尿液硫酸化胆汁酸代谢轮廓分析在无症状高胆汁酸血症识别中的应用

目的:探讨尿液硫酸化胆汁酸代谢轮廓分析在识别无症状高胆汁酸血症(asymptomatic hypercholanaemia of pregnancy,AHP)中的应用价值。方法:应用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定正常孕妇(13例),妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)(17例)尿液硫酸化胆汁酸谱,采用不同扫描模式鉴别和分析尿液各种硫酸化胆汁酸,并用主成分分析法(principle component analysis,PCA)对尿液硫酸化胆汁酸代谢轮廓进行分析。结果:采用不同的扫描模式对尿液中15种可能的硫酸化胆汁酸进行鉴定并分析,经PCA对尿液硫酸化胆汁酸代谢轮廓分析,发现在ICP组中存在一类特殊的人群,其表现为无任何症状的胆汁酸水平升高而肝功能正常,但其尿液硫酸化胆汁酸代谢轮廓与正常孕妇类似。结论:尿液硫酸化胆汁酸代谢轮廓分析有助于AHP的识别。

硫酸化胆汁酸水解酶基因BSSH1克隆、表达及活性

目的从铜绿假单胞菌克隆出硫酸化胆汁酸水解酶(BSS)基因,并表达蛋白产物、研究其活性。方法通过序列比对确定铜绿假单胞菌中的目的序列BSS H1;通过PCR扩增获得BSS H1基因全序列,将其插入pET30b(+)载体,并将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过优化诱导表达条件,实现重组蛋白BSS H1的高效表达;通过BSS-HSD酶联法初步研究其酶活性质。结果工程菌扩大培养3 h、以终浓度为1 mmol/L IPTG诱导5 h时蛋白表达量最高;研究发现BSS H1能催化底物生成3α和3β两种构型的羟基胆汁酸,在pH 8.5时,其活性分别是(632±65)U/L和(52±4)U/L。结论成功构建BSS H1高效表达菌株。BSS H1能催化生成两种立体异构体的特性在其他BSS中未见报道,其机制尚不明确,值得深入研究。

高效液相色谱-串联质谱检测尿液3种硫酸化胆汁酸

尿液样本经过 OASIS HLB 固相萃取，Luna C18色谱柱分离，流动相 A 为0.1％甲酸和2 mmol／L 乙酸铵水溶液，流动相 B 为0.1％甲酸和2 mmol／L 乙酸铵乙腈溶液，梯度洗脱，质谱采用负离子多反应监测检测模式．硫酸化石胆酸（3S‐LCA）、硫酸化牛磺石胆酸（3S‐TLCA）和硫酸化甘氨石胆酸（3S‐GLCA）3种硫酸化胆汁酸得到完全分离，线性范围分别为9.7～998.0，9.0～1080.0，9.3～1123.3 ng／mL ，检测限均为5 ng ／mL ，日内精密度均小于4.0％，日间精密度均小于5.0％，回收率在89.4％～100.7％范围内．本方法准确、灵敏，适用于尿液中硫酸化胆汁酸水平的实验室研究和临床检测．