抗铜酿酒酵母铜结合蛋白的纯化及性质研究

酿酒酵母 Cu2 +抗株 YND2 1经含一定浓度的氯化铜培养基诱导培养后 ,收集菌体 ,破碎细胞 ,离心后Sephadex G-50和 DEAE-cellulose柱层析分离可获得三种铜结合蛋白 DE-1 ,DE-2 ,DE-3 .DE-1脱盐后 ( G-1 )经鉴定具有金属硫蛋白的特性 :表观分子量约为 1 8k D;每分子蛋白含 2 0个巯基 ,结合 1 1个铜原子 ;氨基酸组成中富含半胱氨酸 ( 1 8% )、碱性和酸性氨基酸 ,而酪氨酸和蛋氨酸含量极微 ;等电点为 5.1 . G-1经 SDS-PAGE和等电点聚焦电泳分析证明是均一的 ,与有关文献报导基本相符 .

2-十一烷酮通过调控重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白信号改善小鼠哮喘的研究

目的研究2-十一烷酮对实验性哮喘小鼠重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白(Nrf2/TXNIP/TrX)信号的影响。方法将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、对照组、实验组和联合组,每组6只。正常组未行造模,其余4组给予抗原混合液200μL致敏+1%OVA激发建模。在此基础上,对照组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮;实验组给予30 mg·kg^(-1)ML385;联合组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮+30 mg·kg^(-1)ML385;正常组和模型组均给予等量0.9%NaCl。用苏木精-伊红染色法观察肺组织炎性细胞的浸润情况,用酶联免疫吸附试验法检测血清免疫球蛋白E(IgE)和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)水平,用蛋白质印迹法检测Nrf2、TXNIP、TrX和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的表达水平。结果实验组、对照组、联合组、模型组和正常组的炎症评分分别为(4.33±0.65)、(1.00±0.41)、(3.00±1.21)、(3.33±0.32)和(0.67±0.31)分,血清IgE分别为(24.17±4.59)、(87.51±9.91)、(49.43±8.49)、(129.38±13.75)和(78.00±11.35)ng·mL^(-1),BALF中IL-1β分别为(44.17±7.11)、(154.45±17.75)、(87.04±15.72)、(216.29±19.64)和(134.87±23.83)pg·mL^(-1),Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.46±0.02、0.71±0.03、0.30±0.02和0.48±0.02,TXNIP蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.16±0.57、1.55±0.21、5.25±0.18和3.59±0.24,TrX蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.38±0.02、0.79±0.01、0.24±0.03和0.42±0.02,NLRP3蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.33±0.42、2.26±0.31、5.21±0.44和3.67±0.29。实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论2-十一烷酮对OVA诱导的小鼠哮喘具有明显的治疗作用,其机制可能与调节Nrf2/TXNIP/TrX信号,抑制NLRP3炎症小体活化有关。

Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用

目的探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用机制。方法 MRL/lpr狼疮小鼠20只随机分为MRL/lpr对照组、5 mg/kg Y-27632处理组,每组10只;野生型对照组C57BL/6小鼠10只。采用ELISA检测各组小鼠血清、脾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,ELISA检测血清核因子κB(NF-κB)相关炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用Western blot法检测各组小鼠脾脏组织中硫氧还蛋白结合蛋白(Txnip)/硫氧还蛋白(Trx)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)相关蛋白胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38MAPK以及NF-κB的水平;Western blot法检测各组小鼠脾脏T淋巴细胞Txnip、p38MAPK、NF-κB蛋白水平;ELISA检测T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平。结果 Y-27632提高MRL/lpr狼疮小鼠血清及脾脏组织SOD水平;降低血清及脾脏组织MDA水平;降低血清、脾脏组织和脾脏T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平;抑制脾脏和脾脏T淋巴细胞Txnip、MAPK相关蛋白ERK、JNK和p38MAPK以及NF-κB表达,增加Trx含量。结论 Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠有保护作用。

Differential expression of genes encoding sulfur metabolism-related periplasmic proteins of Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC 23270

Reverse-transcription qualitative PCR(RT-qPCR)was used to analyze the changes in transcription levels of the sulfur metabolism-related periplasmic protein genes of Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC 23270 grown on sulfur or ferrous.Seven periplasmic proteins with apparently higher abundance grown on elemental sulfur than on ferrous sulfate were identified by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry(MALDI-TOF-MS).Expression analysis of the corresponding genes by RT-qPCR shows that the constitutive expression of all those genes are more up-regulated grown on sulfur than those grown on ferrous(>10 folder).Study on the corresponding genes of the identified periplasmic proteins by RT-qPCR confirmed the results of two-dimensioned gel electrophoresis,indicating they may be related with sulfur metabolism in A.ferrooxidans.