硫酸类肝素-3-0-磺基转移酶B1对乙型肝炎病毒复制的影响

目的研究硫酸类肝素3O磺基转移酶Bl（HS3ST381）对HBV复制的影响。方法以HepG2细胞为阴性对照组，转染2．5ugpCH9HBV（HBV表达质粒）的HepG2细胞为阳性对照组；转染了2．5μgpCH9HBV、1．5μgpcDNA3．1（HS3ST3Bl表达质粒载体）和2．0μgpTZU6＋1（干扰质粒构建载体）的HepG2细胞为对照组；转染了2．5μgpCH9HBV、1．5μgpCDNA3．1-HS3ST381和2．0μgpTZU6＋1的HepG2细胞为实验组A；转染了2．5μgDCH9-HBV、1．5ugpCDNA3．1-HS3ST3Bl和2．0μgpshll26（HS3ST3Bl的干扰质粒）的HepG2细胞为干扰组A。转染了2．5μgpCH9-HBV和2．0μgpTzu6＋1的HepG2细胞为实验组B；转染了2．5μgpCH9HBV和2．0μgpshll26的HepG2为干扰组B。采用Southernblot和实时聚合酶链式反应技术检测HS3ST381共转染处理及未共转染处理的细胞内HBV复制中间体含量和病毒总RNA表达量，用双荧光素酶报告系统检测这种变化与HBV启动子[核心启动子（cp）、x蛋白启动子（xp）、包膜蛋白启动子l（spl）、包膜蛋白启动子2（sp2）]活性的关系。采用SPSSl7．0统计软件进行单因素方差分析，P〈0．05为差异有统计学意义。结果以对照组HBVDNA含量为l，实验组A、干扰组AHBVDNA含量分别为10％±2％、31％±4％，对照组与实验组A比较，F=20．8，p=0．034，差异有统计学意义。实验组A与干扰组A比较，F=24．9，p=0．021，差异有统计学意义。与干扰组B比较，试验组BHBVDNA水平上升了130％±11％。在HBV稳定表达细胞株中转染pCDNA3．1-HS3ST381分别为0．5、1．0、1．5ug时，HBVDNA水平分别是对照组的90．0％±3．1％、82．0％±2．3％、21．0％±1．9％，与对照组比较，F值分别为22．7、20．3、26．5，尸值分别为0．029、0．041、0．015，差异均有统计学意义。实验组AHBV总RNA量为对照组总RNA量的17．0%±2．7％，两组比较，F=25．6，p=0．018，差异有统计学意义。干扰组AHBV总RNA的量恢复到对照组的74．0％±3．9％，实验组A与干扰组A比较，F=21．3，p=0．032，差异有统计学意义。但HS3ST381对总RNA的下调与HBV的启动子活性无关。结论HS3ST381对HBV复制和HBV总RNA水平均有下调作用，但总RNA的下调不是HS3ST381直接作用于HBV启动子的结果。