血清硫酸吲哚酚、簇集蛋白与急性冠脉综合征患者冠状动脉病变的关系及对短期预后的预测价值

目的探讨血清硫酸吲哚酚(IS)、簇集蛋白(Clusterin)与急性冠脉综合征(ACS)患者冠状动脉病变的关系及对短期预后的预测价值。方法选择2021年6月至2022年10月郑州大学第一附属医院收治的120例ACS患者为研究对象(ACS组),另选择同期本院80名体检健康的志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测ACS组患者和对照组受试者的血清IS、Clusterin水平。根据冠状动脉病变支数将ACS患者分为单支病变组(n=43)、双支病变组(n=49)、多支病变组(n=28),另根据Gensini积分将ACS患者分为轻度病变组(n=37)、中度病变组(n=48)、重度病变组(n=35),并根据院内短期预后将ACS患者分为预后良好组(n=85)和预后不良组(n=35)。通过单因素及多因素logistic回归分析ACS患者短期预后不良的影响因素,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清IS、Clusterin水平对ACS患者短期预后不良的预测价值。结果ACS组患者的血清IS、Clusterin水平显著高于对照组(P<0.05)。单支病变组、双支病变组、多支病变组患者的血清IS、Clusterin水平依次升高(P<0.05)。轻度病变组、中度病变组、重度病变组患者的血清IS、Clusterin水平依次升高(P<0.05)。120例ACS患者短期预后不良发生率为29.17%(35/120)。单因素分析显示,ACS类型、Gensini评分、KILLIP分级、冠状动脉病变支数、IS、Clusterin与ACS患者短期预后有关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,Gensini评分升高、IS升高、Clusterin升高、KILLIP分级≥Ⅲ级、冠状动脉多支病变为ACS患者短期预后不良的独立危险因素(P<0.05)。血清IS水平预测ACS患者短期预后不良的ROC曲线下面积(AUC)为0.747(95%置信区间:0.529~0.946),灵敏度为71.43%,特异度为74.12%,准确度为73.33%,约登指数为0.455;血清Clusterin水平预测ACS患者短期预后不良的AUC为0.693(95%置信区间:0.439~0.951),灵敏度为68.57%,特异度为70.59%,准确度为7.00%,约登指数为0.392;血清IS与Clusterin水平联合预测ACS患者短期预后不良的AUC为0.825(95%置信区间:0.687~0.968),灵敏度为82.86%,特异度为83.53%,准确度为83.33%,约登指数为0.664。结论血清IS、Clusterin水平升高与ACS患者冠状动脉病变程度加重和短期预后不良有关,二者联合对ACS患者短期预后不良的预测价值较高。

肾衰宁胶囊对腹膜透析患者血清硫酸吲哚酚和硫酸对甲酚的影响

硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)与硫酸对甲酚(p-cresol sulphate,PCS)是终末期肾病(ESRD)患者相关的蛋白结合尿毒症毒素(protein-bound uremic toxins,PBUTs),可以抑制血管内皮的增殖和迁移,减少一氧化氮的产生,导致内皮功能障碍并对多种器官具有直接有害影响[1-4],常与血浆中的蛋白质,特别是与白蛋白紧密结合而具有大分子物质的特性。有研究表明IS和PCS在患者体内的浓度与透析或透析前慢性肾病患者的长期不良预后之间有关联[5]。然而临床上腹膜透析(PD)治疗只能清除游离态的IS和PCS,透析后总的IS和PCS水平减低不明显[2,3]。

硫酸吲哚酚与慢性肾脏病肌少症机制的研究进展

慢性肾脏病肌少症主要发生在接受血液透析的终末期肾病患者中,病因有营养摄入不足、蛋白能量消耗、炎症细胞因子、氧化应激、胰岛素抵抗、尿毒症毒素等,其中蛋白质结合型尿毒症毒素硫酸吲哚酚是一种肠源性尿毒症毒素,难以通过透析清除,在慢性肾脏病患者体内蓄积,其可通过多种途径影响肌少症的发生。本文将对硫酸吲哚酚引起肌少症的机制进行综述。

硫酸吲哚酚对肌少症信号通路及CKD患者肌细胞的影响

肌少症是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者常见的并发症之一,主要是由蛋白质摄入不足、活动量减少、慢性炎症等原因导致的肌肉质量、重量及功能异常,最终导致肌肉萎缩的一类临床并发症。硫酸吲哚酚(indoxylsulfate,IS)作为蛋白结合性尿毒症毒素,不易通过临床药物及肾脏替代治疗去除,其能通过调控各信号因子,影响多条肌少症通路及机制对骨骼肌细胞造成损害。本文通过总结肌少症主要信号通路及机制,探讨IS是如何导致线粒体功能障碍、骨骼肌细胞萎缩、纤维化等病理情况,从而导致CKD患者肌少症。

硫酸吲哚酚促进慢性肾脏病患者急性冠脉综合征机制的研究进展

急性冠脉综合征(ACS)是慢性肾脏病(CKD),尤其是尿毒症患者的主要死亡原因之一。ACS形成的主要原因与血管内皮功能损伤引起的动脉粥样硬化和动脉内血栓形成密切相关。硫酸吲哚酚(IS)是色氨酸在肠道细菌作用下的代谢产物,CKD患者,尤其是尿毒症患者,IS不能有效排出体外造成人体内蓄积而从多个方面造成内皮功能损伤并在ACS发生发展中发挥重要作用。本文主要对近年来国内外有关IS引起CKD患者内皮损伤和血栓形成机制的最新进展进行综述,并总结目前在CKD患者中减轻IS引起的ACS方面的新措施,为防治CKD患者心血管事件提供帮助。

中医药调节硫酸吲哚酚相关机体损伤干预慢性肾脏病及其并发症的研究进展

近年来,肠源性尿毒症毒素硫酸吲哚酚被发现与慢性肾脏病及其并发症的发生和发展密切相关,而以中医药为干预对象来调节硫酸吲哚酚引起的机体损伤的临床试验及基础试验也逐渐丰满,一些可能机制的探索也初有成效,主要通过调整肠道菌群比例、降低硫酸吲哚酚前体合成及阻止芳香烃受体途径启动来干预慢性肾脏病及并发症的发生和发展,现系统回顾中医药以硫酸吲哚酚为治疗靶点的临床证据及机制探索,以期为中医药在该领域的进一步发展提供更多循证依据和思路参考。

硫酸吲哚酚毒性作用的研究进展

尿毒症毒素是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者体内蓄积的具有明显毒性作用的物质。硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)是肠道细菌分解色氨酸产生的蛋白结合型的小分子物质,正常生理情况下,通过肾脏排出。CKD患者的肾脏排泄功能明显下降,对IS的清除能力也随之降低,导致IS在体内蓄积,引起多器官系统发生功能障碍。大量研究证实,IS可直接诱导肾小管细胞凋亡,促进心血管事件发生,还可以减少破骨细胞分化并促进成骨细胞凋亡,加重肾性骨病。IS作为肠道来源毒素,其产生不可避免,因此研究IS的毒性作用对CKD患者的预后有重要帮助。本文就近年来关于IS毒性作用的认识研究进展做一综述。

慢性肾功能不全患者血清及硫酸吲哚酚对巨噬细胞脂质聚集的影响

目的观察尿毒症apo E-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化病变,慢性肾功能不全患者血清和尿毒症毒素硫酸吲哚酚对巨噬细胞胆固醇转运受体的表达及胞内脂质聚集的影响。方法外科手术法建立尿毒症apo E-/-小鼠的动物模型,分别收集尿毒症apo E-/-小鼠、假手术apo E-/-小鼠、C57BL/6J小鼠的主动脉根部,行冰冻切片油红O染色,计算动脉粥样硬化斑块相对面积。收集慢性肾功能不全患者及肾功正常者血清,以不同浓度的慢性肾功能不全患者血清或不同浓度的硫酸吲哚酚干预巨噬细胞株12 h,测定不同干预条件下胆固醇转运受体SR-A1、CD36、ABCA1、ABCG1、SR-B1 m RNA的表达;干预24 h后诱导泡沫细胞,油红O染色测定不同干预条件下细胞内脂质含量。结果尿毒症apo E-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块面积较假手术apo E-/-小鼠明显增大。5%的慢性肾功能不全患者血清及250μmol/L的硫酸吲哚酚可明显诱导巨噬细胞CD36 m RNA的表达而不影响其余胆固醇转运受体的表达,同时增加巨噬细胞内脂质的蓄积。结论慢性肾功能不全加速动脉粥样硬化的进展,机制与慢性肾功能不全血清中蛋白结合性尿毒症毒素硫酸吲哚酚诱导巨噬细胞CD36 m RNA表达上调、促进细胞内的脂质蓄积有助于巨噬细胞源性泡沫细胞形成有关。

HPLC-FLU法测定人血清中硫酸吲哚酚浓度及其在血液透析病人中的应用

目的：建立测定人血清中硫酸吲哚酚浓度的高效液相色谱-荧光检测法,了解血液透析和血液透析滤过对硫酸吲哚酚的清除效果。方法：血清样品经乙腈沉淀蛋白;采用Hypersil BDS C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相为乙腈-水-三氟乙酸（15∶85∶0.2,V/V/V）,流速为1mL/min;入射波长为280nm,发射波长为390nm。分别测定尿毒症患者透析前后血清中硫酸吲哚酚浓度。结果：线性范围为0.5~80.0μg/mL,线性方程为Y=2.438×104X＋6.964×103,r=0.9986;日内、日间精密度均小于15%,方法回收率为92.8%~111.4%,提取回收率为90.9%。血液透析和血液透析滤过后患者血清中硫酸吲哚酚的下降率分别为（19.6±7.3）%和（25.3±7.0）%。结论：本法简便、快速、灵敏、准确,可用于测定人血清中硫酸吲哚酚浓度。

硫酸吲哚酚促进肾纤维化的机制研究

目的探讨尿毒症毒素硫酸吲哚酚（indoxyl sulfate,IS）诱导肾纤维化的作用及可能机制。方法 24只3周龄健康雄性CD-1小鼠,体质量14-15 g,建立1/2肾切除模型后,采用完全随机分组法将小鼠分为IS处理组（n=12）和对照组（n=12）,分别给予小鼠腹腔注射IS 100 mg/（kg·d）和等体积灭菌磷酸缓冲溶液,IS注射4周后留取肾脏标本,Masson染色观察小鼠肾间质胶原沉积情况,免疫组化染色检测观察小鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和β-catenin蛋白表达变化,Western blot检测β-catenin蛋白表达变化;用不同浓度的IS（0、2、10、50 mg/L）孵育人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）72 h后,Western blot检测β-catenin表达变化。结果与对照组比较,Masson染色发现腹腔注射IS 4周后,小鼠肾脏胶原沉积明显增加[（2.43±0.51）vs（6.57±0.51）,P〈0.05],IS处理组肾小管上皮细胞β-catenin[（0.87±0.74）vs（10.87±1.21）,P〈0.05]以及α-SMA[（1.30±0.56）vs（13.53±0.50）,P〈0.05]的表达均明显增加;与对照组相比,IS处理组HK-2细胞的β-catenin表达显著增加,且呈剂量依赖效应[（0.71±0.71）vs（0.96±0.70）或（0.71±0.71）vs（1.10±0.95）,P〈0.01]。结论 IS可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥促小鼠肾纤维化的作用。

丹参酮ⅡA对硫酸吲哚酚诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的研究丹参酮ⅡA对硫酸吲哚酚(IS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的抑制作用及其对慢性肾脏病心血管并发症的治疗作用及机制。方法体外培养HUVECs,实验分为正常组、IS组、IS+丹参酮ⅡA不同浓度组。倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化,检测各组细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)水平,DAPI法、Annexin/PI双染检测细胞凋亡情况。结果IS可引起内皮细胞变性、细胞皱缩,上清LDH释放量增多及细胞凋亡明显增多。丹参酮ⅡA呈浓度依赖性抑制IS诱导内皮细胞形态学改变,明显降低细胞上清LDH释放量(P<0. 05),减少内皮细胞凋亡(P<0. 05)。结论丹参酮ⅡA能够抑制IS诱导内皮细胞凋亡。

硫酸吲哚酚诱导心肌细胞肥大的研究

目的研究尿毒症毒素硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)对心肌细胞肥大的影响及其可能的机制。方法不同浓度的IS(100、250、500、1 000μmol/L)孵育体外培养的新生大鼠心肌细胞(RNCM)3 h后,2,7-dichlorofluorescin dictate(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平。500μmol/L IS孵育心肌细胞24 h后,Real-time PCR检测心肌细胞肥大标志基因心房尿钠肽(atrial natriuretic peptide,ANF)、B型尿钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)及β肌球蛋白重链(beta-myosin heavy chain,β-MHC)的mRNA表达。500μmol/L IS孵育NRCM 48 h后,3H亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率,α-actinin免疫荧光染色观察心肌细胞面积。结果 IS可以剂量依赖性的诱导心肌细胞ROS生成增多(P<0.05),500μmol/L IS孵育可以导致心肌细胞肥大标志基因ANF、BNP和β-MHC mRNA表达上调,并显著增加心肌细胞3H亮氨酸摄入量和细胞面积(P<0.05)。结论 IS能够诱导体外培养的新生大鼠心肌细胞肥大,其机制可能与诱导氧化应激增强有关。

硫酸吲哚酚对人单核细胞源树突状细胞表型及功能的影响

目的:探讨硫酸吲哚酚(IS)对人单核细胞源树突状细胞(mDCs)的分化、成熟及免疫功能的影响,为进一步探索IS在动脉粥样硬化(AS)免疫炎症反应中的机制提供依据。方法:双密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,用rh GM-CSF和rh IL-4体外诱导分化为未成熟mDCs,随机分为PBS组、LPS组(1μg/m L)、IS.1组(30μmol/L)、IS.2组(300μmol/L)、IS.3组(600μmol/L)。流式细胞仪检测各组mDCs表型和吞噬功能变化,ELISA法检测各组mDCs分泌细胞因子IL-12p70的变化,扫描电子显微镜观察细胞形态学变化。结果:不同浓度IS作用于mDCs后,显著上调mDCs表面标志CD80、CD83、CD86、MHC II的表达,降低细胞吞噬功能并促进细胞因子IL-12p70的分泌(P<0.05);形态学上看,LPS组和IS.2组细胞呈不规则形,胞体表面有形态不一的突起。比较得出IS为300μmol/L时为最适宜的刺激浓度。结论:硫酸吲哚酚可诱导人单核细胞源树突状细胞表型及功能成熟,这可能是硫酸吲哚酚参与动脉粥样硬化免疫炎症过程的机制之一。

肠源性毒素硫酸吲哚酚与慢性肾功能不全大鼠心肌NLRP3炎性小体、miR-34a表达的相关性研究

目的探讨慢性肾功能不全(CRI)大鼠外周血硫酸吲哚酚(IS)与心肌组织NLRP3炎性小体、miR-34a表达的关系。方法将SD大鼠随机分为假手术组、慢性肾功能不全组,每组20只大鼠。CRI组予以行5/6肾大部分切除术。造模8周后用于实验研究。分别采用苦味酸速率比色法检测血浆肌酐(SCr)、脲酶波氏比色法检测血尿素氮(BUN)的表达,高效液相-串联质谱法检测血清IS的浓度。心脏超声监测大鼠心脏功能,Masson染色检测心肌纤维化,蛋白印迹法检测左室心尖部心肌组织NLRP3、IL-1β的表达,荧光定量PCR检测左室心尖部心肌组织miR-34a的表达。结果与假手术组相比,CRI组大鼠血肌酐、IS浓度、LVMI、E/e'、左室心肌间质纤维化比例、心肌细胞横截面积、miR-34a、NLRP3以及IL-1β等表达升高(所有P <0. 05),LVEF减退(P <0. 05)。血浆IS与LVEF呈负相关(P=0. 007),与LVMI、E/e'、心肌间质纤维化比例、心肌细胞横截面积、NLRP3、IL-1β、miR-34a等呈正相关(P <0. 001)。结论 IS可能通过NLRP3炎性小体、miR-34a促进CRI心功能损伤。

血液透析患者血浆硫酸吲哚酚与左心室肥厚的相关性

目的探究血液透析患者左心室肥厚的相关危险因素。方法纳入慢性肾脏病(CKD)血液透析患者190例,检测生化指标,进行心脏超声检查,将患者分为左心室肥厚组和非左心室肥厚组。采用高效液相色谱-电喷雾-串联质谱技术对血浆中硫酸吲哚酚(IS)进行检测。采用Spearman相关或Pearson相关分析IS与其他生化或临床指标的关系。采用线性回归分析IS与左心室质量指数(LVMI)的关系,同时采用Logistic回归模型分析IS和左心室肥厚(LVH)的关系。结果共入组190例,男117例,女73例,年龄(57.3±14.2)岁,LVH患病率达65.8%。单因素线性回归显示,血浆硫酸吲哚酚(IS)与左心室质量指数(LVMI)呈正相关(β=7.05,P=0.01),校正各种危险因素后,IS与LVMI仍呈正相关(β=4.1,P=0.02)。采用Logistic回归分析硫酸吲哚酚(IS)与左心室肥厚(LVH)的关系,校正各种危险因素后,血浆硫酸吲哚酚(IS)与左心室肥厚(LVH)独立正相关(β=6.55,OR=0.70,95%CI=0.63~0.77,P=0.03)。结论 CKD血液透析患者血浆IS与LVMI呈独立正相关,血浆IS是LVH的独立危险因素。

肠源性尿毒症毒素硫酸对甲酚和硫酸吲哚酚的研究进展

尿毒症毒素是指终末期肾病（end-stage renal disease,ESRD）时不能经尿液清除、潴留在体内且有毒性作用的物质。据欧洲尿毒症毒素协作组（EUTox）统计,至2011年4月已发现160种尿毒症毒素。尿毒症毒素根据其理化性质可分为3类。（1）不能与蛋白质结合的水溶性小分子物质：相对分子质量通常小于500，较易经血液透析清除，如尿素、肌酐。

超高效液相色谱-串联质谱技术分析人体血浆中硫酸吲哚酚及硫酸对甲酚含量

建立了超高效液相色谱-串联质谱法检测人体血浆中硫酸吲哚酚(IS)和硫酸对甲酚(p-CS)。血浆加入内标(p-CS-d7和IS-d4)后用乙腈稀释10倍,经涡旋、沉淀及离心后取上清液,再将上清液用超纯水稀释10倍。经Waters UPLC~? HSS T3色谱柱(100×2.1mm,1.8μm)分离,以甲醇-5mmol/L乙酸铵溶液为流动相,梯度洗脱,质谱采用电喷雾电离,负离子模式下,以多反应监测模式(MRM)检测,内标法定量。p-CS和IS在5.0～100.0μg/L范围内线性关系良好,在1.0、5.0和10.0μg/mL 3个加标浓度水平下,p-CS和IS的回收率在95.3%～98.5%之间。该方法灵敏度高,定量准确,应用于分析23位血液透析患者血浆中p-CS和IS含量,取得了满意的结果。

涤毒灌肠方对5/6肾切除大鼠血与尿硫酸吲哚酚含量的影响

目的探讨涤毒灌肠方对5/6肾切除大鼠血、尿硫酸吲哚酚含量的影响。方法 SD大鼠80只,随机抽取8只作为空白对照组,其余72只行5/6肾切除术复制慢性肾衰模型,将造模成功的60只大鼠随机分为模型对照组、药用炭治疗组、涤毒灌肠方高、中、低剂量组,用药周期为56 d。测量大鼠血清肌酐、尿素氮,高效液相色谱-质谱分析法测定血、尿硫酸吲哚酚的含量。结果灌肠方各剂量组和药用炭组血硫酸吲哚酚含量明显下降(P<0.05),且高、中剂量组比药用炭组下降更为明显(P<0.05);灌肠方高、中剂量组、药用炭组尿硫酸吲哚酚含量明显下降(P<0.05),且高剂量组比药用炭组更为明显(P<0.05)。结论涤毒灌肠方降低5/6肾切除大鼠血、尿中硫酸吲哚酚含量可能是其干预肾衰竭的作用机制之一。

UCP2在硫酸吲哚酚诱导心肌细胞肥大中的作用

目的探讨解耦联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)在硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)诱导心肌细胞肥大中的作用和机制。方法分离培养新生Sprague-Dawley大鼠心肌细胞,0、100、250、500、1 000μmol/L IS孵育心肌细胞1 h或500μmol/L IS孵育心肌细胞0、15、30、45、60 min后,Western blot检测心肌细胞UCP2蛋白表达变化。UCP2慢病毒转染心肌细胞后,通过α-actinin免疫荧光染色观察细胞大小,3H-亮氨酸掺入法评价蛋白合成速率,Real-time PCR检测肥大相关基因ANF、BNP和β-MHC mRNA的表达,同时利用MitosoxTM探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成情况。结果与对照组相比,IS处理组心肌细胞的UCP2蛋白水平明显下降(P<0.05);与IS处理组相比,UCP2过表达可以明显抑制IS诱导的心肌细胞ROS生成、体积增大、3H-亮氨酸摄入增加及肥大相关基因(ANF、BNP和β-MHC mRNA)的表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IS诱导心肌细胞肥大可能与其下调UCP2表达及促进氧化应激有关,而UCP2过表达或许可以通过抑制氧化应激拮抗IS诱导的心肌细胞肥大。

心肾综合征中硫酸吲哚酚对巨噬细胞吞噬氧气型低密度脂蛋白的诱导作用的研究

目的探讨硫酸吲哚酚(IS)对RAW264.7巨噬细胞吞噬氧气型低密度脂蛋白(ox-LDL)的诱导作用及其作用机制。方法 0、10、50、100、200和400μmol/L IS处理RAW264.7细胞24 h,采用CCK-8法测定RAW264.7细胞存活率,流式细胞术测定RAW264.7细胞的Dil标记氧化型低密度脂蛋白(Dil-ox-LDL)吞噬量。200μmol/L IS处理RAW264.7细胞0、12、24、36和48 h,测定RAW264.7细胞存活率和Dil-ox-LDL吞噬量。IS组RAW264.7细胞用200μmol/L IS处理24 h,UO126+IS组RAW264.7细胞以5μmol/L UO126预处理2 h后再200μmol/L IS处理24 h,测定非处理组、IS组和UO126+IS组RAW264.7细胞存活率和Dil-ox-LDL吞噬量,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测在IS刺激15 min时的ERK1/1蛋白表达情况。结果 IS对RAW264.7细胞存活率的浓度效应和时间效应检测中,不同组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。Dil-ox-LDL吞噬量与IS浸润浓度及处理时间均呈正相关(P<0.01)。IS组的Dil-ox-LDL吞噬量和磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显高于非处理组(P<0.01)。UO126+IS组的Dil-ox-LDL吞噬量略低于非处理组,但差异无统计学意义(P>0.05);磷酸化ERK1/2蛋白表达量大幅低于非处理组,差异有统计学意义(P<0.01)。UO126+IS组同IS组比较,Dil-ox-LDL吞噬量和磷酸化ERK1/2蛋白表达量均呈现大幅降低(P<0.01)。结论IS可在体外直接诱导RAW264.7巨噬细胞吞噬ox-LDL,该效应经由活跃MAPK信号转导通路实现,且随IS浓度升高和浸润时间延长而增强。