用硫氰酸盐洗脱法直接测定噬菌体抗体的相对亲和力(英文)

抗体与相应抗原的结合可以被硫氰酸盐洗脱而解离 ,抗体的亲和力越高则解离所需要的硫氰酸盐浓度就越大 ,这一原理在传统的免疫学实验中被用来测定单克隆抗体或多克隆抗体的相对亲和力。如果证明该原理同样适用于噬菌体抗体库技术 ,则可以建立一种直接测定噬菌体抗体相对亲和力的简便方法。首先将噬菌体抗体与工作浓度的硫氰酸盐共孵育 ,以证明这一过程并不影响其后的ELISA反应 ,然后参照硫氰酸盐洗脱法测定完整抗体分子和Fab段相对亲和力的方法 ,在ELISA实验中以酶标抗M13为二抗检测了 5个单克隆噬菌体抗体的相对亲和力 ,并与相对应的可溶性Fab段的相对亲和力进行了比较。被测抗体中包括 3个克隆的抗角蛋白抗体和 2个克隆的抗乙型肝炎表面抗原抗体。结果发现 ,用硫氰酸盐洗脱法测定 5个噬菌体抗体所得到的亲和力排序与测定其相应可溶性Fab段所得结果一致 ,表明硫氰酸盐洗脱法可作为一种简便快速的方法用来直接测定噬菌体抗体的相对亲和力。

用硫氰酸盐洗脱法筛选高亲和力噬菌体抗体

目的 :建立一种从抗体库中筛选高亲和力噬菌体抗体的方法。方法 :选择已知亲和力高低不同的噬菌体抗体以不同的比例组成模拟抗体库 ,在常规筛选程序的基础上 ,用不同浓度的硫氰酸盐进行洗脱 ,选择性去除低亲和力抗体 ,保留高亲和力体 ,对最后获得的噬菌体抗体制备质粒DNA进行内切酶谱分析 ,判断其中高亲和力抗体的比例。结果 :实验证明工作浓度硫氰酸盐的孵育不影响噬菌体颗粒的感染活性 ;抗体库筛选过程中用硫氰酸盐进行洗脱 ,发现随着硫氰酸盐浓度的增加 ,洗脱回收的噬菌体抗体中高亲和力克隆的比例逐渐升高。结论 :硫氰酸盐洗脱法用于噬菌体抗体的筛选有助于成功获得期望的高亲和力抗体。

硫氰酸盐洗脱法测定噬菌体抗体的相对亲和力

目的 建立一种测定噬菌体抗体相对亲和力的方法。方法 参照硫氰酸盐洗脱法测定完整抗体分子和Fab段相对亲和力的方法 ,在ELISA实验中以酶标抗M13为二抗检测 5个单克隆噬菌体抗体的相对亲和力 ,并与可溶性Fab段的相对亲和力进行比较。结果 噬菌体抗体可以耐受硫氰酸盐的洗脱 ,用硫氰酸盐洗脱法测定 5个噬菌体抗体所得亲和力排序与测定其相应可溶性抗体分子片段所得结果一致。结论 硫氰酸盐洗脱法可用于噬菌体抗体相对亲和力的测定。

抗体库优化策略对特异性抗肝癌单链抗体的人源化

目的:对特异性抗肝癌单链抗体(single chain variable fragment,scFv)DM同步进行人源化和优化,以获得亲和力高和免疫原性低的人源化抗肝癌单链抗体.方法:通过分子结构和序列分析,确定对抗原结合位点的构象有重要影响的骨架区(FR)残基,把难以判断回复突变残基的人、鼠源副本同时编入人源化抗体序列中;通过重叠延伸PCR技术合成人源化抗体全基因,利用噬菌体展示技术构建人源化组合抗体库;通过肝癌细胞筛选阳性克隆,ELISA方法测定各个克隆抗原结合活性;用硫氰酸盐洗脱法测定并比较亲本抗体和人源化scFv的相对亲和力.结果:成功构建人源化组合抗体库,实际库容4.77×105,包含由25不同重链和22不同轻链组成的128种人源化DM;经过筛淘及ELISA鉴定,获得HDM1、HDM2和HDM33个阳性克隆,相对亲和力指数分别为HDM11.6mol/L、HDM21.2mol/L和HDM32.2mol/L.结论:抗体库优化法是一个高效、简便的人源化方法;获得的3株阳性克隆HDM1、HDM2、HDM3与亲本抗体DM同样具有良好的抗原结合特异性和较高的亲和力.