乙酰肝素酶、硫酸乙酰肝素和多配体蛋白聚糖-1在肺癌患者血清中的表达及诊断价值

目的探讨多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)、硫酸乙酰肝素(HS)以及乙酰肝素酶(HPA)在非小细胞肺癌(NSCLC)及小细胞肺癌(SCLC)患者血清中的水平及其对诊断及预后的预测价值。方法收集10例健康对照组及76例肺癌患者的血清标本,通过ELISA方法检测血清中HS、SDC-1、HPA表达水平。采用Mann-Whitney U检验进行组间比较。结果肺癌患者血清HS、SDC-1及HPA含量均高于健康对照组(P<0.05);HS、HPA单因素用于诊断肺癌时的AUC分别为0.819和0.930,HS、SDC-1、HPA三者联合诊断肺癌时AUC为0.974。结论HS、SDC-1、HPA三者联合检测对肺癌的诊断及预后具有较好的预测价值。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖介导人畜共患病病毒感染机制的研究进展

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)由多个带负电荷的硫酸乙酰肝素(HS)多糖附着在细胞表面组成。HSPGs通过调控多种信号分子与其受体结合,从而参与并调节体内许多生物反应过程。由于其分布广泛且带负电荷的特性,HSPGs被许多微生物病原体,特别是病毒作为附着在宿主细胞上的辅助因子,成为病毒感染宿主的关键因子。本文简要综述HSPGs与多种人畜共患病病毒的相互作用方式,并重点介绍其作为辅助受体的机制,有望为人畜共患病防治提供一定的理论基础。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对C_3H小鼠乳腺癌移植瘤的抑制作用及其机制

目的观察硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)对C3H小鼠乳腺癌移植瘤的抑制作用及其机制。方法建立肿瘤模型并随机分为5组:生理盐水组、HSPG组(5、10、50mg.kg-1)及阳性对照组,各组动物自模型建立d2开始腹腔注射给药治疗22d并观察记录肿瘤体积。d24处死动物,称量肿瘤重量,计算胸腺指数及脾指数,使用原位凋亡检测法(TUNEL)检测HSPG对肿瘤细胞凋亡的影响,免疫组化检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果HSPG可明显抑制肿瘤生长,而不降低胸腺指数和脾指数。TUNEL结果HSPG组肿瘤组织中出现大量蓝黑色凋亡细胞,且明显多于生理盐水组,HSPG组肿瘤组织的VEGF的表达明显降低。结论HSPG对C3H小鼠移植性乳腺癌生长具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡及抑制VEGF表达有关。

转移性腺样囊性癌细胞纤连蛋白和硫酸乙酰肝素蛋白多糖mRNA的表达

目的 :比较纤连蛋白 (FN)和硫酸乙酰肝素蛋白多糖 (HSPG)mRNA在高转移腺样囊性癌细胞系ACCM和低转移细胞系ACC2 的表达 ,探讨其与腺样囊性癌转移的关系。方法 :获取培养第 2、4、6、8天的ACC2 和ACCMmRNA样本 ,合成cDNA ,用实时RT -PCR测定FN和HSPG的量。结果 :培养第 2、4、6、8天ACCMFNmRNA的值为 0 .14、0 .2 5、1.5 0、1.6 5 ,而ACC2 的值为 0 .0 3、0 .0 6、0 .0 9、0 .18。HSPGmRNA在ACCM第 2、4、6、8天的值分别为 0 .35、0 .32、0 .4 1、0 .6 5 ,而ACC2 为 0 .0 7、0 .10、0 .2 9、0 .75。ACCM细胞的FN和HSPGmRNA表达明显高于ACC2 。结论 :ACCM的FN和HSPGmRNA高表达与肿瘤转移表型关系密切。

硫酸乙酰肝素蛋白多糖基因多态性与糖尿病肾病关系的研究

目的 探讨硫酸乙酰肝素蛋白多糖基因 (HSPG)多态性与中国汉族人 2型糖尿病肾脏并发症之间的关系。方法 应用限制性内切酶 Bam HI的 PCR- RFL P法 ,检测 190例非 DM对照和 136例 2型糖尿病伴或不伴肾病者的 HSPG多态性基因型。结果 正常白蛋白尿组和异常 (微量和大量 )白蛋白尿组之间 Bam HI HSPG2等位基因频率和基因型频率无显著性差异 ,非 DM对照组和糖尿病组之间 Bam HI HSPG2等位基因频率无显著性差异 ,但基因型频率的差异有统计学意义。结论 中国汉族人 Bam HI HSPG2多态性与 2型糖尿病肾脏并发症的发生无显著性相关关系 。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对乳腺癌细胞的抑制与诱导凋亡作用

目的:观察两种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)对MDA-MB-231乳腺癌细胞生长的影响及机制。方法:利用MTT法和细胞生长曲线检测HSPG对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用,Hoechst33258荧光染色法、流式细胞术结合Annexin V-FITC及PI双标记染色检测HSPG对MDA-MB-231细胞凋亡的影响。结果:MTT法测得不同浓度MCF-7型HSPG作用于MDA-MB-231细胞24、48、72h均可明显抑制细胞生长,并且呈现剂量依赖性;生长曲线显示不同浓度MCF-7型HSPG可明显抑制MDA-MB-231的生长;荧光染色法和流式细胞术显示MCF-7型HSPG诱导MDA-MB-231细胞凋亡增加;MDA-MB-231型HSPG对其源细胞(MDA-MB-231)则无生长抑制作用,对其凋亡率也无明显影响。结论:MCF-7型HSPG对MDA-MB-231细胞生长具有显著的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡增加有关。

硫酸乙酰肝素在MDA-MB-231细胞增殖抑制中的作用

目的:探讨硫酸乙酰肝素(heparan sufate,HS)在抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖过程中对葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein,GRP78)及相关凋亡蛋白表达的影响。方法:培养人乳腺癌上皮MCF-7细胞株,生长达汇合期及汇合后期时收集培养液,提取其中的HS链。采用噻唑蓝比色法检测HS对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。应用Western blot法分别检测GRP78蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:HS对MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量和时间依赖性(P<0.05)。HS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,并随着剂量的增大,细胞的凋亡率升高(P<0.05)。HS抑制MDA-MB-231细胞GRP78蛋白的表达(P<0.05)。HS可促进Bax蛋白表达(P<0.05),但抑制Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论:HS通过减少MDA-MB-231细胞的GRP78、Bcl-2的表达,增加Bax表达来促进肿瘤细胞的凋亡,发挥其抗肿瘤作用。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖与肝脏疾病的关系

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（heparan sulfate proteoglycan，HSPG）是一种由哺乳动物分泌的复合大分子，主要分布在细胞表面及细胞外基质。根据核心蛋白的不同，HSPG可分为4个家族：磷脂酰肌醇蛋白聚糖（glypican）、多配体蛋白多糖（syndecan）、基底膜蛋白多糖（perlecan）和集聚蛋白多糖（a研n）。多年来，为探究HSPG与肝脏疾病发生发展的相关性，国内外学者做了大量研究工作，以明确HSPG与肝脏疾病相关性，试图寻找肝脏疾病治疗途径。本文就HSPG结构功能与肝脏相关疾病的关系所作综述如下。

结肠癌组织中乙酰肝素酶2蛋白的表达

目的:探讨乙酰肝素酶2(Hpa2)蛋白的表达与结肠癌浸润、转移的关系。方法:采用免疫组织化学染色法检测96例结肠癌组织中Hpa2蛋白的表达和微血管密度(MVD)。以其中85例癌旁组织和3例正常结肠组织作对照。结果:正常结肠组织中Hpa2蛋白不表达,癌组织中Hpa2蛋白阳性率为82.23%(79/96),高于癌旁组织中的12.94%(11/85)(P<0.05)。癌组织MVD(15.89±4.65)和癌旁组织的MVD(14.09±4.39)差异亦有统计学意义(P<0.05)。结肠癌组织中Hpa2蛋白的表达和MVD与患者的年龄、性别、肿瘤直径、发生部位无关(P>0.05),但与肿瘤的Duke′s分期、淋巴结转移、肝转移有关(P<0.05)。Hpa2蛋白阳性的癌组织MVD为(16.37±4.76),高于Hpa2蛋白表达阴性的癌组织(13.65±3.40)(P<0.05)。结论:Hpa2蛋白可以作为判断结肠癌浸润、转移的指标。

乙酰肝素酶2蛋白的表达与胰腺癌浸润、转移的关系及其意义

为探讨乙酰肝素酶2(Hpa2)蛋白与胰腺癌浸润、转移的关系及其临床病理意义,笔者应用免疫组织化学染色法检测2 6例胰腺癌组织中Hpa2蛋白的表达和微血管密度(MVD)。结果示Hpa2蛋白在正常胰腺组织中不表达,而在胰腺癌组织中的阳性率为6 9.2 3%(1 8/2 6),在癌旁组织中阳性率为3 3.3 3%(7/2 1),两者差异有显著性(P<0.0 5)。癌组织MVD为1 9.4 7±5.1 4,癌旁组织MVD为1 4.1 7±5.8 4,差异亦有显著性(P<0.0 5)。胰腺癌组织中Hpa2蛋白的表达和MVD分别与患者的年龄、性别、肿瘤直径无关(P>0.0 5),但与肿瘤的临床分期、包膜是否完整、是否有淋巴结转移有关(P<0.0 5)。Hpa2表达阳性组的MVD[(2 0.8 4±4.9 9)/HP]高于Hpa2表达阴性组MVD[(1 6.3 9±4.2 6)/HP](P<0.0 5)。提示Hpa2蛋白可能参与胰腺癌的发生和发展过程,对判断胰腺癌的浸润、转移有一定的参考价值。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在神经损伤再生反应中的作用

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)由核心蛋白和硫酸乙酰肝素共同组成,主要有多配体蛋白聚糖、磷脂酰肌醇蛋白聚糖、基膜蛋白聚糖和集聚蛋白四大类别,广泛参与神经从轴突生长和运动终板恢复到骨骼肌细胞再生的全过程。本文就HSPG及其在轴突生长过程中的引导作用、在神经元损伤-修复过程中的表达变化、在神经肌肉接点形成过程中的作用等研究进展作一综述。

表皮生长因子受体通路底物8、硫酸乙酰肝素酶以及基质金属蛋白酶在急性白血病的表达及其相关性研究

目的通过分析急性白血病(AL)患者骨髓液表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)、硫酸乙酰肝素酶(HPSE)以及基质金属蛋白酶(MMP)表达水平,评估3种指标联合检测对患者病情及预后的预测价值。方法将2017年10月—2018年10月于内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院血液科治疗的60例患者分为两组:急性白血病患者为实验组(AL组)和缺铁性贫血患者为对照组,每组30例。收集每组患者骨髓标本,应用RT-PCR法检测EPS8、HPSE以及MMP-2的mRNA表达水平,应用流式细胞检测技术检测骨髓细胞表面EPS8、HPSE以及MMP-2的表达水平。通过比较两组EPS8、HPSE以及MMP-2的表达水平,应用多因素Logistic回归分析进一步探讨急性白血病完全缓解与未缓解组的因子表达及其临床相关意义。结果急性白血病患者骨髓液中EPS8、HPSE以及MMP-2因子表达水平与对照组存在显著差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,MMP-2、EPS8是随访1年患者是否完全缓解的影响因素(P<0.05)。结论急性白血病患者骨髓EPS8、HPSE以及MMP-2表达水平升高,且联合检测患者骨髓白血病细胞中EPS8、MMP水平能较好地评估AL患者的临床转归及预后。

人主动脉壁硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人主动脉平滑肌细胞生长的影响

从动脉粥样硬化（ＡＳ）高（北京）、低（南宁）发区人正常胸主动脉内－中膜分离ＨＳＰＧ，观察其对体外培养的ＨＡＳＭＣ生长的影响，细胞计数、~３Ｈ－ＴｄＲ参入及形态观察均表明ＡＳ高、低发区人主动脉ＨＳＰＧ都能剂量依赖性地抑制ＨＡＳＭＣ增殖，但抑制百分数未见显著差异，结果提示，人动脉壁中ＨＳＰＧ的含量可能与ＡＳ发病有关．

下调硫酸乙酰肝素酶减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制

目的探讨硫酸乙酰肝素酶(heparinase,HPSE)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(Myocardial Ischemia-Reperfusion,MI/R)的影响及机制。方法选取60只SD大鼠,随机分为对照组、I/R组,I/R+shRNA-NC组和I/R+Heparanase-shRNA组,每组15只。对照组开胸后仅穿线但不结扎,其他各组大鼠均采用冠脉左前降支结扎手术制备MI/R模型。采用蛋白质印迹实验(WB)检测各组大鼠心脏功能及心肌损伤标记物;采用HE染色和TUNEL染色观察大鼠心肌病理情况;采用WB检测凋亡相关蛋白(Caspsae-3、Bax、Bcl-2)和线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein response,UPRmt)标志蛋白(LonP_(1)、HSP70)的表达情况;采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血中白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量水平。结果HE染色发现,对照组大鼠心肌组织、肌外膜、心肌纤维均完整且正常;I/R组大鼠和I/R+shRNA-NC组大鼠心肌纤维弯曲,肌红蛋白溶解,同时心肌肌细胞核固缩、溶解,肌束膜破裂;I/R+Heparanase-shRNA组大鼠心肌外膜较为完整、心肌纤维弯曲显著改善。相比对照组,I/R组肌酸激酶同工酶(CK-Mb)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、Mb、Caspase-3蛋白、Bax蛋白、MDA、IL-6、TNF-α、HSP70水平显著升高,HR、LVEF、LVWT、Bcl-2蛋白、SOD、LonP_(1)蛋白水平显著降低,差异均有统计学意义;与I/R+shRNA-NC组比较,I/R+Heparanase-shRNA组CK-Mb、cTnI、Mb、Caspase-3蛋白、Bax蛋白、MDA、IL-6、TNF-α水平显著降低,而HR、LVEF、LVWT、Bcl-2蛋白、SOD、HSP70和LonP_(1)水平显著升高,差异均有统计学意义。结论下调HPSE可能通过抑制UPRmt信号通路减轻细胞氧化应激、炎症反应及细胞凋亡,从而缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤。

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人的脐静脉内皮细胞生长的影响

为探讨硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对内皮细胞生长的作用，用解聚提取及离子交换柱层析法分离出人主动脉ＨＳＰＧ，用倒置显微镜、细胞计数、及￣３Ｎ－ＴｄＲ参入观察其对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＦＣ）生长的影响。结果发现：（１）倒置显微镜下观察，加入ＨＳＰＧ（１．７０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）的ｈＵＶＥＣ生长密度高于对照组（未加ＨＳＰＧ）．（２）随着培养时间增加（２４，４８及７２ｈ）．根据细胞计数计算出同一剂量的ＨＳＰＧ（１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）对ｈＵＶＥＣ的促增殖％增高（分别为１４％，３０％及３７％）。（３）随着加入ＨＳＰＧ浓度的升高（４．３，８．５及１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ．培养７２ｈ）．根据￣３Ｈ－ＴｄＲ参入计算出ＨＳＰＧ对ｈＵＶＥＣ的促增殖％亦增高（分别为４９％，７１％及９８％）。故人主动脉ＨＳＰＧ对培养的人脐静脉内皮细胞有促增殖作用。

中老年卵巢癌患者硫酸乙酰肝素蛋白聚糖-1表达水平及与预后的关系

目的分析硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(Syndecan)-1在卵巢癌中的表达及其同患者预后的关系。方法 164例行手术切除的中老年卵巢癌病人,采用免疫组织化学和组织微阵列法检测组织样本中的Syndecan-1的表达,并分析其与患者生存率的关系。结果上皮细胞Syndecan-1阳性率为18%,间质细胞阳性率为50%。浆液型腺癌中Syndecan-1阳性率低;而低分化肿瘤中Syndecan-1阳性率高。上皮细胞Syndecan-1阳性病人中位生存期为1.1年(95%CI=0.9～1.7),而Syndecan-1阴性病人的中位生存期为2.2年(95%CI=1.7～2.4)。通过单因素分析表明:Syndecan-1内皮细胞阳性的病人总生存期短(P=0.02),多因素分析Syndecan-1的表达是独立预后预测因素,风险比为1.52(P=0.02)。结论 Syndecan-1在卵巢癌中表达可能是肿瘤发生的机制之一,与预后不佳有关。

人主动脉壁硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人主动脉平滑机细胞合成蛋白聚糖的影响

从人正常胸主动脉分离硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ），观察其对体外培养的人主动脉平滑肌细胞（ＨＡＳＭＣ）合成ＰＧ的影响。ＨＡＳＭＣ在不加（对照）或加ＨＳＰＧ（１９μｇ醛酸／ｍｌ）的￣（３５）Ｓ－硫酸钠培养液中培养，以标记ＰＧ。继之，培养液及细胞层的４ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍提取液中的ＰＧｓ经离子交换及凝胶过滤柱层析分离，发现加ＨＳＰＧ后，培养液中的ＨＳＰＧ，硫酸软骨素ＰＧ（ＣＳＰＧ）及硫酸皮肤素－硫酸软骨素ＰＧ（ＤＳＣＳＰＧ）均明显增高，而细胞层中仅ＨＳＰＧ和ＣＳＰＧ增高，且加ＨＳＰＧ后细胞层的ＤＳＣＳＰＧ分子大小有所不同，进一步分析ＤＳＣＳＰＧ中ＤＳ及ＣＳ含量发现加ＨＳＰＧ组ＨＡＳＭＣ细胞层中的ＤＳ％含量略低于对照组。结果提示ＨＳＰＧ可刺激ＨＡＳＭＣ的ＰＧ合成，其可能与血管壁修复及动脉壁脂质沉积有关。

氨基胍和维生素C对糖尿病大鼠血脂水平和主动脉硫酸乙酰肝素蛋白多糖表达的影响

目的观察氨基胍(Am i)与维生素C(V itC)合用是否可通过抑制糖基化和氧化应激对糖尿病大鼠主动脉起到保护作用。方法腹腔注射链脲佐菌素诱导建立1型糖尿病大鼠模型,Am i,V it C和V it C+Am i治疗组分别ig Am i 100 mg.kg-1,V itC 100 mg.kg-1或V itC 100 mg.kg-1+Am i 100 mg.kg-1,每日1次,给药16周。观察大鼠的一般状况;血糖、血清甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、糖化血红蛋白(HbA1c)和糖化低密度脂蛋白(G-LDL)水平;HE染色及免疫组织化学检测主动脉内膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)表达。结果与模型组相比,Am i和V it C可增加糖尿病大鼠的体重,但对血糖水平无影响;V it C降低TG、TC和LDL水平,显著提高HDL水平,Am i及V it C明显降低HbA1c和G-LDL水平,并增强主动脉HSPG表达。Am i+V it C的治疗作用较Am i及V it C更为明显,但所有的观察指标未恢复至正常组水平。结论Am i和V it C无降血糖作用,但可通过抑制糖基化和氧化应激对糖尿病大鼠主动脉起到保护作用。