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小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1基因的克隆与表达检测
1
作者
赵虹
杨子超
张惊宇
《中华老年医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期866-868,共3页
目的检测真核表达克隆pcDNA3.1烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)的水平和有效性。方法采用PCR的方法钓取小鼠源NMNAT1基因的cds全长片段,构建到T载体中,并转接到pcDNA3.1中;同时设计引物进行全基因测序;采用常规的脂质体转...
目的检测真核表达克隆pcDNA3.1烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)的水平和有效性。方法采用PCR的方法钓取小鼠源NMNAT1基因的cds全长片段,构建到T载体中,并转接到pcDNA3.1中;同时设计引物进行全基因测序;采用常规的脂质体转染方法转染入Hela细胞系中表达小鼠源NMNAT1基因,通过qPCR和Western blot的方法检测克隆pcDNA3.1-NMNAT1的表达水平和表达有效性,并同时建立小鼠源NMNAT1基因的qPCR和Western blot检测方法。结果成功钓取了小鼠源NMNAT1基因,测序结果显示与数据库序列完全匹配,pcDNA3.1-NMNAT1通过脂质体转染入Hela细胞系,48h以后收取细胞,经过反转录以后进行qPCR检测和Western blot检测,结果显示表达克隆pCDNA3.1-NMNAT1能同时在tuRNA水平和蛋白水平高表达小鼠NMNAT1基因。结论成功从小鼠脑cDNA文库中克隆了NMNAT1基因的全长cDNA,与Pubmed序列完全一致,并构建到真核表达载体上正确表达NMNAT1蛋白质。
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关键词
硫酸腺苷酰转移酶
基因表达
原文传递
题名
小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1基因的克隆与表达检测
1
作者
赵虹
杨子超
张惊宇
机构
哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科
出处
《中华老年医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期866-868,共3页
基金
黑龙江省自然基金面上项目(200980)
文摘
目的检测真核表达克隆pcDNA3.1烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)的水平和有效性。方法采用PCR的方法钓取小鼠源NMNAT1基因的cds全长片段,构建到T载体中,并转接到pcDNA3.1中;同时设计引物进行全基因测序;采用常规的脂质体转染方法转染入Hela细胞系中表达小鼠源NMNAT1基因,通过qPCR和Western blot的方法检测克隆pcDNA3.1-NMNAT1的表达水平和表达有效性,并同时建立小鼠源NMNAT1基因的qPCR和Western blot检测方法。结果成功钓取了小鼠源NMNAT1基因,测序结果显示与数据库序列完全匹配,pcDNA3.1-NMNAT1通过脂质体转染入Hela细胞系,48h以后收取细胞,经过反转录以后进行qPCR检测和Western blot检测,结果显示表达克隆pCDNA3.1-NMNAT1能同时在tuRNA水平和蛋白水平高表达小鼠NMNAT1基因。结论成功从小鼠脑cDNA文库中克隆了NMNAT1基因的全长cDNA,与Pubmed序列完全一致,并构建到真核表达载体上正确表达NMNAT1蛋白质。
关键词
硫酸腺苷酰转移酶
基因表达
Keywords
Sulfate adnylyl transferase
Gene expression
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1基因的克隆与表达检测
赵虹
杨子超
张惊宇
《中华老年医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
原文传递
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