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溶藻弧菌二氢硫辛酰胺脱氢酶基因克隆及其生物信息学分析 被引量:9
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作者 庞欢瑛 陈立明 +4 位作者 蔡佳 汤菊芬 王蓓 吴灶和 简纪常 《广东海洋大学学报》 CAS 2014年第1期1-8,共8页
根据溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)的基因序列设计1对特异性引物。PCR扩增结果显示,DLD(GenBank登录号AGK62253)全长1 428 bp,共编码475个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列... 根据溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)的基因序列设计1对特异性引物。PCR扩增结果显示,DLD(GenBank登录号AGK62253)全长1 428 bp,共编码475个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子质量约为50.998 ku,等电点为5.51。细胞定位、SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0和SoftBerry-Psite预测结果显示,DLD位于细胞质中,在第29至30个氨基酸之间存在信号肽,不存在跨膜区,氨基酸序列含有1个Asn-糖基化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、6个酪蛋白激酶II磷酸化位点等多个活性位点。系统进化树结果显示,溶藻弧菌DLD与副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)聚为一簇。用Kyte-Doolittle亲水性参数、Karplus-Schulz柔韧性参数、Emini表面可及性参数和Jameson-Wolf抗原性参数分别预测,DLD可能的B细胞抗原优势表位分别是第5~10、106~110、120~125、158~163和175~180区段。利用SWISS-MODEL软件,模拟DLD亚基三维结构模型,结果显示其与大肠杆菌(Escherichia coli)DLD蛋白有相似构型。Kegg分析发现,其涉及糖酵解和糖异生等9条信号通路。从生物信息学角度验证了DLD作为弧菌共同抗原的可行性。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 基因克隆 硫辛酰胺脱氢酶 生物信息学分析
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枯草芽孢杆菌胞外二氢硫辛酰胺脱氢酶的纯化 被引量:2
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作者 武爱民 江正强 +1 位作者 韦赟 苏春元 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期16-19,共4页
采用弱阴离子树脂DEAE-52和蓝色琼脂糖凝胶FF层析对枯草芽孢杆菌产生的胞外二氢硫辛酰胺脱氢酶的粗酶液进行2步纯化,得到电泳纯的二氢硫辛酰胺脱氢酶,纯化倍数为59.7,收率为46.9%。通过SDS-PAGE法测得其亚基分子质量为64.6 ku,Superdex... 采用弱阴离子树脂DEAE-52和蓝色琼脂糖凝胶FF层析对枯草芽孢杆菌产生的胞外二氢硫辛酰胺脱氢酶的粗酶液进行2步纯化,得到电泳纯的二氢硫辛酰胺脱氢酶,纯化倍数为59.7,收率为46.9%。通过SDS-PAGE法测得其亚基分子质量为64.6 ku,Superdex 75法测得其分子质量为67.5 ku,表明枯草芽孢杆菌WY34产胞外二氢硫辛酰胺脱氢酶为单亚基蛋白质。本研究采用的二氢硫辛酰胺脱氢酶的纯化方法,简便且收率较高。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 硫辛酰胺脱氢酶 纯化 单亚基蛋白
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猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶的原核表达及其粘附相关功能初探 被引量:6
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作者 张静 孙建和 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2012年第2期34-40,共7页
目的:克隆、表达猪链球菌2型菌株ZY05719的膜蛋白二氢硫辛酰胺脱氢酶基因(hm6),分析其重组蛋白的生物学活性。方法:基于GenBank中S.suis P1/7SSU1634蛋白的基因序列设计引物,克隆ZY05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因并进行序列分析;构建p... 目的:克隆、表达猪链球菌2型菌株ZY05719的膜蛋白二氢硫辛酰胺脱氢酶基因(hm6),分析其重组蛋白的生物学活性。方法:基于GenBank中S.suis P1/7SSU1634蛋白的基因序列设计引物,克隆ZY05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因并进行序列分析;构建pET28a-hm6原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达,重组HM6蛋白即二氢硫辛酰胺脱氢酶用His亲和层析镍柱纯化后,通过SDS蛋白电泳鉴定分析并利用新西兰大白兔制备抗血清,研究其酶活性及其在介导猪链球菌粘附HEp-2细胞中的作用。结果:克隆了1 761bp的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因,纯化的70kD重组融合蛋白具有良好的酶活性和免疫原性,且在介导猪链球菌粘附HEp-2细胞中具有作用。结论:成功克隆、表达了ZY05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因,初步揭示了其生物学活性,为深入研究二氢硫辛酰胺脱氢酶在猪链球菌致病机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌 硫辛酰胺脱氢酶 活性 粘附特性
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脑组织硫辛酰胺脱氢酶组化染色初探
4
作者 田美玲 金国华 +2 位作者 万人欣 倪衡健 武义鸣 《南通医学院学报》 1995年第4期515-517,共3页
一氧化氮(NO)是一新的信使分子,由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸形成。在脑组织,已证实NOS就是依赖还原型辅酶Ⅱ的硫辛酰胺脱氢酶(ND)。因此在脑组织,经济、简单而又实用的ND组化染色可以替代昂贵、繁琐的NO... 一氧化氮(NO)是一新的信使分子,由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸形成。在脑组织,已证实NOS就是依赖还原型辅酶Ⅱ的硫辛酰胺脱氢酶(ND)。因此在脑组织,经济、简单而又实用的ND组化染色可以替代昂贵、繁琐的NOS免疫组化染色来间接知道NO的分布。本文对改进了的ND组化染色方法及其影响的几个关键问题作了介绍和探讨。 展开更多
关键词 一氧化氮 硫辛酰胺脱氢酶 组织化学染色 脑组织
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Angeli盐对二氢硫辛酰胺脱氢酶的可逆性灭活作用(英文) 被引量:1
5
作者 晏良军 刘莉 Michael J Forster 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期341-350,共10页
二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLDH)是线粒体3个α-酮酸脱氢酶复合物(丙酮酸脱氢酶复合物、α-酮戊二酸脱氢酶复合物、支链氨基酸脱氢酶复合物)的关键成分,属于吡啶依赖性二硫化物氧化还原酶类,对活性氮自由基(re... 二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLDH)是线粒体3个α-酮酸脱氢酶复合物(丙酮酸脱氢酶复合物、α-酮戊二酸脱氢酶复合物、支链氨基酸脱氢酶复合物)的关键成分,属于吡啶依赖性二硫化物氧化还原酶类,对活性氮自由基(reactive nitrogen species,RNS)和活性氧自由基(reactive oxygenspecies,ROS)造成的氧化修饰非常敏感。本研究探索由Angeli盐所产生的RNS对DLDH的修饰作用及机制。将大鼠脑线粒体分离,与不同浓度的Angeli盐作用,应用分光光度计、蓝色胶、基于二维电泳的蛋白质组学等手段,测定DLDH酶活性。结果显示,Angeli盐呈浓度依赖性方式灭活DLDH,过氧亚硝酸盐在同样条件下对DLDH酶活性无抑制作用,说明Angeli盐对DLDH的作用可能是非随机的。由于Angeli盐在生理pH条件下可分解为硝基阴离子(nitroxyl anion,HNO)和一氧化氮(nitric oxide,NO),故进一步分析了Angeli盐对DLDH的灭活作用是否由HNO引起,结果证实确实如此。最后,二维电泳Western blot结果显示,Angeli盐对DLDH的灭活伴随着DLDH蛋白质的S-亚硝基硫醇形成,提示S-亚硝基硫醇化可能是导致DLDH酶失活的原因。综上,本研究为研究Angeli盐灭活DLDH的机制提供了新证据。 展开更多
关键词 Angeli盐 硫辛酰胺脱氢酶 线粒体 硝基阴离子(HNO) S-硝基化作用
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对称性肢端角化病皮损中脂肪酸结合蛋白5及二氢硫辛酰胺脱氢酶表达 被引量:3
6
作者 杨珮珮 彭晶 +4 位作者 于作忠 施歌 黎兆军 张国学 樊翌明 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期844-848,共5页
目的:探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)及二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)在对称性肢端角化病中的表达和意义。方法收集9例对称性肢端角化病患者腕部皮损及其周围皮肤活检标本,9例健康人腕部皮肤为对照,用逆转录 PCR(RT-PCR)及免疫组化法检... 目的:探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)及二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)在对称性肢端角化病中的表达和意义。方法收集9例对称性肢端角化病患者腕部皮损及其周围皮肤活检标本,9例健康人腕部皮肤为对照,用逆转录 PCR(RT-PCR)及免疫组化法检测 FABP5及 DLD 表达水平。结果 RT-PCR 显示,FABP5 mRNA 及 DLD mRNA 表达在对称性肢端角化病患者腕部皮损、皮损周围皮肤、健康人腕部皮肤3组间差异均无统计学意义(P 〉0.05)。免疫组化显示,对称性肢端角化病皮损中 FABP5阳性染色范围和强度增加,角质层、颗粒层、棘层均有强染色;而皮损周围皮肤中角质层、颗粒层及棘层弱阳性染色,健康对照皮肤中仅有棘层和基底层弱阳性染色。对称性肢端角化病皮损中 DLD 表达减少,仅在角质层和少数病例棘层表达;皮损周围及健康人皮肤表皮全层均有 DLD 阳性染色,胞核、胞质均呈深棕色。结论对称性肢端角化病皮损中 FABP5高表达可能参与角质形成细胞异常分化过程,而 DLD 表达下调提示存在能量代谢失衡。 展开更多
关键词 角化病 脂肪酸结合蛋白质类 硫辛酰胺脱氢酶 对称性肢端角化病
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一例DLD基因新变异致二氢硫辛酰胺脱氢酶缺乏症患儿的临床及遗传学分析 被引量:1
7
作者 毋盛楠 陈永兴 +2 位作者 陈琼 沈凌花 卫海燕 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2020年第12期1356-1359,共4页
目的对1例二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)缺乏症患儿DLD基因进行变异分析,明确其致病原因。方法应用全外显子测序及Sanger测序法对患儿DLD基因进行变异检测。结果测序结果显示患儿DLD基因存在c.704_705delTT(p... 目的对1例二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)缺乏症患儿DLD基因进行变异分析,明确其致病原因。方法应用全外显子测序及Sanger测序法对患儿DLD基因进行变异检测。结果测序结果显示患儿DLD基因存在c.704_705delTT(p.Leu235Argfs*8)和c.1058T>C(p.Ile353Thr)复合杂合变异,其表型正常的父母分别携带c.704_705delTT(p.Leu235Argfs*8)杂合变异和c.1058T>C(p.Ile353Thr)杂合变异,患儿弟弟未携带上述2个变异。其中c.1058T>C(p.Ile353Thr)变异为已报道的致病变异;c.704_705delTT(p.Leu235Argfs*8)变异为未报道过的新变异,参照美国医学遗传学与基因组学学会评级指南提示其为致病性变异(PVS1+PM2+PP4)。结论DLD基因c.704-705delTT和c.1058T>C变异为该患儿的致病原因,基因检测结果可为临床诊断、家系遗传咨询和产前诊断提供依据。 展开更多
关键词 硫辛酰胺脱氢酶 DLD基因 乳酸性酸中毒 低血糖 肝损害
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磷化氢的毒理及害虫对磷化氢的抗性机制研究进展 被引量:1
8
作者 王争艳 张闪 +1 位作者 刘之源 常珍珍 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期422-430,共9页
近60年来,熏蒸剂磷化氢被广泛用于储藏物害虫的防治。但是,长期、不合理地使用磷化氢,导致储藏物害虫抗药性的广泛产生。了解磷化氢的毒理机制可以为磷化氢抗性机制研究提供思路。早期的研究发现,磷化氢通过干扰神经传导、抑制能量代谢... 近60年来,熏蒸剂磷化氢被广泛用于储藏物害虫的防治。但是,长期、不合理地使用磷化氢,导致储藏物害虫抗药性的广泛产生。了解磷化氢的毒理机制可以为磷化氢抗性机制研究提供思路。早期的研究发现,磷化氢通过干扰神经传导、抑制能量代谢和破坏氧化还原系统,引起害虫死亡;但近年的研究表明,磷化氢致死害虫的主要机制是抑制能量生成和通过干扰氧化还原系统来增加氧化损伤。早期的研究发现,害虫对磷化氢的抗性机制主要包括主动排斥磷化氢、保护性昏迷和增强解毒酶活性。近年来,随着基因组学、蛋白组学和代谢组学的应用,相继出现一些新的磷化氢抗性机制,如穿透抗性、磷化氢作用靶标敏感性降低、能量代谢模式调整。越来越多的研究表明,靶标二氢硫辛酰胺脱氢酶突变以及抗氧化酶和解毒酶活性增强是主要的抗性机制,而能量代谢模式调整可能是抗性形成初期抵抗磷化氢不良影响的重要机制。采用基因渐渗的方法研究害虫磷化氢抗性突变的适合度代价可以更精准地预测抗性突变的进化方向。研究害虫的磷化氢抗性机制和抗性突变的进化潜力不仅有助于理解害虫抗药性的形成和生物的进化,同时对害虫的磷化氢抗性监测和治理有重要的意义。 展开更多
关键词 磷化 抗药性 硫辛酰胺脱氢酶 氧化还原 能量代谢
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铜绿假单胞菌二氢硫辛酸酰胺脱氢酶的重组表达及其与脂蛋白(a)的相互作用 被引量:1
9
作者 王洋 李文龙 +5 位作者 刘恩 王瑜 霍苏馨 白文成 高玉敏 韩润林 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期172-177,共6页
【目的】二氢硫辛酸酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,Lpd)是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)表面的一种纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体,旨在研究Lpd与脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]以及Plg之间的相互作用。【方法... 【目的】二氢硫辛酸酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,Lpd)是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)表面的一种纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体,旨在研究Lpd与脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]以及Plg之间的相互作用。【方法】用大肠杆菌表达rLpd及其突变分子(rLpd K476A、rLpd K477A、rLpdΔKKR),用酶联免疫吸附实验(ELISA)、亲和色谱层析及Western blot等技术检测rLpd及其突变分子与Lp(a)、Plg的相互作用。【结果】ELISA及亲和色谱层析实验结果表明,rLpd可以与Lp(a)结合但不与LDL结合,Lp(a)与rLpdΔKKR的结合能力显著低于其与rLpd的结合能力。1 mmol/L的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)对rLpd与Lp(a)的结合有显著的抑制作用。1 000μg/L的Lp(a)对rLpd与Plg的结合起到显著的抑制作用。【结论】Lpd能够与Lp(a)特异性结合,其476和477两个相邻的赖氨酸残基是与Lp(a)结合的主要位点,Lp(a)可以竞争性地抑制rLpd与Plg的结合。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 硫辛酰胺 脂蛋白(a) 纤溶
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中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶基因多态性 被引量:10
10
作者 邵明 刘焯霖 +2 位作者 陈彪 陶恩祥 潘锡榜 《中山医科大学学报》 CSCD 1998年第1期23-26,共4页
目的:确定中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ[NAD(P)H:]醌氧化还原酶(NQO1)基因cDNA的609位点C→T(C609→T)突变的频率分布。方法:利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术分... 目的:确定中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ[NAD(P)H:]醌氧化还原酶(NQO1)基因cDNA的609位点C→T(C609→T)突变的频率分布。方法:利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术分析了81名正常中国汉族人NQO1基因cDNA的609位点的多态性。结果:中国汉族人NQO1基因的C609→T的频率为0426;基因型T609/T609、C609/C609与C609/T609的比率分别为017、032和051。结论:该结果提示中国汉族人NQO1基因的C609→T位点的多态性分布规律与西方人有明显的差异。 展开更多
关键词 硫辛酰胺脱氢酶 多态性 依赖还原型 汉族
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大鼠肺一氧化氮合酶阳性神经结构 被引量:3
11
作者 李光千 王健本 彭宣林 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期21-23,共3页
以还原型尼克酰腕腺嘌呤二核苷酸磷酸硫辛酰胺脱氢酶组织化学技术研究大鼠肺一氧化氮合酶阳性神经结构。结果表明:(1):气管、支气管树系统壁内神经节部分神经细胞为一氧化氮合酶阳性神经细胞;(2)部分强阳性神经细胞的突起穿越神经节延... 以还原型尼克酰腕腺嘌呤二核苷酸磷酸硫辛酰胺脱氢酶组织化学技术研究大鼠肺一氧化氮合酶阳性神经结构。结果表明:(1):气管、支气管树系统壁内神经节部分神经细胞为一氧化氮合酶阳性神经细胞;(2)部分强阳性神经细胞的突起穿越神经节延向管壁粘膜组织或肺组织;(3)在各级肺动、静脉及肺组织内分布有不同密度的一氧化氮合酶阳性神经纤维。 展开更多
关键词 硫辛酰胺脱氢酶 一氧化氮 神经节
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丙酮酸脱氢酶E1-α缺乏症产前诊断1例
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作者 焦娇 乔凤昌 +6 位作者 张翠平 王艳 吴云 顾海磊 林迎春 许争峰 胡平 《中华围产医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期246-249,共4页
本文报道了1例由产前超声提示胎儿脑部发育异常、引产后全外显子组测序及Sanger验证确诊的丙酮酸脱氢酶E1-α缺乏症病例。孕25周+1时超声提示胎儿双侧侧脑室轻度增宽,颅内出血可能,复查MRI提示胎儿胼胝体缺如、双侧侧脑室增宽、室旁囊... 本文报道了1例由产前超声提示胎儿脑部发育异常、引产后全外显子组测序及Sanger验证确诊的丙酮酸脱氢酶E1-α缺乏症病例。孕25周+1时超声提示胎儿双侧侧脑室轻度增宽,颅内出血可能,复查MRI提示胎儿胼胝体缺如、双侧侧脑室增宽、室旁囊肿。经遗传咨询及慎重考虑后,胎儿父母选择终止妊娠。为明确病因,取引产胎儿皮肤组织进行全外显子组测序,发现胎儿PDHA1基因的10号外显子发生移码变异c.924_930dup(p.R311Gfs*5),Sanger测序验证该位点结果与全外显子组测序结果一致,且为新发的致病性变异,确诊为丙酮酸脱氢酶E1-α缺乏症。 展开更多
关键词 酸中毒 乳酸性 丙酮酸(硫辛酰胺) 全外显子测序 产前诊断
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双孢蘑菇部分cDNA文库的构建及筛选 被引量:4
13
作者 王泽生 陈美元 +4 位作者 廖剑华 卢政辉 郭仲杰 李洪荣 M.P.Wach 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期63-65,共3页
构建了双孢蘑菇Agaricus bisporus菌株AA和A41的部分cDNA文库,其滴度分别为1.0?05 pfu/ml和6.0×104pfu/ml。用地高辛标记的丛生差异片段探针对文库进行筛选,分别获得5个和3个阳性克隆。
关键词 双孢蘑菇 丛生变异 阳性克隆 硫辛酰胺脱氢酶 CDNA文库
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幽门螺杆菌诱导的差异蛋白基因在胃癌组织中的表达
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作者 徐文杰 周建奖 +2 位作者 赵艳 谢渊 陈娴 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期685-687,共3页
目的研究幽门螺杆菌(Hp)诱导的差异蛋白基因在胃癌中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法实时荧光定量RT-PCR检测Hp诱导的乳酸脱氢酶(LDH)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)、mRNA前体处理因子19同系物(PRP/PSO4)、ATP合酶和Ran-特异性GTP... 目的研究幽门螺杆菌(Hp)诱导的差异蛋白基因在胃癌中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法实时荧光定量RT-PCR检测Hp诱导的乳酸脱氢酶(LDH)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)、mRNA前体处理因子19同系物(PRP/PSO4)、ATP合酶和Ran-特异性GTP酶活化蛋白(RanGAP)等差异蛋白基因在70例胃癌组织、淋巴结组织及癌旁组织中的表达,分析其表达与临床病理参数的关系。结果 LDH、DLD、PRP/PSO4和ATP合酶基因在胃癌组织中的表达量分别是癌旁组织的3.32,3.36,4.37及2.73倍(P均<0.05),在淋巴结组织中的表达量分别是癌旁组织的2.91,2.72,3.16及2.46倍(P均<0.05);LDH、DLD基因表达与肿瘤大小及生存时间、pTNM分期及伴有淋巴结转移有关(P均<0.05),PRP/PSO4及ATP合酶仅与淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 LDH、DLD、PRP/PSO4和ATP合酶基因在胃癌及淋巴结组织中高表达,其LDH和DLD的高表达与胃癌患者预后不良相关。 展开更多
关键词 胃癌 乳酸 硫辛酰胺脱氢酶 ATP合 Ran-特异性GTP活化蛋白
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NAC抑制镉离子诱导的小鼠精子DLD酪氨酸磷酸化作用 被引量:2
15
作者 文艺 杨强震 +6 位作者 李思思 陈俊 刘旭睿 刘桓 李培飞 王立蕊 李新红 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2019年第2期37-46,共10页
重金属镉是环境中广泛存在的污染物,对机体生殖系统有很强的毒性作用。镉能诱导精子细胞蛋白二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)发生酪氨酸磷酸化修饰,但机制尚不清楚。本研究利用蛋白免疫印迹技术探讨镉离子对小鼠生殖系统的毒性作用、镉诱导生... 重金属镉是环境中广泛存在的污染物,对机体生殖系统有很强的毒性作用。镉能诱导精子细胞蛋白二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)发生酪氨酸磷酸化修饰,但机制尚不清楚。本研究利用蛋白免疫印迹技术探讨镉离子对小鼠生殖系统的毒性作用、镉诱导生殖细胞蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰的机理及抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对精子的保护作用。结果表明,镉离子能减弱生殖细胞的能量代谢水平,从而抑制睾丸的生长发育并导致产仔数下降;镉离子能特异性诱导精子DLD蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰,且与钙离子具有协同作用。此外,NAC可在体外有效抑制DLD蛋白发生酪氨酸磷酸化从而抑制镉的生殖毒性,并恢复精子能量水平和活力参数。本研究从NAC抑制镉离子诱导特异性蛋白磷酸化修饰的角度,揭示NAC保护作用机制,旨在为镉离子生殖毒理学研究及疾病防治提供理论基础。 展开更多
关键词 小鼠精子 硫辛酰胺脱氢酶 磷酸化 N-乙酰-L-半胱氨酸
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参麦注射液保护氧化损伤心肌细胞线粒体的机制研究 被引量:12
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作者 赵誉 张凤 +3 位作者 赵筱萍 袁玮 张金华 王毅 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期507-513,共7页
目的:探究参麦注射液对氧化损伤心肌细胞的保护作用及其对线粒体能量代谢过程的影响。方法:采用叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导构建H9c2心肌细胞氧化损伤模型。分别采用MTT法和化学发光法检测参麦注射液对细胞存活率和ATP水平的影响;采用Cl... 目的:探究参麦注射液对氧化损伤心肌细胞的保护作用及其对线粒体能量代谢过程的影响。方法:采用叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导构建H9c2心肌细胞氧化损伤模型。分别采用MTT法和化学发光法检测参麦注射液对细胞存活率和ATP水平的影响;采用Clark氧电极检测参麦注射液对细胞有氧呼吸速率的调节作用;采用ELISA法检测丙酮酸及丙酮酸脱氢酶(PDH)的含量及活性;采用蛋白质印迹法检测丙酮酸脱氢酶亚基(PDHA1)含量;采用实时定量RT-PCR检测丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1) mRNA的表达。结果:与氧化损伤模型比较,参麦注射液可有效提高心肌细胞存活率和ATP水平(均P<0.01),提高细胞氧呼吸速率,减少丙酮酸含量,并提高PDH活性(P<0.05或P<0.01)。在分子水平上,参麦注射液可提高PDHA1蛋白表达(P<0.05),并具有降低PDK1 mRNA表达的趋势(P>0.05)。结论:参麦注射液可有效保护氧化损伤心肌细胞,其机制可能与提高PDH活性、减少丙酮酸堆积,从而维持线粒体功能稳定和细胞能量代谢稳定有关。 展开更多
关键词 肌细胞 心脏/药物作用 肌细胞 心脏/病理学 线粒体 心脏/病理学 氧/代谢 丙酮酸(硫辛酰胺) 麦冬/药理学 人参/药理学
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基于生物信息学分析靶向铜死亡相关基因治疗心源性脑卒中
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作者 王咪 王嘉雨 +3 位作者 彭芊语 何衡花 李经博 齐瑞 《卒中与神经疾病》 2024年第2期167-176,共10页
目的基于生物信息学和机器学习探究靶向心源性脑卒中的铜死亡相关特征基因,分析特征基因与心源性脑卒中之间的潜在关系。方法通过基因表达综合数据库(Gene expression omnibus,GEO)获取心源性脑卒中患者的相关数据集,基于该数据集对铜... 目的基于生物信息学和机器学习探究靶向心源性脑卒中的铜死亡相关特征基因,分析特征基因与心源性脑卒中之间的潜在关系。方法通过基因表达综合数据库(Gene expression omnibus,GEO)获取心源性脑卒中患者的相关数据集,基于该数据集对铜死亡相关基因进行差异性分析,采用聚类分析和机器学习筛选铜死亡特征基因,通过接收者操作特征曲线验证特征基因的准确性和构建疾病预测模型以预测心源性脑卒中患病的风险;利用免疫细胞浸润分析和基因集富集分析探究疾病和铜死亡亚型与免疫微环境的关系及铜死亡特征基因与免疫细胞的相关性和生理病理学过程。结果共筛选出3个铜死亡差异特征基因分别为丙酮酸脱氢酶E1亚基alpha 1(Pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDHA1)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)、溶质载体家族31成员1(Solute carrier family 31 member 1,SLC31A1),3个特征基因表现出良好的准确性,并且其构建的疾病预测模型对心源性脑卒中的患病风险有良好的预测性。免疫浸润分析发现,心源性脑卒中与巨噬细胞、肥大细胞具有较强的相关性,3个特征基因同样与巨噬细胞、肥大细胞有一定的相关性,并且与嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和γδT细胞有很强的相关性。基因集富集分析表明,铜死亡主要与免疫炎症反应、三羧酸循环、丙酮酸代谢和神经营养因子信号传导通路集ErbB受体酪氨酸激酶家族(ErbB receptor tyrosine kinase family,ERBB)信号通路等密切相关。结论铜死亡特征基因PDHA1、DLD、SLC31A1和心源性脑卒中与免疫微环境之间存在很强的相关性,为心源性脑卒中的病理机制提供了依据,并为靶向药物的开发提供了方向,对心源性脑卒中的认识和治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 心源性脑卒中 铜死亡 丙酮酸E1亚基alpha 1 硫辛酰胺脱氢酶 溶质载体家族31成员1 生物信息学
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靶向铜死亡相关基因治疗类风湿关节炎生物信息学分析及干预中药的预测 被引量:8
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作者 杨会军 郭响 +4 位作者 李伟青 苏小军 田雪梅 王海东 金芳梅 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第13期4253-4265,共13页
目的探索铜死亡相关基因在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的表达及其作用机制,并筛选通过靶向铜死亡基因治疗RA的潜在中药。方法通过检索GEO数据库获得RA芯片数据,分析铜死亡基因在RA中表达水平;依据铜死亡基因表达情况构建... 目的探索铜死亡相关基因在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的表达及其作用机制,并筛选通过靶向铜死亡基因治疗RA的潜在中药。方法通过检索GEO数据库获得RA芯片数据,分析铜死亡基因在RA中表达水平;依据铜死亡基因表达情况构建高表达亚型和低表达亚型,并进行差异分析,筛选出与RA相关的铜死亡基因。按不同分组对基因表达矩阵进行免疫浸润分析,并分析免疫浸润细胞与铜死亡基因之间的相关性。利用Kobas在线工具对差异基因进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。通过Herb数据库检索靶向铜死亡基因治疗RA的潜在中药及其有效成分,使用Autodock vina软件模拟药物与铜死亡靶蛋白结合活性。通过收集临床样本验证铜死亡相关基因在RA中表达水平。结果FDX1、DLD、DLAT、LIAS、GLS、LIPT1和PDHB 7个铜死亡相关基因在RA中差异表达。免疫浸润分析结果显示,在RA中活化的记忆CD4+T细胞、静息自然杀伤(natural killer,NK)细胞和中性粒细胞与铜死亡相关。富集分析结果显示,铜死亡主要与趋化因子信号通路、Toll样受体信号通路、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、核因子-κB信号通路、p53信号通路和过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路相关。虎杖叶可能是靶向铜死亡基因治疗RA的潜在中药。分子对接结果显示,虎杖叶有效成分均有与铜死亡靶蛋白结合的可能。DLD、GLS、FDX1、DLAT在RA患者外周血单个核细胞中m RNA表达水平升高。结论铜死亡相关基因表达水平与RA病程进展相关,并预测虎杖叶是潜在靶向铜死亡基因治疗RA的药物,为RA的临床诊疗及药物开发提供了新的方向和理论基础。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 铜死亡相关基因 免疫浸润 生物信息学 虎杖叶 硫辛酰胺脱氢酶 谷氨酰胺 铁氧还原蛋白1 硫辛酸转乙酰化
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枫糖尿病患者家系基因突变分析及产前诊断 被引量:5
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作者 杨楠 韩连书 +7 位作者 叶军 邱文娟 张惠文 龚珠文 张雅芬 顾学范 朱建幸 张立琴 《中华围产医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第8期494-499,共6页
目的分析枫糖尿病(maples yrup urinedisease,MSUD)患者家系基因突变情况以及对产前诊断的作用。方法2005年至2010年间,共诊断4例MSUD患儿,其中男婴和女婴各2例,发病年龄分别为生后2、5、10和26d。利用聚合酶链反应技术扩增BCKDHA... 目的分析枫糖尿病(maples yrup urinedisease,MSUD)患者家系基因突变情况以及对产前诊断的作用。方法2005年至2010年间,共诊断4例MSUD患儿,其中男婴和女婴各2例,发病年龄分别为生后2、5、10和26d。利用聚合酶链反应技术扩增BCKDHA、BCKDHB基因外显子编码区序列,直接测序分析4例患儿BCKDHA、BCKDHB基因的突变情况。在患儿母亲再次妊娠16~20周时抽取羊水细胞,对培养后的羊水细胞进行相应基因突变检测,用于产前诊断。结果4例患儿中共检测到6种不同的基因突变,包括4种新突变(c.308T〉C、C.562G〉T、c.1279C〉G、c.12801291dell2)。其中在3个家系的BCKDHA基因上检测到5种突变(C.308T〉C、C.562G〉T、C.868G〉A、C.1279C〉G及c.1280—1291de112),另一个家系在BCKDHB基因上检测到C.853C〉T1个突变。4例患儿母亲再次妊娠羊水细胞中均检测到1个先证者携带的突变,提示胎儿为MSUD杂合子。结论通过家系BCKDHA、BCKDHB基因分析,初步了解MSUD患者的基因突变情况,并成功应用于产前诊断,为MSUD家庭提供帮助。 展开更多
关键词 枫糖尿病 3-甲基-2-氧代丁酸(硫辛酰胺) 系谱 产前诊断
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