镉对大鼠精囊腺超微结构及硫胺素焦磷酸酶细胞化学和血清睾酮含量的影响

以超微结构形态计量学及硫胺素焦磷酸酶（ＴＰＰａｓｅ）细胞化学和血清睾酮放射免疫测定等，探讨镉对大鼠精囊腺的影响及其作用机理。结果表明，大鼠腹腔内注射氯化镉（２ｍｇ／ｋｇ体重）后１ｈ，主细胞超微结构出现改变，ＴＰＰａｓｅ反应产物开始减少，１５～３０ｄ退变最明显，６０ｄ呈恢复趋势。主要改变为线粒体肿胀，高尔基复合体囊泡扩大，髓样结构及脂滴增多。注射后１５ｄ，主细胞大分泌颗粒体密度、面数密度明显减少，３０ｄ消失，６０ｄ有所恢复。大分泌颗粒直径于３ｄ开始减小，１５ｄ降至正常直径１／２，６０ｄ仍未恢复。注射镉后７ｄ血清睾酮含量显著降低，６０ｄ仍未恢复正常。提示镉对精囊腺有早期直接损伤作用，睾酮下降及毛细血管内皮损伤则又加速精囊腺退变。

镉对大鼠前列腺损伤及锌保护的超微结构与硫胺素焦磷酸酶细胞化学的研究

目的 研究镉对大鼠前列腺腹侧叶的超微结构影响及锌保护作用。 方法 小剂量氯化镉 (2 m g/ kg体重 )及锌腹腔内注射后用透射电镜观察及硫胺素焦磷酸酶 (TPPase)电镜细胞化学定量分析。 结果 镉注射后 4h,前列腺上皮主细胞出现轻微的超微结构改变 ,3～ 7d呈明显退变 ,15 d退变减轻 ,出现粗面内质网 (RER)形成的同心圆性小体 ,30～ 6 0 d基本恢复正常。镉注射后 4h,TPPase反应产物较正常组减少 ,3d和 15 d进一步减少。锌保护组较相应的单纯镉组的超微结构损伤轻 ,且 TPPase反应产物也较多。 结论 镉对大鼠前列腺腹侧叶上皮主细胞早期直接损伤较轻 ,所致 TPPase反应产物减少明显。锌对镉所致主细胞超微结构损伤及

慢性氟中毒大鼠中缝大核硫胺素焦磷酸酶细胞化学研究

目的 探讨慢性氟中毒对大鼠中缝大核酶活性的影响。方法 饮用高氟水 (10 0mg/L)复制雄性大鼠慢性氟中毒模型。对中缝大核神经元硫胺素焦磷酸酶 (TPPase)进行定性、定量分析。结果 氟中毒大鼠中缝大核神经元内TPPase染色浅于对照组 ,定量分析TPPase活性下降。电镜观察氟中毒大鼠神经元内TPPase颗粒减少 ,同时出现超微结构改变。结论 高氟可抑制TPPase酶的活性 。

基于核酶开关的哺乳细胞内硫胺素焦磷酸荧光生物传感器的建立

硫胺素焦磷酸(Thiamine pyrophosphate,TPP)是维生素B1在细胞内的主要活性形式,也是糖、脂肪酸和氨基酸氧化代谢中重要的辅助因子。在细胞内,利用TPP适配体与天然核酶组装成的人工核酶开关调节靶基因表达,目前仅局限于原核、真菌或植物细胞。本实验将原核生物中筛选的"Switch-on"与"Switchoff"的两种类型的TPP核酶开关,运用重叠延伸PCR的方法构建于增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的3'非翻译区(UTR),转染人胚肾上皮细胞(HEK293),通过荧光显微镜和流式细胞仪分析,观察了不同浓度TPP对EGFP表达能力的调控。结果表明,构建的两种"Switch-on"和一种"Switch-off"核酶开关均表现出明显的TPP浓度依赖性,且具有良好的特异性,在150μmol/L TPP时分别将EGFP的荧光强度提高3.1倍、1.9倍和降低2.3倍。这种构建通过TPP与核酶开关中其适配体的特异性作用直接将TPP浓度的变化转化为报告基因表达的改变,利于通过荧光检测方法实现对哺乳活细胞内代谢物或因子的无标记、无损伤、可视、高效的检测。

单胺氧化酶和硫胺素焦磷酸酶在豚鼠交感——肾上腺髓质系统细胞超微结构内的定位

分别采用Shannon和Novikoff法显示单胺氧化酶(MAO)和硫胺素焦磷酸酶(TPPase)活性在豚鼠腹腔神经节和肾上腺髓质内的分布。在细胞水平发现,MAO活性定位在腹腔神经节小强荧光(SIF)细胞的局部核膜、细胞膜以及少数线粒体膜上,但是很少见到TPPase反应产物。在同一神经节的主神经元中,局部核膜、大量线粒体膜和内质网膜上,都显示出MAO活性反应。此外,TPPase广泛分布在它的高尔基体的靠近成熟面的扁囊上。在肾上腺髓质嗜铬细胞内,MAO和TPPase的定位特点与SIF细胞相似。以上结果提示,在生理状态下,SIF细胞内的儿茶酚胺代谢以及细胞活动方式,可能与主神经元不同,而与肾上腺髓质嗜铬细胞有相似的特点。

前列腺良性增生的5′-核苷酸酶和硫胺素焦磷酸酶定位及其活性的观察

用光镜和电镜研究了人类前列腺增生的上皮细胞内5′-核苷酸酶(5′-Nase)和硫胺素焦磷酸酶(TPPase)的活性。5′-Nase活性定位分布在上皮细胞的溶酶体、高尔基大泡、小泡、分泌泡以及游离面的质膜,腺腔内分泌物质也呈阳性反应。经克念菌素治疗后,酶活性无明显改变;然而用乙烯雌酚治疗后,酶活性稍弱;睾丸切除后的则完全呈阴性反应。TPPase活性定位在高尔基扁平囊泡的凹面,除睾丸切除后的酶反应完全阴性外,其他各种治疗,对酶活性没有明显改变。

硫胺素焦磷酸激酶缺乏症一家系的临床特点及基因变异分析

目的探讨一个硫胺素焦磷酸激酶缺乏症(thiamine pyrophosphokinase deficiency,TPKD)家系的临床和基因变异特点。方法分析TPKD家系的临床表现、影像学特点,对家系成员行全外显子测序。结果先证者,女,2岁8个月出现发作性共济失调伴肌张力障碍,此后反复发作共济失调7~8次。11岁时因病情再次发作且逐渐加重就诊,入院后第4天死亡。MRI示脑实质弥漫对称性损害及脊髓病变。胞兄有类似症状,6岁时去世。父母系近亲婚配。基因测序显示先证者TPK1 c.161C>T纯合突变,关联疾病为TPKD;患儿父亲、母亲及姐姐均为c.161C>T杂合突变。结论对于婴幼儿期起病,呈发作性脑病、共济失调、肌张力障碍等表型的患儿,早期进行基因检测明确诊断,可以指导治疗及遗传咨询。

华癸中慢生根瘤菌焦磷酸硫胺素结合蛋白基因tpp的功能研究

在构建M.huakuii tpp基因突变株的基础上,通过自生生长和植物盆栽试验,研究焦磷酸硫胺素结合蛋白tpp基因在根瘤菌的生长及与紫云英宿主共生固氮过程中的功能。通过同源重组获得华癸中慢生根瘤菌tpp突变菌株HKtpp,并进一步研究tpp基因突变对菌株生长及共生固氮功能的影响。结果显示:tpp基因突变会减缓菌株生长,突变菌株胞内的谷胱甘肽还原酶活性显著降低。植物盆栽试验表明,突变菌株感染紫云英宿主形成有效的红色根瘤,但是其固氮酶活降低了26.4%。结果表明:tpp基因在根瘤菌的生长和共生固氮中发挥着重要作用。

肝损伤对大鼠体内硫胺素及其代谢物水平的影响

文章为研究肝损伤对大鼠体内硫胺素及其代谢物水平的影响,通过14天胆管结扎和硫胺素限制饮食分别构建肝损伤和硫胺素缺乏大鼠模型,造模成功后,测定血浆和脑皮层中硫胺素及其代谢物浓度,并进一步分析了脑皮层中焦磷酸硫胺素依赖酶的活性和蛋白表达水平。结果表明:14天胆管结扎诱导的肝损伤大鼠与硫胺素缺乏大鼠的血浆和脑皮层中硫胺素浓度显著降低,但其代谢物焦磷酸硫胺素的浓度未发生改变,脑皮层中焦磷酸硫胺素依赖酶活性和蛋白表达也未发生改变。14天胆管结扎诱导的肝损伤和硫胺素限制饮食均会显著降低大鼠血浆和脑硫胺素水平,但不影响其代谢物焦磷酸硫胺素浓度及其依赖酶的活性和表达。

系列双磷维生素B1离子盐化合物的合成、结构及分子构象

将Ni(ClO4)2和NH4PF6分别与硫胺素焦磷酸在甲醇体系中反应,得到了两个新的离子盐型化合物[TPP.ClO4.H2O](1)和[TPP.PF6.CH3OH](2)(TPP为硫胺素焦磷酸酯).通过元素分析、红外光谱及X射线衍射等方法对它们进行了表征.结构分析表明,它们属于离子型化合物,而且硫胺素焦磷酸与高氯酸根,六氟磷酸根形成了大量的氢键网络结构.结合计算结果进一步分析了化合物的活性及电子结构特征.

活血化瘀方药抗大鼠肝纤维化的光镜及组织化学的实验观察

活血化瘀方药抗大鼠肝纤维化的光镜及组织化学的实验观察曹献英＊贲长恩于世瀛杨美娟赵丽云赵福建姜学连（北京中医药大学组织胚胎学教研室＊内蒙古医学院组织胚胎学教研室）本实验随机分为四组，正常对照组、损伤组、预防组和治疗组。用猪血清诱发大鼠肝纤维化，应用柴胡...

维生素B_1缺乏对运动能力的影响

维生素B1的磷酸化形式作为辅酶参与生物体代谢中的许多重要反应 维生素B1的缺乏会影响糖代谢功能和神经系统功能的正常发挥 本文论述了维生素B1对糖代谢作用机制和神经系统的影响。

维生素B_1对乙醇发育毒性的拮抗作用

目的:探讨维生素B1(VB1)对乙醇发育毒性的拮抗效果及可能机制。方法:以器官发生期小鼠体外全胚胎培养模型为基础,以4.0mg/ml乙醇诱导胚胎致畸模型,以0.25,0.5,1.0μg/mlVB1进行干预,通过对胚胎整体生长和各个器官发育指标的测量,评价VB1对乙醇发育毒性的拮抗效果。分离培养后的胚胎中脑细胞,检测细胞焦磷酸硫胺素(thiamine pyrophosphate,TPP)和硫胺素焦磷酸激酶(thiamine pyrophosphokinase,TPK)活性,分析VB1拮抗乙醇发育毒性的可能机制。结果:VB1对乙醇的发育毒性具有一定的拮抗作用,主要表现为卵黄囊、中枢神经系统和下颌突的发育改善。4.0mg/ml乙醇暴露能显著降低胚胎中脑组织TPP含量,而补充VB1能够逆转TPP含量的降低。在本次实验的剂量范围内,补充VB1对胚胎中脑组织TPK活性没有显著影响。结论:一定剂量的VB1在体外能够拮抗乙醇的发育毒性,增加细胞内TPP含量可能是其机制之一。

O-[1-(2-甲基-4-氨基嘧啶-5-甲基)-1H-[1,2,3]-三唑-4-基]甲基取代苯甲酰氨基硫代甲酸酯的合成与生物活性

丙酮酸脱氢酶系（PDHc）属于焦磷酸硫胺素（TPP）依赖性酶,是一个具有重要农学意义的农药作用靶标。以微生物中的丙酮酸脱羧酶E1（PDHc E1）为靶标,设计合成TPP类似物有望发现新型的杀菌活性化合物。以三唑环代替TPP结构中的噻唑环,以异硫氰酸酯结构单元替代TPP结构中的焦磷酸结构单元,设计合成了O-[1-（2-甲基-4-氨基嘧啶-5-甲基）-1 H-[1,2,3]-三唑-4-基]甲基取代苯甲酰氨基硫代甲酸酯类系列化合物Ⅰa~Ⅰj,采用IR、1 HNMR、MS和元素分析对Ⅰa~Ⅰj进行了结构表征,部分化合物还经13 CNMR进一步进行了结构表征。结果表明,此类化合物不仅为大肠杆菌丙酮酸脱羧酶E1（PDHc E1）的抑制剂,而且还显示了杀菌活性。

补充硫胺改善长期用速尿治疗的充血性心衰患者的左室功能

作者先前发现用速尿治疗的慢性充血性心衰患者出现硫胺(维生素B1)缺乏。本研究的目的是评价补充硫胺对用速尿治疗的中、重度心衰患者的硫胺缺乏状态、心功能分级及左室射血分数(LVEF)的影响。对象和方法 30例心衰患者(由慢性缺血性心脏病或特发性扩张型心肌病所致),年龄51～87岁,用速尿≥80mg/d至少3个月。心功能按NYHA分级为2～4级。患者住院1周,用随机、双盲法将患者分成2组,每组15例,分别静脉注入硫胺100mg 2次/d或安慰剂(生理盐水)。随后患者出院,均继续口服硫胺200mg/d,共6周。在7周的研究期间,继续使用先前治疗心衰的药物。于治疗前及治疗1周结束时,采用硫胺素焦磷酸辅羧酶效应(TPPE)测定硫胺缺乏的状态,评定心功能级别,用超声心动图检测左室舒张末期容积(EDV)、收缩末期容积(ESV)、LVE—F、心输出量(co)。出院后的第6周结束时再评定心功能,重做TPPE和超声心动图检查。

具有pH敏感性的氮、磷、硫共掺杂碳点的制备及其光谱研究

利用焦磷酸硫胺素作为前驱体,通过水热法一步合成氮、磷、硫共掺杂碳点。焦磷酸硫胺素分子结构内含有嘧啶环和噻唑环,并含有氨基和焦磷酸基。水热处理后,这些结构和基团被重组或保留,使氮、磷、硫等杂原子进入到碳点中。该碳点的无序化程度较高,存在着大量缺陷。这些缺陷使得碳点具有较高的荧光量子产率,达到了19.6%,明显高于其他已报道的共掺杂碳点。该碳点的荧光强度在碱性范围内,与pH值呈现显著的线性关系,可以用来定量检测碱性溶液的pH值。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人全血中硫胺素及其2种磷酸酯的浓度

目的建立一种同时测定人全血中的硫胺素、一磷酸硫胺素(TMP)和焦磷酸硫胺素(TPP)浓度的高效液相色谱-串联质谱方法。方法以[2H3]-硫胺素为内标,样本用三氯乙酸沉淀蛋白后进高效液相色谱-串联质谱系统(HPLC-MS/MS)分析。色谱柱:Zorbax Extend-C18(50.0 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相:含0.1%氨水的10 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液-80%的乙腈水溶液,流速:0.60 mL·min^(-1),梯度洗脱,柱温:35℃,进样量:10.0μL。用电喷雾离子源,多反应监测模式,正离子扫描检测。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果硫胺素和TMP在0.25~50.00 ng·mL^(-1),TPP在2.50~500.00 ng·mL^(-1)内,线性相关系数均大于0.99;硫胺素、TMP和TPP的定量下限分别为0.25,0.25和2.50 ng·mL^(-1);日内和日间精密度在3.27%~11.70%,准确度在86.56%~104.04%,提取回收率在85.54%~104.98%。内标对基质效应具有较好的校正作用,且稳定性良好。结论本方法操作简便快速,准确可靠,适用于3种维生素B1在人全血中浓度的检测。

Wernicke脑病的诊治

Wernicke脑病(Wernicke encephalopathy,WE)系VitB1缺乏所致的中枢神经系统营养障碍性疾病[1].主要典型表现为眼球运动障碍、小脑性共济失调、精神意识障碍等三联征[2].国外报道尸检发现WE的患病率为2%～3%,但临床诊断率仅为0.06%～0.13%,说明该病极容易漏诊、误诊.该病如果不能早期诊断、立即救治,病情会进行性加重,以致昏迷、死亡;而如能够及时救治,是神经科临床少数治疗最简单而效果又最好的疾病之一.……

生物化学中的重要反应

生物化学(Biochemistry),即生命的化学,它是研究生物体的化学组成及生命现象的化学变化规律的一门学科。也可以说是在分子水平上研究生命现象,探讨生命奥秘的一门学科。 近几十年来,生物化学由现代超微结构研究中取得了很大进展。在工、农、医、食品等各个领域中,根据研究对象的不同,生物化学又可分为动物生化、植物生化、医学生化、食品生化等各种不同的专业学科。在这些专业学科的生化教学过程中都需要讲述上百种的生化反应过程。这些形形色色的反应归纳起来,可以汇成几种重要的反应类型。

丙酮酸脱羧酶及其应用研究

丙酮酸脱羧酶(pyruvate decarboxylase,PDC),EC4.1.1.1,是一种胞内酶,是焦磷酸硫胺素(thiamine pyrophosphate,ThPP)依赖性的非氧化酶,是由辅酶ThPP、Mg2+和蛋白质构成的全酶,在辅助因子焦磷酸硫胺素和Mg2+参与下作用于丙酮酸而产生乙醛和CO2。PDC是丙酮酸合成乙醇的关键酶。它广泛存在于酵母菌、霉菌、细菌和植物等多种生物体中,不同来源的丙酮酸脱羧酶的结构、相对分子质量、酶学性质等均不尽相同。该文综述了丙酮酸脱羧酶生物学性质及其应用前景。