甲硫腺苷磷酸化酶、组蛋白赖氨酸三甲基转移酶蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)、组蛋白赖氨酸三甲基转移酶(SETD2)蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法将2018年11月至2019年11月在苏州市中西医结合医院进行手术治疗并经术后病理学检查证实的86例结直肠癌病人作为研究对象,并收集齐其癌组织标本以及对应的癌旁组织标本。采用免疫组织化学染色法检测所有标本MTAP、SETD2蛋白表达水平。采用χ^(2)检验和多因素Cox回归法探讨MTAP、SETD2蛋白表达与结直肠癌病人临床病理特征、预后的关系。结果结直肠癌组织中MTAP、SETD2阳性表达率(30.23%、27.91%)分别低于癌旁组织(58.14%、62.79%)(P<0.05)。MTAP、SETD2阳性表达水平随着TNM分期越晚、分化程度越低、伴有淋巴结转移而降低(P<0.05)。MTAP阳性3年生存率(73.08%)明显高于阴性(43.33%)(P=0.011);SETD2阳性3年生存率(70.83%)高于阴性(45.16%)(P=0.011)。单因素、多因素分析得出,TNMⅢ~Ⅳ期、伴淋巴结转移、低分化、MTAP阴性、SETD2阴性表达均为影响结直肠癌预后的危险因素(P<0.05)。结论直肠癌组织中MTAP、SETD2蛋白均呈低表达,其表达水平可能参与疾病发展,可成为评估病人预后不良的有效生物学指标。

甲硫腺苷磷酸化酶基因和鸟氨酸脱羧酶在卵巢癌中的表达及意义

目的:研究甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)基因和鸟氨酸脱羧酶(ODC)在卵巢癌中的表达,探讨两者与卵巢癌发病机制的关系。方法:收集60例新鲜的卵巢癌组织。采用逆转录聚合酶链反应测定癌组织中MTAP mRNA的表达,Western印迹法检测甲硫腺苷磷酸化酶蛋白质的表达情况;同时采用高效液相色谱法测定卵巢癌组织中鸟氨酸脱羧酶的活性。20例正常卵巢组织为对照。结果:卵巢癌中MTAP mRNA的表达水平为0.42±0.11,低于正常卵巢的表达水平0.81±0.18,卵巢癌中MTAP mRNA的表达缺失率为15%(9/60)。MTAP蛋白表达结果与mRNA基本一致。MTAP mRNA的表达与卵巢癌病理类型、肿瘤分期、组织分级无明显相关性(P>0.05)。卵巢癌组织中鸟氨酸脱羧酶ODC的活性为(3.82±1.03)U,比正常卵巢组织中ODC的活性(1.38±0.59)U高(P<0.01)。ODC的活性与卵巢癌组织分级呈正相关。9例MTAP表达阴性的卵巢癌ODC活性为(4.83±1.27)U,显著高于MTAP表达阳性的卵巢癌患者(P<0.05)。结论:卵巢癌存在MTAP基因表达减弱或缺失。MTAP基因表达缺失导致ODC的活化可能是卵巢癌的发病机制之一。

甲硫腺苷磷酸化酶在非小细胞肺癌中转录表达

目的 探讨甲硫腺苷磷酸化酶 (MTAP)及其连锁基因 p14 ,p15和p16在非小细胞肺癌中的转录表达变化情况。方法 采用RT PCR方法检测 15例新鲜肺癌标本及相应癌旁组织中MTAP及其边锁基因 p14、p15和p16mRNA的表达情况。结果 MTAP在 73 3%的肿瘤标本中不表达或转录水平降低 5倍以上 ,而MTAP在癌旁对照组织中的表达率却高达 93 3% ;此外 ,MTAP在肺腺癌和鳞癌中的低表达现象无显著性差异 ,但在中 /低分化肺癌中低表在显著高于高于分化癌。对 7例标本分析表明 ,1例P15基因在正常组织及癌瘤中都高水平表达 ,1例均不表达 ,5例在癌标本中基本不表达 ,而在正常组织中表达 ;而 p14和p16正常组织中转录表达水平很低 ,而在配对的 7例肺癌组织中却分别有 3项高表达。结论 MTPA基因低表达或丢失可能与肺癌的恶性程度密切相关 ,MTAP的缺失可能独立于 p16之外 ,提示MTAP的低表达或缺失在肿瘤生物学中有其功基础的基础。

三维全息原子场作用矢量用于5′-甲硫腺苷核苷酶抑制剂的定量结构-活性相关研究

采用三维全息原子场作用矢量(Three-dimensional Holographic Vector of Atomic Interaction Field,3D-HoVAIF)对33个5′-甲硫腺苷核苷酶抑制剂进行结构表征并与其抑制活性建立定量结构-活性相关(Quantitative Structure Activity Relationship,QSAR)模型。分别采用多元线性回归(MLR)和偏最小二乘回归(PLS)进行建模,同时采用内部及外部双重验证的方法对所建模型稳定性能进行分析和验证,建模计算值、留一法交互检验预测值和外部样本预测值的复相关系数R、Rcv、Qext分别为0.874,0.773,0.953(MLR);0.873,0.727,0.952(PLS)。表明三维全息原子场作用矢量能较好地表征该类分子的结构信息,所建QSAR模型具有良好的稳定性和预测能力;同时也指出了sp3杂化的C原子与sp2杂化的N原子,以及sp3杂化的C原子与sp3杂化的O/S原子的静电作用是影响5′-甲硫腺苷(MTA)类似物抑制5′-甲硫腺苷核苷酶(MTAN)活性的重要因素,有望对其它5′-甲硫腺苷核苷酶抑制剂的抑制活性预测及合成MTA类似物提供有效的理论依据。

甲硫腺苷磷酸化酶在人支气管上皮细胞辐射致癌模型中的表达变化研究

目的研究甲硫腺苷磷酸化酶(Methylthioadenosine Phosphoylase,MTAP)在人支气管上皮细胞(BEP2D)辐射致癌恶性转化前后的表达水平变化。方法培养永生化细胞BEP2D和恶性转化细胞BERP35T-2;制备细胞总蛋白质,进行双相电泳和质谱分析;选择有表达差异的蛋白质点MTAP,在细胞模型中进行Northern Blot和Western blot分析。结果双相电泳发现MTAP在恶性转化细胞BERP35T-2中基本没有表达;Northern Blot和Western Blot分析表明MTAP基因在BEP2D永生化细胞中转录和翻译表达水平均很高,而在BERP35T-2恶转细胞中表达极低;发现MTAP基因在两种细胞中的表达差别在10倍以上。结论MTAP的低表达与辐射致肺癌的发生有密切关系,是BEP2D受到α粒子辐射后基因表达谱的主要改变之一。

5′-甲硫腺苷核苷酶抑制剂的QSAR研究

通过构建33个甲硫腺苷(MTA)类似物的化学结构模型,并使用Molconn-Z统计的电子拓扑指数、形状指数和分子连接性指数作为受试化合物分子结构参数,结合多元线性回归(MLR)方法对MTA类似物的抑制活性进行了QSAR研究。所得模型的R和R2adj分别为0.862和0.711,表明该模型具有较好的预测和反映真实情况的能力。模型表明,MTA类似物的抑制活性与其所含硫和氮原子的电子拓扑指数以及分子形状指数相关,这为预测其他类似物的活性和设计新的抑制剂提供了理论依据。

甲硫腺苷磷酸化酶基因多态性与脑梗死的相关性

目的探讨甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)基因多态性及其与脑梗死发病的关系。方法以rs10118757位点为遗传标记,采用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测196例脑梗死患者和130例对照者的基因型。用Logistic回归分析基因多态性与脑梗死的关系。结果脑梗死组G等位基因频率较对照组明显增高(χ2=5.691,P=0.017),脑梗死组GA+GG基因型频率较对照组明显增高(χ2=85.267,P=0.000)。Logistic回归分析显示MTAP基因rs10118757位点GA+GG基因型是脑梗死发病的独立危险因素。结论 MTAP基因rs10118757位点多态性与脑梗死的发病可能有关,GG+AG基因型为脑梗死患者发病的独立危险因素。

启发式方法研究5’-甲硫腺苷核苷酶抑制剂定量构效关系

定量构效关系的研究已成为化学和环境科学研究中的一个前沿领域.对29个甲硫腺苷核苷酶抑制剂的结构进行优化得到描述其分子结构的5类描述符,并选择6个描述符运用启发式方法和RBFNN方法分别建立了描述29个5’-甲硫腺苷核苷酶的结构与其对5’-甲硫腺苷核苷酶的抑制活性之间的线性和非线性QSAR模型.RBFNN模型的训练集、预测集的相关系数(R2)分别为0.9681与0.9126.结果表明,RBFNN模型性能要优于HM模型,具有较好地预测和反映真实情况的能力,这为预测其他类似物的活性和设计新的抑制剂提供了理论依据.

甲硫腺苷磷酸化酶在直肠癌组织中的转录表达及意义

目的探讨甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)基因在直肠癌中的转录表达变化情况及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了21例新鲜直肠癌标本及相应癌旁组织中MTAP mRNA的表达情况。结果MTAP在89.5%(18/21)的直肠癌标本中高表达,而MTAP在癌旁对照组织中却不表达或转录水平降低9.5%(2/21),两者差异有显著性(P<0.05)。结论MTAP基因高表达在直肠癌中好像是特有的,这一发现可能有重要的临床意义。

缺血性脑卒中患者甲硫腺苷磷酸化酶基因的表达

目的:研究甲硫腺苷磷酸化酶(methylthioadenonine phosphorylase,MTAP)基因在缺血性脑卒中患者中的表达,探讨MTAP基因与缺血性脑卒中发病的关系。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)方法,检测并比较50例缺血性脑卒中患者和50例对照组人群MTAP基因的表达情况,分析MTAP表达与缺血性脑卒中的相关性。结果:MTAP基因在缺血性脑卒中患者与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:缺血性脑卒中的发病机制可能与MTAP基因表达无关。

超高效液相色谱-串联质谱法测定水稻叶片中甲硫腺苷含量

建立了一种水稻叶片中甲硫腺苷的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)定量检测方法,为水稻及其它植物生长发育的调控研究提供指导。水稻叶片粉碎后经70%的甲醇溶液2次提取,萃取液浓缩后用于上样分析。甲硫腺苷通过BEH C18(2. 1×100mm,1. 7μm)色谱柱进行梯度分离,0. 01%的乙酸铵(W/V)溶液-乙腈做为流动相。质谱检测采用正离子模式,扫描方式为多反应监测模式(MRM),分别选择2个特征离子通道(m/z:298. 31→136. 13和m/z:298. 31→61. 06)用于甲硫腺苷的定性和定量检测,甲硫腺苷的保留时间为1. 30min,空白样品无干扰影响含量测定。结果:甲硫腺苷在为50～1600ng/L,1～20μg/kg范围内线性良好(R2为0. 9992),方法检测限为0. 03ng/g,定量限为0. 09ng/g。低、中、高3个浓度下的平均介质效应分别为85. 3%、89. 2%、95. 6%,精密度小于5. 32%。该方法简便、快速、定量检测可靠、灵敏度高,能够满足植物中甲硫腺苷研究中大规模样品的快速分析。

精氨酸甲基转移酶5在甲硫腺苷磷酸化酶缺陷型恶性胸膜间皮瘤中的作用研究

目的探讨抑制精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)基因表达对甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)缺陷型恶性胸膜间皮瘤(MPM)细胞的联合杀伤作用。方法将MPM细胞分为MTAP阳性组(REN、H28、MPP89)和MTAP缺陷组(H2591、2452、H2052),以Hap-1 MTAP KO/WT为对照。采用PRMT5 siRNA、奎纳克林(0、0.5、1.0μmol/L)处理2组细胞,72 h后采用Western blot检测PRMT5蛋白表达水平及H4R3me2s甲基化蛋白水平。结晶紫染色法测定细胞克隆增殖能力。结果PRMT5 siRNA可下调MTAP阳性细胞株及MTAP缺陷细胞株PRMT5蛋白水平,引起MTAP缺陷型MPM细胞的H4R3me2s甲基化水平明显下降,而对MTAP阳性细胞的H4R3me2s甲基化水平无明显抑制。PRMT5 siRNA抑制MTAP缺陷型细胞的克隆增殖能力,而对MTAP阳性细胞克隆无明显抑制作用,差异有统计学意义(P=0.023,n=3)。奎纳克林可下调MTAP缺陷型细胞系(H2591、H2052)中PRMT5蛋白质表达水平,引起H4R3me2s甲基化水平降低及细胞克隆增殖能力下降,而对MTAP阳性细胞系(MPP89)中PRMT5和H4R3me2s均无下调作用,对细胞增殖无抑制,差异有统计学意义(P=0.018,n=3)。结论抑制PMRT5能联合杀伤MTAP缺陷型MPM,奎纳克林对部分MTAP缺陷型MPM可产生联合杀伤作用。

甲硫腺苷及血浆肝素结合蛋白在新生儿脓毒症早期诊断及死亡风险评估中的价值研究

目的:探讨甲硫腺苷(MTA)、肝素结合蛋白(HBP)在脓毒症早期诊断及死亡风险评估中的临床应用价值。方法:选取健康体检者40名、局部感染患儿40例、脓毒症患儿45例、重症脓毒症患儿40例、脓毒症休克患儿35例,测定各组患者血清MTA及HBP水平,并分析血清MTA及HBP水平与新生儿脓毒症严重程度的关系以及对死亡风险预测的准确率。结果:脓毒症休克组MTA、HBP水平明显高于健康对照组、局部感染组、脓毒症组及重症脓毒症组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。并且随着脓毒症的加重,APACHEⅡ评分也逐渐升高。MTA和HBP联合诊断脓毒症的效能明显高于MTA和HBP单指标的诊断效能。死亡组血清MTA及HBP水平明显高于存活组,血清MTA及HBP水平在预测脓毒血症死亡风险的准确率与目前广泛用于医院的APACHEⅡ评分类似。结论:MTA及HBP是脓毒症早期诊断的有效标志物,MTA及HBP联合检测有助于脓毒症的早期诊断,MTA及HBP的持续升高预示脓毒症新生儿死亡风险较高。

甲硫腺苷磷酸化酶基因在非小细胞肺癌中的转录表达及临床意义

目的 探讨甲硫腺苷磷酸化酶 (MTAP)基因在非小细胞肺癌中的转录表达变化情况及其临床意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测了 15例新鲜肺癌标本及相应癌旁组织中MTAPmRNA的表达情况。同时运用Western印迹法检测了MTAP蛋白质的表达情况。结果 MTAP在 73 3% ( 11/ 15 )的肿瘤标本中不表达或转录水平降低 ,而MTAP在癌旁对照组织中的表达率却高达 93 3% ( 14 / 15 ) ;对于 11例RT PCR分析认定低表达或不表达的样本 ,再通过Western印迹方法进一步验证 ,发现与RT PCR结果一致。另外 ,MTAP在肺腺癌和鳞癌中低表达现象差异无显著意义 ,但在中 /低分化肺癌中的低表达与高分化癌相比增高 ,差异有显著意义。

甲硫腺苷磷酸化酶基因单核苷酸多态性与汉族人群心肌梗死的关系

目的探讨甲硫腺苷磷酸化酶（MTAP）基因单核苷酸多态性（SNP）与中国汉族人群心肌梗死（MI）的关系。方法选取432例初发MI患者及430例同期住院的外科对照患者。选取MTAP基因9个标签SNP，采用PCR—SNPStream技术对所选标签SNP位点进行分型。并对分型结果进行统计学分析。结果在总体样本中未发现所选SNP位点与MI患病存在关联，经性别分层后，在男性组rs7027989位点的G等位基冈在MI组分布频率增高，差异有统计学意义（P=0．003）；在显性遗传模型中，GG基冈型较AG＋AA基因型的男性对象患MI的风险增加了26％，差异有统计学意义（P=0．005），经校正混杂因素后其统计学显著性仍然存在。结论MTAP基因同汉族人群MI患病相关。

结核分枝杆菌甲硫腺苷核苷酶的原核表达及活性分析

目的克隆、表达、鉴定结核分枝杆菌（MTB）Rv0091基因编码蛋白，分析酶活性，初步鉴定其功能。方法构建Rv0091基因原核表达质粒，在大肠杆菌BL21trxB进行表达，经IPTG诱导，Ni2＋-NTA柱纯化后获得可溶性蛋白，通过SDS-PAGE分析目的蛋白纯度、Westernblot进行免疫学活性鉴定、质谱分析重组蛋白相对分子质量、酶耦联法检测酶活性，分析酶学性质。结果成功构建Rv0091基因原核表达质粒，建立了可溶性蛋白最佳表达体系，获得纯度在95％以上的可溶性蛋白，Westernblot结果证实重组蛋白为结核分枝杆菌蛋白，质谱鉴定其相对分子质量与理论值基本一致，酶学活性实验证实重组蛋白能够分解底物5’一甲硫腺苷（MTA），酶学性质分析表明最适缓冲液为磷酸盐缓冲液和Hepes，酶的热稳定性较差，37℃为最适反应温度，最适pH为10～12。结论初步证明该重组蛋白在体外能够分解MTA，发挥甲硫腺苷核苷酶（MTAN）的作用，可能在MTB的代谢中起关键作用。

结直肠癌组织中甲硫腺苷磷酸化酶基因及蛋白水平的表达及意义

近年来随着人们生活习惯和饮食结构的改变，结直肠癌发病率呈上升趋势。研究表明。

5—甲基硫代腺苷对培养鼠脑星形胶质细胞反应性胶质化的抑制

观察5—甲基硫代腺苷（5—MTA），作为碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）受体的酪氨酸激酶抑制剂，对反应性星形胶质化的影响。原代培养大鼠星形胶质细胞（AS）行机械刮伤后，应用免疫组织化学及原位杂交法检测增生细胞核抗原（PCNA）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP)及其mRNA表达。结果：与对照组相比，损伤后1～2d，实验组AS胞体瘦小。突起短少，增生减弱（PCNA阳性细胞数减少，P＜001），GFAP-mRNA和GFAP表达减弱（P＜O01）。然而损伤后3d，两组的上述指标测定无明显差异。结论：5一MTA对反应性胶质化有可逆抑制作用。

甲基硫代腺苷对结肠癌RKO细胞增殖及RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录影响实验研究

目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌RKO细胞增殖的影响及其转录水平相关机制。方法:采用MTT比色技术及细胞计数作生存曲线的方法分析MTA对结肠癌RKO细胞增殖的影响,并采用Realtime PCR的方法分析RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5SrRNA)。结果:0.5、1、2、3mmol/L MTA作用16h后,RKO细胞的增殖能力分别为对照组的(84.1±4.5)%、(69.4±5.2)%、(55.3±3.8)%、(40.9±3.5)%(P均<0.01);MTA 0.5mmol/L作用4、8h后,RKO细胞tRNAs、5SrRNA的转录水平分别为对照组的0.584±0.033、0.624±0.035,0.453±0.025、0.372±0.027(P均﹤0.01)。结论:MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性,且对RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录的下调可能起到重要作用。