2.16)ng/mL,明显高于Ⅲ级、Ⅱ级、Ⅰ级,Ⅳ级患者PAB为(131.25±31.79)mg/L,明显低于Ⅲ级、Ⅱ级、Ⅰ级患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析显示:膜联蛋白A1、Trx-1与AHF严重程度呈正相关(r=0.586,0.579,P<0.05),而PAB与AHF严重程度呈负相关(r=-0.685,P<0.05)。预后良好组与预后不良组患者年龄、陈旧性心肌梗死、膜联蛋白A1、Trx-1、PAB水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistics回归模型结果显示,年龄、陈旧性心肌梗死、膜联蛋白A1、Trx-1、PAB为影响AHF短期预后的独立危险因素(P<0.05)。结论AHF患者膜联蛋白A1、Trx-1呈现高表达,PAB呈现低表达状态,通过检测膜联蛋白A1、Trx-1、PAB可为AHF的诊断及严重程度判断提供参考,同时可用于患者短期预后预测。

冠状动脉CT成像联合血清多聚ADP核糖聚合酶1及硫氧还蛋白相互作用蛋白对冠心病的诊断价值

目的分析冠状动脉CT成像联合血清多聚ADP核糖聚合酶1(PARP1)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对冠心病的诊断价值。方法选取2020年1月至2022年1月芜湖市第二人民医院确诊的冠心病患者103例为冠心病组,选取同期体检人群41例作为对照组。通过酶联免疫吸附测定法检测两组血清PARP1、TXNIP水平,分析冠状动脉CT成像、血清PARP1、血清TXNIP以及联合检测对冠心病的诊断价值。结果与对照组相比,冠心病组冠状动脉CT成像检测冠心病的阳性比例高,差异有统计学意义(χ^(2)=75.246,P<0.01)。冠心病组患者血清PARP1水平、TXNIP水平相比对照组较高,差异有统计学意义(t=22.938、14.190,P<0.01)。冠状动脉CT成像、血清PARP1、TXNIP水平以及三者联合检测诊断冠心病的曲线下面积为0.873、0.871、0.849、0.933。冠状动脉CT成像、PARP1、TXNIP以及联合检测与临床诊断的具有一致性(Kappa=0.720、0.720、0.568、0.669,P<0.01)。结论冠状动脉CT成像与血清PARP1、TXNIP水平三者联合对冠心病具有较高的诊断价值。

Gly33的缺失和突变对hTrx-1抗氧化活性的影响

为探讨人硫氧还蛋白hTrx-1活性位点保守序列中Gly33残基在还原氧化性蛋白过程中是否必不可少,通过合成突变基因对hTrx-1的Gly33残基进行缺失和替换(G→A)。合成的突变基因随后在原核细胞中表达并进一步纯化及检测抗氧化活性,结果表明,无论是Gly33残基的缺失还是突变为Ala,突变的hTrx-1均能在原核细胞中高效表达,暗示2种突变型hTrx-1均能形成“Trx折叠”结构。抗氧化活性检测表明Gly33残基缺失的情况下,其抗氧化能力有所下降,当Gly33突变为Ala时,其抗氧化能力大幅下降到接近失去抗氧化能力。推测Trx-1活性中心保守氨基酸残基的改变影响了活性中心区域的几何构象,从而导致底物蛋白难以从空间上靠近。参与形成二硫键巯基的含量检测结果表明,突变型hTrx-1中形成二硫键巯基的含量明显低于野生型hTrx-1中形成二硫键巯基的含量,推测突变型hTrx-1的Cys32与Cys35形成二硫键的能力受到影响。

谷氧还蛋白1和硫氧还蛋白1基因在云南乌金猪不同组织中的表达特点及L-组氨酸对其在氧化应激细胞中表达的影响

本试验旨在研究抗氧化基因谷氧还蛋白1(GRX1)、硫氧还蛋白1(TRX1)在云南乌金猪脑垂体、下丘脑、甲状腺、胸腺、胰腺、生殖腺、肝脏、皮肤、十二指肠、空肠、回肠11种组织中的差异表达,探讨L-组氨酸对乌金猪氧化应激细胞中GRX1、TRX1基因表达的调节作用。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测乌金猪组织中GRX1、TRX1基因表达;以过氧化氢(H2O2)为氧化应激源建立氧化应激细胞模型,探讨L-组氨酸对GRX1、TRX1基因表达的调节作用。结果表明:1)GRX1、TRX1基因在乌金猪被检测组织中均有表达,肝脏表达量最高,其次是皮肤、空肠,其他组织中的表达量相对较低;2)乌金猪组织中TRX1基因表达量明显高于G RX1基因表达量;3)细胞培养结果表明,受到H2O2刺激时,氧化应激细胞中GRX1、TRX1基因产生过表达,L-组氨酸对氧化应激细胞或非应激细胞中GRX1、TRX1基因表达具有调节作用,其适宜浓度约为280μg/mL。乌金猪GRX1、TRX1基因表达具有明显组织特异性,H2O2可诱导氧化应激细胞中GRX1、TRX1基因产生过表达,添加适宜浓度的L-组氨酸可以调节氧化应激细胞或非应激细胞中GRX1、TRX1基因表达。结果提示,通过营养途径可诱导乌金猪体内G RX1、TRX1基因的表达,这是缓解机体氧化应激损伤和增强抗氧化能力的一种有效方式。

胸腺素α_1-硫氧还蛋白融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究

胸腺素α1(thymosinalpha 1,Tα1)作为一种免疫增强剂 ,临床用途广泛。为了大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子用人工方法合成Tα1基因 ,克隆于 pUC19的EcoRI和PstI位点 ,经测序证明序列正确后 ,串联为 4串体 (Tα1④ ) ,经再次测序确认后克隆入 pThioHisA的EcoRI和PstI位点 ,转化大肠杆菌TOP10菌种 ,酶切鉴定证明正确后 ,经 1mmol/LIPTG诱导 4h ,获得硫氧还蛋白与Tα1④的融合表达 ,并经Westernblot分析证实。用离子交换柱层析可纯化出硫氧还蛋白与Tα1④的融合蛋白 ,利用3H -TdR掺入法证实 ,该融合蛋白具有刺激小鼠脾淋巴细胞的活性。

日粮锌水平对生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1基因表达的影响

本文旨在探讨日粮不同锌添加水平和锌源对2～3月龄生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用2月龄新西兰肉兔70只,随机分为7个处理,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨酸锌形式添加40、80和120mg/kg锌,预试期7d,正试期23d。结果表明:日粮锌添加水平对生长肉兔平均日增重(ADG)和料重比(F/G)无显著性影响(P>0.05),对平均日采食量(ADI)影响显著(P<0.05);不同锌水平对血清铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性影响显著(P<0.05),对肝脏CuZn-SOD和GSH-Px活性影响极显著(P<0.01);随日粮锌水平的增加,肝脏、肾脏MT-1mRNA相对表达丰度呈先升高后降低趋势(P<0.01),80mg/kg添加水平时2种锌源MT-1mRNA相对表达丰度均达到最高。MT-1mRNA相对表达丰度可以作为评价动物机体锌营养状况的敏感指标。

拟南芥硫氧还蛋白M1型基因(AtTRX m1)与环境逆境之间的关系

硫氧还蛋白家族是约12 kD的小分子蛋白质,含有高度保守的活性反应位点WCG/PPC,催化硫醇—二硫键相互交换,调节细胞内的氧化还原作用。在本研究中,通过RT-PCR法获得目的基因拟南芥硫氧还蛋白M1型基因 (AtTRX m1, GenBank Accession No. At1g03680)。通过Northern杂交分析拟南芥悬浮细胞系在 100 mmol/L NaCl、10mmol/L NaHCO3、50μmol/L ABA、10mmol/L H2O2 等逆境处理下mRNA表达水平的变化和硫氧还蛋白 M1 型转基因植株对NaCl、NaHCO3盐及ABA逆境的抗性分析,表明硫氧还蛋白M1型基因与生物环境胁迫有一定的相关性,尤其是氧化胁迫,能够增强植物对逆境的耐受力。从而为进一步研究硫氧还蛋白基因家族与逆境之间的相关作用奠定了基础。

日本血吸虫硫氧还蛋白-1的克隆、表达和功能分析

目的克隆、表达日本血吸虫硫氧还蛋白-1(SjTrx-1)编码基因,测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性,分析SjTrx-1基因在血吸虫不同发育阶段的转录本差异,观察其在日本血吸虫成虫体内的组织分布情况。方法从日本血吸虫cDNA文库中挑选SjTrx-1的基因序列,应用PCR技术对目的片段进行体外扩增,并克隆入原核表达载体pET28a,重组质粒转化E.coli BL21(DE3)细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,二硫苏糖醇(DTT)/胰岛素还原法测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性。纯化的重组SjTrx-1蛋白免疫新西兰白兔,以制备的免疫兔血清作为抗体,应用免疫荧光定位技术检测SjTrx-1在日本血吸虫成虫体内的分布情况。制备日本血吸虫各虫期的总RNA样品,利用RT-PCR方法扩增目的片段,分析SjTrx-1基因在各发育阶段的转录本丰度。结果构建了重组表达载体SjTrx-1/pET28a,在E.coli中实现了重组SjTrx-1蛋白的可溶表达,其相对分子质量(Mr)约为38 000,与预测的融合蛋白大小相符。经组氨酸标签亲和层析法获得纯化重组蛋白SjTrx-1,并测定了其体外的酶催化活性。虫期转录特异性分析显示,该基因在各个虫期均存在转录,其中胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高,毛蚴和尾蚴中含量相对较低。荧光定位结果显示,SjTrx-1蛋白在虫体内分布广泛,且无组织特异性。结论 SjTrx-1在日本血吸虫虫体内分布广泛,在胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高。

硫氧还蛋白-1在急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织中的表达及褪黑素干预的影响

目的:探讨内源性硫氧还蛋白-1(Trx-1)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠模型肺组织中的表达;观察褪黑素对ANP胰和肺脏的保护作用和对肺组织Trx-1表达的影响.方法:将72只SD大鼠随机分成对照组(C组,n=24)、急性胰腺炎组(A组,n=24)、褪黑素前干预组(M组,n=24).A组用6%的左旋精氨酸(L-Arginine,L-Arg)腹腔内注射,每次25mL/kg体质量,共3次,注射间隔1h,诱导ANP模型,在首次注射L-Arg前30min腹腔注射生理盐水20mL/kg体质量1次;C组同法注射相当于A组各次注射用量的等容积生理盐水;M组在诱导胰腺炎前30min腹腔内注射0.25%褪黑素(20mL/kg体质量)干预.在注射完L-Arg后的6、12、24h三个时点分批处死大鼠,应用免疫组织化学技术检测各组ANP肺组织Trx-1的表达,并观察各组对应各时点胰腺、肺组织病理学和肺免疫组织化学的改变;抽取动脉血测定Trx-1和淀粉酶.结果:A组大鼠胰腺和肺组织病理损伤在6、12、24h时点比C组明显加重(均P<0.01);M组胰腺和肺组织病理损伤在6、12、24h时点较A组明显减轻(P<0.01或0.05).A组、M组肺组织表达Trx-1量在6、12、24h时点较C组显著升高(均P<0.01).在24h,A组血清淀粉酶较C组显著升高(4598U/L±2274U/Lvs2033U/L±863U/L,P<0.01);M组较A组低(3990U/L±1146U/Lvs4598U/L±2274U/L,P<0.05).A组大鼠血清Trx-1含量在6、12h时点显著降低,24h时点显著升高,呈前低后高趋势;与A组比较,M组血清Trx-1在6、12h时点显著升高,24h时点显著降低,量的峰值前移.结论:Trx-1在ANP肺损伤组织中的过度表达与急性胰腺炎相关性肺损伤关系密切.褪黑素影响Trx-1表达,并可能在一定程度上减轻ANP的胰、肺组织损伤.

硫氧还蛋白-1在急性坏死性胰腺炎并急性胃黏膜损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白-1(TRX-1)在实验性急性坏死性胰腺炎(ANP)并急性胃黏膜损伤发病机制中的作用以及抗氧化剂褪黑素对其的影响。方法72只大鼠随机分为对照组(C组,n=24)、ANP组(A组,n=24)和褪黑素干预组(M组,n=24)。A组分3次腹腔内注射6%L-精氨酸(L-Arg)1.5 g/kg建立ANP模型;C组同法注射等量生理盐水;M组于首次注射L-Arg前0.5 h腹腔内注射1%褪黑素50μg/kg。各实验组大鼠于末次腹腔内注射后6 h、12 h和24 h分批处死。光镜下观察胰腺和胃组织并进行病理学评分,采用免疫组化检测TRX-1在胃黏膜的表达,并检测胃黏膜中MDA、MPO的含量。结果A组各时点胃黏膜TRX-1的染色积分及MDA、MPO的含量明显高于C组(P均<0.05);M组各时点胃黏膜中TRX-1的染色积分及MDA、MPO的含量明显低于A组(P均<0.05),胰腺和胃组织病理改变较A组明显减轻(P均<0.05)。结论内源性的TRX-1可能是胃黏膜组织抵御氧化应激损伤的重要因子之一,TRX-1的表达量可能与组织氧化应激损伤的严重程度有关。外源性的褪黑素在ANP时可能通过其抗氧化作用,减轻胃黏膜氧化应激损伤的程度,对胃黏膜有一定的保护作用。

硫氧还蛋白结合蛋白-2／维生素D3上调蛋白1在哮喘病人外周血嗜酸性粒细胞的表达(英文)

目的探讨硫氧还蛋白结合蛋白／维生素D3上调蛋白1(VDUP1)在不同时期哮喘病人嗜酸细胞中的表达及其与哮喘临床症状的关系。方法抽取正常自愿受试者14例,急性发病未经任何治疗的16例轻到中度哮喘病人和通过吸入糖皮质激素而处于哮喘缓解期的35例病人的外周静脉血15 ml进行外周血嗜酸细胞计数和诱导痰嗜酸细胞计数,随后行肺功能检查测定FEV1．0％和PEF％。分离纯化静脉血嗜酸细胞,提取总RNA。RT-PCR同时扩增特异性片段 VDUP1和内参β-Actin。取10μl反应物进行1％琼脂糖凝胶电泳,用Gel-Pro软件分析凝胶成像,测定VDUP1和β-Actin灰度值,求VDUP1／β-Actin比值,并比较不同组别之间VDUP1表达的变化,分析VDUP1／β-Actin比值与诱导痰嗜酸细胞、FEV1．0％、PEF％的相关性。结果急性期未经治疗的哮喘病人嗜酸细胞(0．314±0．242)与正常人比较(0．532± 0．279)显著降低,而经吸入糖皮质激素处于缓解期哮喘病人嗜酸细胞VDUP1／β-Actin比值(0．612±0．381)与正常对照组无显著差异。在急性发作未经治疗哮喘组嗜酸细胞VDUP1表达与FEV1．0％(r=0．587,P=0．046)和PEF％(r=0．563． P=0．033)呈正相关,而与诱导痰嗜酸细胞计数呈负相关关系(r=0．436,P=0．049)。结论嗜酸细胞VDUP1的表达与哮喘嗜酸细胞活化相关,并影响哮喘病人的临床症状。

日粮锌对肉兔生产性能、机体抗氧化酶和金属硫蛋白-1表达的影响

探讨了日粮添中加不同水平和来源的锌对断奶～2月龄生长肉兔生产性能、血清肝抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用140只35日龄断奶新西兰肉兔,随机分为7个处理,每处理20只兔,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨酸锌的形式添加40、80和120mg/kg锌,预试期7d,正试期18d。结果表明:日粮中添加不同蛋氨酸锌水平对生长肉兔平均日增质量(ADG)影响显著,以80mg/kg蛋氨酸锌组最高;日粮中锌源及添加水平对平均日采食量(ADI)和料重比(F/G)影响不显著;日粮锌源及添加水平对血清铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)活性影响极显著,对血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量影响显著;极显著影响肝GSH-Px活性,显著影响肝CuZn-SOD活性和MDA含量;日粮锌源及添加水平极显著影响肝和肾MT-1mRNA相对表达丰度,蛋氨酸锌组MT-1mRNA相对表达丰度在日粮锌添加水平为80mg/kg时达到最大值。这说明,日粮中添加不同水平和来源的锌对早期生长肉兔的增质量、血清肝抗氧化酶活性和MT-1基因表达有明显的影响,适宜的锌添加水平有利于肉兔生产性能的发挥。

表达硫氧还蛋白1的幽门螺杆菌对人胃上皮细胞株GES-1生长的影响

背景:幽门螺杆菌(Hp)感染在胃癌的发生过程中发挥重要作用,细菌毒力因子是导致不同胃疾病的重要因素。目的:研究高、低表达硫氧还蛋白1(Trx1)的Hp对人胃上皮细胞株GES-1生长的作用。方法:按1∶50、1∶100、1∶200的细胞/细菌比例分别加入GES-1细胞和高、低表达Trx1的Hp菌株共培养,并设不加菌株的空白细胞作为对照组,分别于培养24 h和48 h时采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞存活率。收集1∶100浓度组和对照组GES-1细胞,采用流式细胞术检测细胞周期。结果:高、低表达Trx1的Hp对GES-1细胞有损伤作用,细胞存活率降低,且呈时间和浓度依赖性,在Trx1高表达组中尤为明显。流式细胞术显示Trx1高表达组GES-1细胞进入S期的比例在24 h和48 h均明显高于Trx1低表达组。结论:高、低表达Trx1的Hp对GES-1细胞生长具有抑制作用,高表达Trx1的Hp具有更强的致病性,与致胃癌作用有关。

c-Jun对硫氧还蛋白还原酶1启动子转录的调控作用

目的:探讨转录因子激活剂蛋白-1(activator protein-1,AP-1)家族成员c-Jun对硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TrxR1)启动子转录的调控作用。方法:利用生物信息学技术分析调控TrxR1启动子区域的转录因子,构建TrxR1启动子区域一系列截短的萤光素酶报告基因载体,将含c-Jun的真核表达载体pcDNA3.1(+)-c-Jun和含有TrxR1启动子的萤光素酶报告基因载体共转染人胚肾HEK293细胞和鼠心肌H9c2细胞,检测转染细胞中萤光素酶活性。应用定点突变技术针对TrxR1启动子区域AP-1的可能结合位点进行突变,与c-Jun的真核表达载体共转染上述2种细胞,检测各组萤光素酶活性。利用染色质免疫共沉淀(ChIP),分析c-Jun与TrxR1启动子区域的AP-1结合位点结合情况。结果:酶切及测序结果表明,获得的3个不同长度的TrxR1启动子克隆与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,且插入方向正确;此3种质粒都有明显的启动子活性,在人胚肾HEK293和鼠心肌H9c2细胞中转染pcDNA 3.1(+)-c-Jun可以上调TrxR1启动子活性。突变AP-1结合位点,导致TrxR1启动子活性明显降低;ChIP结果显示c-Jun结合在TrxR1启动子区域的AP-1结合位点上。结论:转录因子AP-1家族成员c-Jun可能通过与TrxR1基因启动子区域AP-1结合位点相结合,上调TrxR1基因的转录。

结直肠癌组织中硫氧还蛋白-1与硫氧还蛋白互作蛋白的表达及其临床意义

目的探讨硫氧还蛋白-1(TRX-1)以及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法选取2019年1~12月河北北方学院附属第一医院收治的结直肠癌患者72例,另选取同时期在该院接受治疗的结直肠息肉患者40例作为对照组。采用免疫组化法检测手术切除的病理标本中TRX-1和TXNIP的表达情况,分析结直肠癌组织中TRX-1和TXNIP的表达和临床病理特征的关系,分析结直肠癌组织中TRX-1和TXNIP表达的相关性,接受者工作特征曲线(ROC)分析TRX-1和TXNIP对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组织中TRX-1的阳性表达率为66.67%,高于结直肠息肉组织中的25.00%,差异有统计学意义(χ^(2)=17.880,P=0.000),结直肠癌组织中TXNIP的阳性表达率为30.56%,低于结直肠息肉组织中的77.50%,差异有统计学意义(χ^(2)=22.733,P=0.000)。结直肠癌组织中TRX-1的表达与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小以及分化程度有关(χ^(2)=4.114~4.938,P=0.026~0.043);结直肠癌组织中TXNIP的表达与TNM分期、淋巴结转移有关(χ^(2)=4.675,5.531,P=0.019,0.031)。结直肠癌组织中TRX-1和TXNIP的表达呈负相关(r=-0.298,P=0.011)。TRX-1和TXNIP对结直肠癌有一定的诊断价值,曲线下面积分别为0.708和0.735,而二者联合可进一步提高诊断价值,曲线下面积为0.792。结论TRX-1在结直肠癌组织中异常高表达,TXNIP异常低表达,二者的表达水平均与部分临床病理参数有关,且对结直肠癌均有一定的诊断价值。

硫氧还蛋白-1减弱脂连蛋白对小鼠移植性肝癌生长的抑制作用

硫氧还蛋白-1(thioredoxin 1,Trx1)是机体氧化还原调控的重要蛋白质。脂连蛋白(adiponectin,APN)是一种由脂肪组织分泌的细胞因子。二者在癌症特别是肝癌的发展中具有重要调控作用,但其在调控肝癌的进程中是否存在相关性,且改变这种相关性是否直接影响肝癌的发生发展,目前尚未见报道。本文通过分析癌症和肿瘤基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中大量肝癌患者组织样本数据后,首次发现Trx1与APN在肝癌的进程中存在显著负相关表达。在荷瘤鼠中分别过量表达Trx1、APN和Trx1,采用Western印迹、免疫组织化学染色及TUNEL等方法检测发现,过量表达的Trx1,缓解了APN引起的瘤内Trx1蛋白水平下降,减弱APN对肿瘤的抑制作用,同时增加Ki67阳性细胞数目,减少细胞凋亡和p-JNK阳性细胞数目。上述结果表明,改变Trx1与APN的负相关性后,APN对肝癌细胞成瘤的抑制作用明显减弱。提示在抑制肝癌细胞生长及肝癌治疗的过程中,调控Trx1及APN的相关性可能起到十分重要的作用,这为临床肝癌的治疗提供更为全面有效的理论机制。