乙酰肝素酶、硫酸乙酰肝素和多配体蛋白聚糖-1在肺癌患者血清中的表达及诊断价值

目的探讨多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)、硫酸乙酰肝素(HS)以及乙酰肝素酶(HPA)在非小细胞肺癌(NSCLC)及小细胞肺癌(SCLC)患者血清中的水平及其对诊断及预后的预测价值。方法收集10例健康对照组及76例肺癌患者的血清标本,通过ELISA方法检测血清中HS、SDC-1、HPA表达水平。采用Mann-Whitney U检验进行组间比较。结果肺癌患者血清HS、SDC-1及HPA含量均高于健康对照组(P<0.05);HS、HPA单因素用于诊断肺癌时的AUC分别为0.819和0.930,HS、SDC-1、HPA三者联合诊断肺癌时AUC为0.974。结论HS、SDC-1、HPA三者联合检测对肺癌的诊断及预后具有较好的预测价值。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖介导人畜共患病病毒感染机制的研究进展

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)由多个带负电荷的硫酸乙酰肝素(HS)多糖附着在细胞表面组成。HSPGs通过调控多种信号分子与其受体结合,从而参与并调节体内许多生物反应过程。由于其分布广泛且带负电荷的特性,HSPGs被许多微生物病原体,特别是病毒作为附着在宿主细胞上的辅助因子,成为病毒感染宿主的关键因子。本文简要综述HSPGs与多种人畜共患病病毒的相互作用方式,并重点介绍其作为辅助受体的机制,有望为人畜共患病防治提供一定的理论基础。

下调硫酸乙酰肝素酶减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制

目的探讨硫酸乙酰肝素酶(heparinase,HPSE)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(Myocardial Ischemia-Reperfusion,MI/R)的影响及机制。方法选取60只SD大鼠,随机分为对照组、I/R组,I/R+shRNA-NC组和I/R+Heparanase-shRNA组,每组15只。对照组开胸后仅穿线但不结扎,其他各组大鼠均采用冠脉左前降支结扎手术制备MI/R模型。采用蛋白质印迹实验(WB)检测各组大鼠心脏功能及心肌损伤标记物;采用HE染色和TUNEL染色观察大鼠心肌病理情况;采用WB检测凋亡相关蛋白(Caspsae-3、Bax、Bcl-2)和线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein response,UPRmt)标志蛋白(LonP_(1)、HSP70)的表达情况;采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血中白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量水平。结果HE染色发现,对照组大鼠心肌组织、肌外膜、心肌纤维均完整且正常;I/R组大鼠和I/R+shRNA-NC组大鼠心肌纤维弯曲,肌红蛋白溶解,同时心肌肌细胞核固缩、溶解,肌束膜破裂;I/R+Heparanase-shRNA组大鼠心肌外膜较为完整、心肌纤维弯曲显著改善。相比对照组,I/R组肌酸激酶同工酶(CK-Mb)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、Mb、Caspase-3蛋白、Bax蛋白、MDA、IL-6、TNF-α、HSP70水平显著升高,HR、LVEF、LVWT、Bcl-2蛋白、SOD、LonP_(1)蛋白水平显著降低,差异均有统计学意义;与I/R+shRNA-NC组比较,I/R+Heparanase-shRNA组CK-Mb、cTnI、Mb、Caspase-3蛋白、Bax蛋白、MDA、IL-6、TNF-α水平显著降低,而HR、LVEF、LVWT、Bcl-2蛋白、SOD、HSP70和LonP_(1)水平显著升高,差异均有统计学意义。结论下调HPSE可能通过抑制UPRmt信号通路减轻细胞氧化应激、炎症反应及细胞凋亡,从而缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤。

肝素与硫酸乙酰肝素相关抗肿瘤药物的研究进展

随着对葡糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAGs)的结构和相关作用机制研究不断深化,硫酸乙酰肝素(heparan sul-fate,HS)及其结构类似物在抗肿瘤侵袭转移、抗肿瘤血管生成以及抗炎等方面的研究也成为热点。在以往研究中发现肝素,尤其是低分子量肝素(low molecular weight heparin,LMWHs)对肿瘤有一定的抑制作用。该文综述了肝素和HS抗肿瘤活性关键结构和相关机制的研究进展,肝素类似物有望成为新的抗肿瘤药物。

硫酸乙酰肝素酶基因表达及其内切酶活性调控对肿瘤细胞浸润、转移作用的影响

硫酸乙酰肝素酶是迄今为止在哺乳动物细胞中发现的唯一可以剪切胞外和细胞表面硫酸乙酰肝素多糖侧链的葡糖苷酸内切酶.在恶性肿瘤、炎症细胞以及胚胎组织等具有侵袭性组织中有较高的表达,肿瘤病人病灶部位的肝素酶mRNA表达量越高,病人存活期越短.在正常生理条件下,肝素酶基因及其表达蛋白的活性受到启动子甲基化、变化转录剪切、转录因子、蛋白质加工、pH环境以及免疫因子释放等多种内源因素的精确调控,以防止机体非正常恶性变化的发生.目前就有关乙酰肝素酶基因表达调控、酶活性的调控机制作详尽的专述.

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对C_3H小鼠乳腺癌移植瘤的抑制作用及其机制

目的观察硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)对C3H小鼠乳腺癌移植瘤的抑制作用及其机制。方法建立肿瘤模型并随机分为5组:生理盐水组、HSPG组(5、10、50mg.kg-1)及阳性对照组,各组动物自模型建立d2开始腹腔注射给药治疗22d并观察记录肿瘤体积。d24处死动物,称量肿瘤重量,计算胸腺指数及脾指数,使用原位凋亡检测法(TUNEL)检测HSPG对肿瘤细胞凋亡的影响,免疫组化检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果HSPG可明显抑制肿瘤生长,而不降低胸腺指数和脾指数。TUNEL结果HSPG组肿瘤组织中出现大量蓝黑色凋亡细胞,且明显多于生理盐水组,HSPG组肿瘤组织的VEGF的表达明显降低。结论HSPG对C3H小鼠移植性乳腺癌生长具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡及抑制VEGF表达有关。

不同来源的硫酸乙酰肝素的制备及理化性质研究

目的从不同来源制备硫酸乙酰肝素 (HS) ,并测定其理化性质。方法利用酶解法提取分离糖胺聚糖混合物 ,采用乙醇分级沉淀和离子交换柱色谱、凝胶过滤柱色谱等方法将HS纯化 ,醋酸纤维素薄膜电泳 (CAME)测定其纯度。结果所得各种来源的HS在CAME电泳显示一条带 ,且理化性质、生物活性和红外光谱各不相同。

转移性腺样囊性癌细胞纤连蛋白和硫酸乙酰肝素蛋白多糖mRNA的表达

目的 :比较纤连蛋白 (FN)和硫酸乙酰肝素蛋白多糖 (HSPG)mRNA在高转移腺样囊性癌细胞系ACCM和低转移细胞系ACC2 的表达 ,探讨其与腺样囊性癌转移的关系。方法 :获取培养第 2、4、6、8天的ACC2 和ACCMmRNA样本 ,合成cDNA ,用实时RT -PCR测定FN和HSPG的量。结果 :培养第 2、4、6、8天ACCMFNmRNA的值为 0 .14、0 .2 5、1.5 0、1.6 5 ,而ACC2 的值为 0 .0 3、0 .0 6、0 .0 9、0 .18。HSPGmRNA在ACCM第 2、4、6、8天的值分别为 0 .35、0 .32、0 .4 1、0 .6 5 ,而ACC2 为 0 .0 7、0 .10、0 .2 9、0 .75。ACCM细胞的FN和HSPGmRNA表达明显高于ACC2 。结论 :ACCM的FN和HSPGmRNA高表达与肿瘤转移表型关系密切。

硫酸乙酰肝素蛋白多糖基因多态性与糖尿病肾病关系的研究

目的 探讨硫酸乙酰肝素蛋白多糖基因 (HSPG)多态性与中国汉族人 2型糖尿病肾脏并发症之间的关系。方法 应用限制性内切酶 Bam HI的 PCR- RFL P法 ,检测 190例非 DM对照和 136例 2型糖尿病伴或不伴肾病者的 HSPG多态性基因型。结果 正常白蛋白尿组和异常 (微量和大量 )白蛋白尿组之间 Bam HI HSPG2等位基因频率和基因型频率无显著性差异 ,非 DM对照组和糖尿病组之间 Bam HI HSPG2等位基因频率无显著性差异 ,但基因型频率的差异有统计学意义。结论 中国汉族人 Bam HI HSPG2多态性与 2型糖尿病肾脏并发症的发生无显著性相关关系 。

硫酸乙酰肝素及其相关药物的研究新进展

硫酸乙酰肝素是存在于所有动物组织细胞及胞外基质中的一类多糖物质,它通过与蛋白的相互作用参与各种生理病理过程,而其结构的改变,特别是硫酸化程度的改变,可干扰其与蛋白的相互作用,从而影响多种疾病的发生和发展。鉴于硫酸乙酰肝素在疾病进程中扮演的重要角色,硫酸乙酰肝素相关药物的设计与合成引起了药学研究者的广泛兴趣。综述硫酸乙酰肝素的结构、形成和功能以及与蛋白相互作用的机制,介绍硫酸乙酰肝素相关药物的研究与开发新进展。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对乳腺癌细胞的抑制与诱导凋亡作用

目的:观察两种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)对MDA-MB-231乳腺癌细胞生长的影响及机制。方法:利用MTT法和细胞生长曲线检测HSPG对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用,Hoechst33258荧光染色法、流式细胞术结合Annexin V-FITC及PI双标记染色检测HSPG对MDA-MB-231细胞凋亡的影响。结果:MTT法测得不同浓度MCF-7型HSPG作用于MDA-MB-231细胞24、48、72h均可明显抑制细胞生长,并且呈现剂量依赖性;生长曲线显示不同浓度MCF-7型HSPG可明显抑制MDA-MB-231的生长;荧光染色法和流式细胞术显示MCF-7型HSPG诱导MDA-MB-231细胞凋亡增加;MDA-MB-231型HSPG对其源细胞(MDA-MB-231)则无生长抑制作用,对其凋亡率也无明显影响。结论:MCF-7型HSPG对MDA-MB-231细胞生长具有显著的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡增加有关。

硫酸乙酰肝素通过PKC促进大鼠成骨细胞的增殖

目的探讨硫酸乙酰肝素对大鼠成骨细胞增殖功能的影响和可能机制。方法采用酶消化法分离新生大鼠颅骨的成骨细胞,采用不同浓度的硫酸乙酰肝素作用于成骨细胞,并用不同信号传导抑制剂进行预处理,细胞增殖的检测采用5-溴-2-脱氧尿嘧啶嵌入测定试剂盒。结果外源性硫酸乙酰肝素呈剂量依赖性的促进大鼠成骨细胞5-溴-2-脱氧尿嘧啶的嵌入率,这一功能可以完全被蛋白激酶(protein kinase)-PKC的抑制剂calphotin C阻断,而细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase;ERK)或p38的抑制剂并无此作用。结论硫酸乙酰肝素可能通过PKC介导促进成骨细胞增殖。

硫酸乙酰肝素在MDA-MB-231细胞增殖抑制中的作用

目的:探讨硫酸乙酰肝素(heparan sufate,HS)在抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖过程中对葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein,GRP78)及相关凋亡蛋白表达的影响。方法:培养人乳腺癌上皮MCF-7细胞株,生长达汇合期及汇合后期时收集培养液,提取其中的HS链。采用噻唑蓝比色法检测HS对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。应用Western blot法分别检测GRP78蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:HS对MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量和时间依赖性(P<0.05)。HS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,并随着剂量的增大,细胞的凋亡率升高(P<0.05)。HS抑制MDA-MB-231细胞GRP78蛋白的表达(P<0.05)。HS可促进Bax蛋白表达(P<0.05),但抑制Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论:HS通过减少MDA-MB-231细胞的GRP78、Bcl-2的表达,增加Bax表达来促进肿瘤细胞的凋亡,发挥其抗肿瘤作用。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖与肝脏疾病的关系

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（heparan sulfate proteoglycan，HSPG）是一种由哺乳动物分泌的复合大分子，主要分布在细胞表面及细胞外基质。根据核心蛋白的不同，HSPG可分为4个家族：磷脂酰肌醇蛋白聚糖（glypican）、多配体蛋白多糖（syndecan）、基底膜蛋白多糖（perlecan）和集聚蛋白多糖（a研n）。多年来，为探究HSPG与肝脏疾病发生发展的相关性，国内外学者做了大量研究工作，以明确HSPG与肝脏疾病相关性，试图寻找肝脏疾病治疗途径。本文就HSPG结构功能与肝脏相关疾病的关系所作综述如下。

硫酸乙酰肝素与口蹄疫病毒感染

受体是病毒宿主嗜性和致病机制的主要决定因素。硫酸乙酰肝素(HS)是一种多聚阴离子碳水化合物,广泛存在于真核细胞的细胞膜和细胞基质。HS是许多病毒在细胞膜上的特异受体或辅助受体。目前发现口蹄疫病毒可利用HS和整联蛋白(αvβ3、αvβ6、αvβ1、αvβ8)作为病毒受体。口蹄疫病毒可能在不同的感染阶段利用不同类型的受体与宿主细胞相互作用。研究病毒受体的结构和功能对理解病毒与宿主细胞的关系具有重要意义。本文主要论述了HS的生物学特性及其与口蹄疫病毒感染的关系。

表皮生长因子受体通路底物8、硫酸乙酰肝素酶以及基质金属蛋白酶在急性白血病的表达及其相关性研究

目的通过分析急性白血病(AL)患者骨髓液表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)、硫酸乙酰肝素酶(HPSE)以及基质金属蛋白酶(MMP)表达水平,评估3种指标联合检测对患者病情及预后的预测价值。方法将2017年10月—2018年10月于内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院血液科治疗的60例患者分为两组:急性白血病患者为实验组(AL组)和缺铁性贫血患者为对照组,每组30例。收集每组患者骨髓标本,应用RT-PCR法检测EPS8、HPSE以及MMP-2的mRNA表达水平,应用流式细胞检测技术检测骨髓细胞表面EPS8、HPSE以及MMP-2的表达水平。通过比较两组EPS8、HPSE以及MMP-2的表达水平,应用多因素Logistic回归分析进一步探讨急性白血病完全缓解与未缓解组的因子表达及其临床相关意义。结果急性白血病患者骨髓液中EPS8、HPSE以及MMP-2因子表达水平与对照组存在显著差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,MMP-2、EPS8是随访1年患者是否完全缓解的影响因素(P<0.05)。结论急性白血病患者骨髓EPS8、HPSE以及MMP-2表达水平升高,且联合检测患者骨髓白血病细胞中EPS8、MMP水平能较好地评估AL患者的临床转归及预后。

硫酸乙酰肝素基质疗法对糖尿病大鼠创面愈合影响的组织学研究

目的研究硫酸乙酰肝素对糖尿病大鼠创面愈合的影响。方法 36只雄性糖尿病大鼠随机数字法分为两组:实验组(n=18)采用皮下注射0.5ml硫酸乙酰肝素(0.3mg/ml),对照组(n=18)则皮下注射0.5ml生理盐水。两组大鼠麻醉成功后在其背部制作一直径为20 mm的圆形伤口,观察创面愈合情况,并通过苏木精-伊红和免疫组化染色研究两组大鼠伤口肉芽组织厚度和炎症反应情况。结果术后第4、6、8、10、12和14天时实验组伤口愈合率明显快于对照组(P<0.05)。实验组术后3天中性粒细胞相对于对照组较少,肉芽组织无明显水肿;术后7天时中性粒细胞较前减少,伴有局部毛细血管的增生;术后14天时新生肉芽组织基本修复完成,而对照组伤口仍伴有轻度炎症反应。免疫组化结果提示术后第14天实验组伤口肿瘤坏死因子-α阳性面积较对照组明显降低(561.4±18.7 vs 685.0±31.6,P=0.004),血管内皮生长因子阳性面积较对照组明显升高(688.1±19.3 vs 584.2±14.6,P=0.002)。结论硫酸乙酰肝素可能通过增加血管新生和抑制伤口炎症反应,从而促进创面的愈合。

树鼩经甲型肝炎减毒活疫苗、乙型肝炎疫苗及联合硫酸乙酰肝素佐剂免疫后的免疫效果评价

目的探讨甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)、乙型肝炎疫苗(Hbv)以及HepA-1、Hbv分别与佐剂硫酸乙酰肝素(HS)联合对树鼩进行免疫后树鼩体液免疫应答的影响。方法按照疫苗种类、佐剂以及免疫途径将树鼩随机分组,同时设空白对照组,分别于末次免疫后的4周、8周、12周、16周和20周尾静脉采血,用ELISA法检测树鼩血清中的特异性IgG抗体水平。结果除空白对照组外,实验组均在末次免疫的第四周检测到抗甲型肝炎病毒(HAV)及抗乙型肝炎病毒(HBV)抗体,抗体水平随着免疫时间延长而逐渐升高并于12周达到峰值,此后逐渐下降。同时,联合HS佐剂组的体液免疫效果均优于单纯疫苗免疫组。并且不同抗原以及联合佐剂采用不同的免疫途径免疫树鼩其免疫效果存在显著性差异。结论通过对树鼩进行疫苗免疫原性和增强免疫效果检测,证实以树鼩作为动物模型进行疫苗评价的可行性。

硫酸乙酰肝素对肿瘤中碱性成纤维因子的调控作用

侵袭和转移作为肿瘤细胞重要的生物学特性之一，已经成为抗肿瘤研究的一个热点。恶性肿瘤细胞侵袭肿瘤附近的正常组织通过降解细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）以及组织的血管壁，这个过程最重要的一步就是降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（heparansulfateproteoglycan，HSPG）。HSPG是ECM的重要组成部分，是基膜自我组装、不溶解性以及屏障作用所必需的。乙酰肝素酶（heparanase，Hpa）是一种B．D-葡萄糖醛酸内切酶，裂解硫酸乙酰肝素（heparinsulfate，HS）链，并且其酶活性的表达水平和肿瘤细胞的潜在转移相关。在动物实验中，使用Hpa抑制剂能明显减少肿瘤转移的发生率。使用小分子量肝素长期治疗有静脉血栓的癌症患者能增强患者的生存率。HSPG及Hpa的生物活性及其的相互作用对于肿瘤的发牛、发展和转移发挥重要作用。