高氧对人肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2表达的影响

目的研究高浓度氧暴露对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)表达的影响,探讨Trx-2对高氧肺损伤线粒体的保护作用。方法体外传代培养A549细胞系,待其在37℃、5%CO2培养箱中生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧浓度>90%,CO2浓度为5%;空气组仍置于含5%CO2培养箱中。两组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx-2 mRNA的表达;采用Western blot检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果①与空气组相比,A549细胞高氧暴露24 h Trx-2 mRNA表达显著增强(P<0.05);48 h后Trx-2mRNA呈下降趋势,其表达较空气组减弱,但两者差异无显著性意义(P>0.05)。②与空气组相比,A549细胞高氧暴露后12 h Trx-2蛋白表达水平显著增强(P<0.05),随后逐渐减弱,至48 h显著减弱(P<0.05)。结论高浓度氧暴露诱导A549细胞中Trx-2动态表达的变化,这种变化表明Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用。

硫氧还蛋白-2在氧化损伤的人晶状体上皮细胞中的表达及其意义

目的:探讨硫氧还蛋白-2(thioredoin-2,Trx-2)是否参与白内障的发病过程及其对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响。方法:选取志愿者(因外伤行透明晶状体取出术患者)10例和行超声乳化白内障手术患者(年龄大于60岁)30例的晶状体前囊膜,采用链霉素亲生物素蛋白-过氧化物酶标免疫组织化学法检测志愿者和白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白的表达情况。体外培养SRA01/04细胞,根据不同处理分为空白对照组、20μmol/L H_2O_2组、50μmol/L H_2O_2组、100μmol/L H_2O_2组、阴性对照组(转染对照空p CMV6质粒并用100μmol/L H_2O_2处理)和过表达Trx-2组(转染p CMV6-Trx-2过表达质粒并用100μmol/L H_2O_2处理)。采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法检测各组细胞活力;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡;采用化学比色法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用Western印迹检测各组细胞中Trx-2以及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)的表达。结果:与志愿者相比,白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,20,50,100μmol/L H_2O_2组Trx-2蛋白表达量均明显降低(均P<0.05)。与空白对照组相比,100μmol/L H_2O_2组和阴性对照组细胞存活率降低、凋亡率增加,细胞内SOD和CAT活性降低、GSH含量减少、MDA含量增加,Trx-2和Bcl-2蛋白表达降低,Bax和caspase-3蛋白表达增加(均P<0.05)。与阴性对照组比较,过表达Trx-2组细胞存活率增加、凋亡率降低,SOD和CAT活性增加、GSH含量升高、MDA含量降低,Trx-2和Bcl-2蛋白表达增加,Bax和caspase-3蛋白表达减少(均P<0.05)。结论:Trx-2参与白内障发病中上皮细胞的凋亡,过表达Trx-2能够减少H_2O_2诱导的细胞凋亡,这可能与拮抗H_2O_2诱导的氧化损伤有关。

硫氧还蛋白-2和细胞色素C在高氧暴露下A549细胞中的表达和意义

目的观察高体积分数氧(高氧)暴露后人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(Trx-2)和细胞色素C(Cytc)的动态表达,探讨Trx-2和Cytc表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法复苏液氮罐中冻存的人肺腺癌A549细胞系后,加入100 g/L胎牛血清的MEM培养基,置于37℃50 mL/L二氧化碳(CO2)饱和湿度培养箱中培养。然后体外传代培养A549细胞,待其生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组,每组18瓶A549细胞(50 mL培养瓶)。高氧组持续暴露于常压高氧中,氧体积分数为900 mL/L,CO2体积分数为50 mL/L;空气组仍置于50 mL/LCO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h后提取A549细胞总RNA,半定量反转录聚合酶链反应检测Trx-2和Cytc mRNA水平;蛋白印迹法检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果1.与空气组比较,高氧组24 h Trx-2 mRNA的表达显著增强(P<0.05);48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,二组比较无显著性差异(P>0.05)。2.与空气组比较,高氧组12 h Cytc mRNA的表达显著增强(P<0.05);24 h Cytc mRNA的表达减弱,二组比较无显著性差异(P>0.05);48 h显著减弱(P<0.05)。3.与空气组比较,高氧组12 h Trx-2蛋白的表达显著增强(P<0.05);24 h仍增强,二组比较无显著差异(P>0.05);48 h显著减弱(P<0.05)。结论高氧暴露可诱导A549细胞中Trx-2和Cytc异常表达,提示Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用,Cytc在高氧肺损伤细胞凋亡发生发展中起重要作用。

SiRNA抑制高氧暴露下A549细胞硫氧还蛋白-2表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系

目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞。将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92%O2,5%CO2)中;空气组仍置于5%CO2培养箱中。4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA。采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C(CytC)mRNA的表达;Western-blot检测Trx-2蛋白表达;流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响。结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51%)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P<0.05)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P<0.05)。干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P<0.05)。结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。

硫氧还蛋白-2在急性白血病患者骨髓中的表达及意义

目的探讨TRX-2基因表达水平与急性白血病及临床特征的关系。方法应用适时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)和间接免疫荧光试验检测试验组120例急性白血病和对照组120例非血液病的其他疾病患者骨髓TRX-2基因表达情况,并结合临床资料进行分析。结果经RT-PCR检测,试验组TRX-2 mRNA骨髓表达量明显高于对照组,两组差异具有统计学意义[(5.08±0.52)×102 vs.(0.91±0.15)×102,P<0.05]。其中试验组中原始细胞≥90%的样本TRX-2表达量比原始细胞<90%患者明显增多,其差异具有统计学意义[(6.79±0.51)×102 vs.(3.26±0.58)×102,P<0.05]。而骨髓中TRX-2的表达量与年龄、性别和急性白血病的类型无相关性;间接免疫荧光试验检测试验组骨髓原始细胞不同程度表达TRX-2,阳性表达率78.2%,而对照组无阳性表达;TRX-2的RT-PCR检测与间接免疫荧光法检测两种方法之间具有显著相关性(P<0.05),但一致性较差(κ=0.26)。结论 TRX-2在急性白血病骨髓中呈现高表达,其与急性白血病原始细胞的负荷量存在相关性,而与临床特征无明显相关;RT-PCR与间接免疫荧光法两种方法检测TRX-2之间具有显著相关性,但一致性较差。

大鼠自体原位肝移植24h后肝内硫氧还蛋白-2的表达和抗氧化能力的变化

【目的】探讨线粒体硫氧还蛋白(Trx2)和抗氧化能力在原位自体原位肝移植(AOLT)大鼠后24 h内肝脏组织动态变化。【方法】将40只雄性SD大鼠随机均分为假手术组(Group S,n=8)、肝移植后4 h组(LTR 4h group,n=8),肝移植后8 h组(LTR 8h group,n=8),肝移植后16 h组(LTR 16h group,n=8)和肝移植后24 h组(LTR 24h group,n=8)。S组只进行开腹和血管的分离,各肝移植组接受自体原位肝移植(AOLT),光镜下观察各组大鼠肝脏病理学改变,Suzuki病理学评分改变,实验室检测活性氧水平、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽(GSH)活性、总抗氧化能力(TOC)变化、及Western Blot法检测Trx-2的蛋白表达的变化。【结果】自体肝移植引起了大鼠明显的肝脏损伤,组织病理评分在移植后4 h明显升高并达峰值,持续到移植后24 h(P<0.05,vs.group S),但24 h较4 h有明显改善(P<0.05 vs.group LTR4h);O2.、.OH和MDA的生成在4 h到16 h增加明显(1.6～2.0倍),MDA水平发生与之一致的时间变化(P<0.05 vs.group S);抗氧化酶活性在肝移植后4 h和8 h下降明显,SOD、CAT和GSH活性下降达30%(P<0.05 vs.group S),TOC活性下降达70%(P<0.01 vs.group S)。而相对氧化/抗氧化指标来讲,移植后肝脏组织内Trx-2蛋白表达增高的速度较慢,4 h开始表达增加(P<0.05 vs.group S),而直到24 h才达到蛋白表达峰值(～2.0倍)。【结论】移植后肝脏发生损伤,并逐渐加重而后逐渐恢复,损伤程度与活性氧水平和抗氧化酶活性变化趋势相一致;Trx-2的表达上调有利于抗氧化酶合成和提高抗氧化能力。

褪黑素干预对硫氧还蛋白-2表达的影响及胰腺组织的保护作用

目的:观察在大鼠急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)时胰腺组织中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)的表达,探讨褪黑素对胰腺保护作用与Trx-2表达的关系.方法:72只♂SD大鼠随机分为ANP组(A组)、褪黑素干预组(M组)、对照组(C组),每组24只.A组、M组腹腔注射6%左旋精氨基酸25 m L/kg体质量3次,诱发ANP;M组在首次注射左旋精氨基酸前0.5 h腹腔注射0.25%褪黑素20 m L/kg体质量,而A组首次注射左旋精氨基酸前0.5 h腹腔注射生理盐水20 m L/kg体质量;C组同法注射等量生理盐水.各组大鼠在末次腹腔注射后6、12、24 h分批处死.光镜下观察胰腺病理改变并进行评分.RTPCR检测胰腺Trx-2 m RNA水平,并检测胰腺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量.结果:A组各时点胰腺病理评分显著高于C组,而Trx-2 m RNA表达较C组显著降低(均P<0.05),MPO和MDA较C组显著升高(均P<0.05).M组各时点胰腺病理评分较A组降低,Trx-2 m RNA较A组显著升高(P<0.05).MPO和MDA较A组显著降低(均P<0.05).结论:Trx-2在ANP时的表达显著降低;外源性褪黑素可通过促进Trx-2的表达,减轻胰腺组织的损伤.

失眠患者脑白质高信号与血清硫氧还蛋白-2水平及认知功能的相关性研究

目的:探讨失眠患者脑白质高信号(WMH)与血清硫氧还蛋白-2(Trx2)水平及认知功能的相关性。方法:选取2017年11月—2018年6月就诊于我院神经内科的失眠患者124例作为观察组,通过做头颅核磁依据有无WMH分为失眠伴WMH组82例和单纯失眠组42例,采用Fazekas量表对脑白质病变情况进行评价,另选取同时在我院体检,脑白质信号正常的健康体检者45例作为对照组。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者的血清Trx2水平,应用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)对认知功能进行测评。采用Pearson或Spearman相关性分析对受试者Fazekas评分与血清Trx2水平和认知功能指标进行相关性分析。结果:①失眠伴WMH组、单纯失眠组、对照组血清Trx2水平三组间任意两组相比有差异。②失眠伴WMH组、单纯失眠组、对照组MoCA评分三组间任意两组相比有差异。③相关分析显示失眠伴WMH组Fazekas评分与血清Trx2水平呈正相关,Fazekas评分与MoCA评分呈负相关,血清Trx2水平与MoCA评分呈负相关。结论:失眠伴WMH患者血清Trx2水平与脑白质高信号严重程度呈正相关,认知功能水平与脑白质高信号严重程度呈负相关,血清Trx2水平与认知功能水平呈负相关。失眠患者血清Trx2水平越高,WMH程度越重,认知功能水平下降越明显。

硫氧还蛋白-2在急性坏死性胰腺炎大鼠肺的表达及意义

硫氧还蛋白-2（thioredoxin-2,Trx-2）是存在于细胞线粒体的一种氧化还原蛋白,研究显示TⅨ-2在阻止线粒体氧化应激方面较Trx-1更具重要作用[1].为此,本研究检测Trx-2在急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠肺的表达,探讨TⅨ-2在对抗肺氧化应激方面的作用.

硫氧还蛋白还原酶-2在非小细胞肺癌中的表达及预后

目的:探讨硫氧还蛋白还原酶-2(thioredoxin reductase-2,TrxR2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对患者预后的影响。方法:免疫组化法检测90例手术后NSCLC癌组织及癌旁正常肺组织中TrxR2的表达,分析TrxR2表达与患者临床病理特征及生存预后的关系。结果:TrxR2在NSCLC组织中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05),TrxR2的表达与患者性别、是否吸烟、肿瘤组织分级、TNM分期无相关性(P>0.05),而与年龄及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。随访90例患者发现TrxR2高表达组的患者预后更差(P<0.05)。结论:TrxR2在NSCLC中高表达,有望成为NSCLC转移及预后判断的重要指标。

在乳腺癌细胞MCF-7中紫杉醇诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2的表达

探讨紫杉醇在人乳腺癌细胞株MCF-7中诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2表达及与其诱导的相关途径.用不同浓度的紫杉醇刺激MCF-7细胞,MCF-7细胞生长受抑制.通过荧光实时定量PCR检测,发现紫杉醇刺激MCF-7细胞后硫氧还蛋白结合蛋白-2mRNA的表达升高.经荧光素酶活性检测,得出紫杉醇诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2基因启动子活性的增高.p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂,SB203580抑制了紫杉醇诱导的硫氧还蛋白结合蛋白-2mRNA的表达.因此,紫杉醇抑制MCF-7细胞生长,并通过p38丝裂原激活蛋白激酶途径诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2表达.

急性白血病患者WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因表达的检测及其与疾病分型、疗效的关系

目的:研究急性白血病患者肾母细胞瘤基因(WT1)、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、ETS相关基因(ERG)、硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达及其与疾病分型、疗效的关系。方法:将本院收治的90例白血病患者纳入研究的白血病组,将同期体检健康者纳入健康组;进一步根据分型将白血病患者分为ALL组和AML组,根据化疗后疗效将白血病患者分为完全缓解组和复发组。采集患者的外周血,检测WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量。结果:白血病组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AML组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于ALL组,差异有统计学意义(P<0.05);复发组的血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于完全缓解组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因异常高表达与白细胞的发生有关,也与疾病的分型、化疗的效果密切相关。

硫氧还蛋白结合蛋白-2的表观遗传学修饰及其与肿瘤的相关性

表观遗传学研究的是稳定的遗传信息的修饰,这种修饰在不改变DNA序列的情况下引起基因表达和功能的改变。肿瘤发生过程中,经常伴有抑癌基因的表观遗传学修饰,如DNA甲基化、组蛋白去乙酰化等。硫氧还蛋白结合蛋白-2是硫氧还蛋白的结合蛋白质,它可以和还原型的硫氧还蛋白相结合,与肿瘤发生密切相关。本文论述了有关肿瘤表观遗传学、硫氧还蛋白结合蛋白-2的表观遗传学修饰及其与肿瘤的相关性。

TrxR2基因多态性与大骨节病易感性关系的初步研究

目的研究硫氧还蛋白还原酶2(TrxR2)基因单核苷酸多态性位点与大骨节病(KBD)易感性的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-EFLP)技术检测84例KBD患者和109例正常对照者TrxR2基因rs5748469位点的基因型。结果 KBD组A/A,A/C,C/C基因型频率分别为83.33%,15.48%和1.19%,正常对照组A/A和A/C基因型分别为74.31%和25.69%,二组之间无显著性差异(P=0.13>0.05)。结论该位点与大骨节病易感性之间不具有明显的相关性。

自身免疫性卵巢早衰患者血清TBP2、BMP15的临床意义

目的:探讨硫氧还蛋白结合蛋白-2(TBP2)、骨形态发生蛋白15(BMP15)在自身免疫性卵巢早衰(POF)患者血清表达情况及临床意义。方法:选取本院收治的48例自身免疫POF患者为病例组,同期体检卵巢功能正常女性48例为正常组,酶联免疫吸附法检测其血清TBP2、BMP15,化学发光法检测性激素水平,分析二者变化对自身免疫性POF的临床意义。结果:病例组血清中TBP2、BMP15表达水平均低于正常组,卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平高于正常组,雌二醇(E2)水平低于正常组(均P<0.05);病例组血清TBP2、BMP15表达与FSH、LH呈负相关性,与E2水平呈正相关性(均P<0.05),TBP2与BMP15表达呈正相关性(P=0.000)。结论:自身免疫性POF患者血清TBP2、BMP15表达下调,二者表达呈正相关性,并与患者性激素水平相关。可能TBP2、BMP15相互协同调控自身免疫POF发病过程。