鲨鱼软骨多糖中硫酸角质素分离方法研究

探索简单有效的分离和检测鲨鱼软骨多糖中硫酸角质素组分的方法。使用乙醇分级沉淀法分离多糖中硫酸角质素,使用硫酸-咔唑法测定糖醛酸含量,Mono Q HPLC法测定硫酸角质素含量。:硫酸角质素从多糖中分离的条件:氯化钠浓度为2.0%,乙醇浓度小于56%时;氯化钠浓度为1.5%,乙醇浓度小于58%时;氯化钠浓度为1.0%,乙醇浓度小于60%时。使用乙醇分级沉淀法可实现鲨鱼软骨多糖中硫酸角质素组分的分离,Mono Q HPLC法可简单快速检测多糖中硫酸角质素组分。

离子肼飞行时间质谱表征硫酸软骨素/硫酸角质素二糖

硫酸软骨素(CS)和硫酸角质素(DS)结构决定它与蛋白的相互作用。因此对CS/DS结构的解析,能够进一步阐明结构与功能之间的关系。采用电喷雾离子阱多级质谱技术(ESI-MSn)在负离子模式(ESI-)下表征8种CS/DS二糖裂解规律。二糖的裂解发生在糖苷键和糖环位置,N-乙酰半乳糖胺上主要断裂方式为0,2X,而糖醛酸主要断裂方式为0,2Z。所含亚硫酸根越多越不稳定。亚硫酸根的位点决定了糖结构稳定性,含4位氧亚硫酸的二糖相对最不稳定。此外糖苷键的位置也决定了糖结构的稳定性。二级质谱表明同分异构体有其特定的裂解规律。该质谱裂解规律有助于CS/DS二糖同分异构体的鉴定。

膝关节腔注射透明质酸钠对成人大骨节病血清透明质酸、CD44、硫酸角质素含量的影响

目的探讨透明质酸钠治疗对大骨节病(KBD)患者血清中透明质酸(HA)、CD44、硫酸角质素(KS)含量的影响。方法分别检测关节腔注射透明质酸钠的成人KBD患者治疗前、治疗4周后,以及健康成人血清中的HA、CD44、KS含量。结果 KBD患者血清HA、CD44、KS含量明显高于健康成人,且不同性别HA、CD44、KS含量无差异。在经过关节腔注射透明质酸钠治疗后,血清中三指标含量均明显下降,其中HA含量男性高于女性。结论膝关节腔注射透明质酸钠可明显降低KBD患者血清中的HA、CD44、KS含量。血清HA、CD44、KS含量可作为KBD疗效评价指标之一。

马氏珠母贝磺基转移酶基因的克隆及功能

硫酸角质素具有丰富的携带大量负电荷的磺酸基团,参与生物矿化的成核过程。磺基转移酶催化磺酸基团的转移,对硫酸角质素的生物合成起决定性作用。本研究利用RACE技术克隆马氏珠母贝磺基转移酶PmCHST1a全长,并通过RNA干扰技术检测PmCHST1a对硫酸角质素合成及贝壳珍珠层形成的影响。结果显示,PmCHST1a基因全长1385 bp,编码366个氨基酸;含有磺基转移酶结构域,具有跨膜结构和信号肽,定位于高尔基体上。组织差异表达分析发现,PmCHST1a在中央膜显著高表达。注射PmCHST1a的RNAi探针后,PmCHST1a在中央膜的表达量显著下调,并且外套膜外液中硫酸角质素的浓度显著降低;SEM检测发现珍珠层结构紊乱。综上所述,PmCHST1a可能通过影响外套膜外液中硫酸角质素的合成,参与珍珠层的形成。本研究为进一步探讨磺基转移酶及其参与合成的糖胺聚糖硫酸角质素在马氏珠母贝生物矿化中的作用提供依据。

六味地黄丸对椎间盘体外退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响

背景:六味地黄丸作为补益肝肾名方,临床应用其治疗腰痛已取得良好的效果,而有关六味地黄丸治疗肾虚型腰痛的作用机制尚不明确。目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型细胞外基质组分的影响,探讨六味地黄丸防治椎间盘退变的疗效。方法:将20只新西兰兔带终板的L1-L6椎间盘100个随机分为空白对照组、肿瘤坏死因子α组、p38-JNK/SAPK阻断组、六味地黄丸组、肿瘤坏死因子α+六味地黄丸组,每组20个。肿瘤坏死因子α组培养液中含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL,p38-JNK/SAPK阻断组培养液中含p38MAPK特异性阻断剂SB203580,JNK特异性阻断剂SP600125各20μmol/L 10μL,六味地黄丸组培养液中含体积分数为10%六味地黄丸血清,肿瘤坏死因子α+六味地黄丸组含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL和体积分数为10%六味地黄丸血清,分别于培养的第2,4,8,14天收集标本待测。结果与结论:在培养基中加入肿瘤坏死因子α能明显上调Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达,下调糖胺多糖含量、硫酸软骨素/硫酸角质素比值、透明质酸含量,蛋白多糖mRNA和蛋白的表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达(P<0.05),六味地黄丸含药血清可部分对抗肿瘤坏死因子α所导致的改变,提示六味地黄丸可在一定程度上延缓了椎间盘退变。

大鼠骨骼双染标本制作方法及要点

茜素红对已骨化骨骼的染色有较强的特异性，很容易将其显示成红色或紫红色，自1897年Schultze采用茜素红对骨骼进行单染以来，该方法已成为研究骨骼畸形的常用方法。根据阿利新蓝可使软骨中硫酸软骨素、硫酸角质素等主要成分呈现蓝色的特点，Dawson等改进了单染法，采用茜素红和阿利新蓝对骨骼标本进行双重染色，使之成为研究骨和软骨发育较为直观的方法。

灌胃给予六味地黄丸后椎间盘退变组织蛋白多糖成分的变化

背景:蛋白多糖、硫酸软骨素、硫酸角质素、透明质酸均是维持椎间盘正常结构的重要物质,影响整个椎间盘的生理功能。目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘蛋白多糖成分的影响,探讨六味地黄丸防治椎间盘退变的疗效。方法:将80只新西兰兔随机分为六味地黄丸组、模型组、假手术组、空白对照组,每组20只。模型组、六味地黄丸组予建立椎间盘退变动物模型;假手术组行相同手术入路进入腰椎,再依次缝合组织;六味地黄丸组给予六味地黄胶囊混悬液10 mg/kg灌胃,1次/d;模型组、假手术组、空白对照组灌予等量生理盐水,1次/d,自然喂养。于2,4,6,8周后每个时间点处死动物,每次每组处死5只。留取椎间盘标本,测量椎间盘细胞蛋白多糖成分。结果与结论:随着给药时间的延长,六味地黄丸能上调椎间盘退变模型中糖胺多糖含量、硫酸软骨素/硫酸角质素比值及透明质酸含量,从而稳定蛋白多糖含量,在一定程度上延缓椎间盘的退变。

湿注骨节膝骨关节炎关节液CS和KS分析及临床意义

目的:探讨湿注骨节膝骨关节炎关节液中硫酸软骨素(CS)和硫酸角质素(KS)含量与关节软骨损伤程度的关系。方法:2011年5月—2012年12月收集膝骨关节炎病例63例(67膝),Kellgren和Lawrecne分级,采用ELISA法用酶标仪测定CS和KS含量,与健康对照组比较,分析KOA软骨损伤Kellgren和Lawrecne分级与CS和KS含量的相关性。结果:Kellgren和Lawrecne分级0级与1级CS含量分别显著高于2、3、4级(P<0.05),1级与0级KS含量分别显著高于3级和4级(P<0.05),4级KS/CS显著高于0、1、2、3级(P<0.05)。结论:湿注骨节KOA关节液KS和CS含量的变化可应用于关节软骨明显损伤与否的评估,CS/KS增高能够提示关节软骨的损伤严重,已经波及软骨下骨质。

实验性骨软骨移植的观察

本文用组织学及组织化学染色方法,检查了54只成熟家兔的新鲜自体、新鲜异体及延期贮存异体骨软骨移植的形态变化及转归,实验发现新鲜自体移植软骨可存活;新鲜异体移植软骨本身不能长期存活,而逐渐由宿主新生纤维结缔组织代替,并化生成纤维软骨及部分透明软骨;延期贮存的异体移植软骨不能存活而迅速坏死消失,不能修复缺损。认为新朝自体移植比异体移植效果好;异体移植中,新鲜异体移植比延期贮存异体移植效果好。异体移植物的转归可能与免疫反应、营养障碍及贮存方法不当有关。

锌钙对家兔骺软骨基质组分构成的影响

软骨具有弹性和张力强度的性能,才能承担起支持负重的功能。决定软骨性能的不是软骨细胞,而是软骨基质。诸多因素都可影响软骨的性能。锌钙等无机元素是其中重要因素之一。我们在研究锌钙对家兔骺软骨形态学影响的同时。

大骨节病儿童关节软骨蛋白多糖组分构成的定性观察

本文应用盐离子浓度不同的阿尔新蓝染色法,定性观察了正常儿童和大骨节病儿童关节软骨蛋白多糖组分构成不同,看到大骨节病儿童关节软骨KS和CS都减少,相对KS比正常者有所增加趋势。并对其可能发生的原因进行初浅探讨。

氨基多糖的生化研究进展

氨基多糖(又称粘多糖)是构成结缔组织基质的主要成份。它们以和蛋白质相结合的方式,广泛分布于结缔组织中,具有许多重要的生理功用,如维持结缔组织的支持、润滑和营养交换,调节细胞外液容量和化学组成,参与和控制骨的钙化,促进创伤愈合等。人体中常见的氨基多糖有7种:透明质酸、4-及6-硫酸软骨素(硫酸软骨素A及C),硫酸皮质素(硫酸软骨素B),肝素。

软骨肉瘤预后测试法

蒙特利尔Shriner儿科医院的生物化学家Robin Poole获得美国矫形外科医师科学会授与的软骨肿瘤预后研究奖。这项研究可使医师们通过血液中与胚胎组织有关的标记分子来检查软骨肉瘤。也可使医师们根据软骨肉瘤改变胚胎基质分子趋向成人的特征的程度来估计其恶性度。 Poole利用针对骨骼硫酸角质素和人体胚眙蛋白多糖(HFPG)846(一种与胚胎软骨有关的抗原表位)的单克隆抗体,通过放射免疫测定法分析了人体软骨肉瘤中的蛋白多糖。这是在结缔组织中发现的糖蛋白。他还从软骨肉瘤、胎儿骺软骨。

T─2毒素和低硒饲料对雏鸡关节软骨基质代谢损伤的病理观察

用Ｔ－２毒素和低硒饲料喂养雏鸡，经组织化学方法观察软骨胶原和蛋白多糖含量的变化，结果发现，与对照组相比，低硒饲料组、Ｔ－２毒素组、Ｔ－２毒素加低硒组Ⅱ型胶原蛋白和硫酸软骨素、硫酸角质素含量均减少，Ⅰ型胶原含量增加，以Ｔ－２毒素加低硒组变化最为显著，低碱饲料组变化最小，而Ｔ－２毒素补硒组各项指标均接近正常。提示低硒和Ｔ－２毒素对软骨基质均有毒性作用，低硒能增强Ｔ－２毒素；硒；胶原蛋白；软骨素；

人Lumican基因转基因鼠模型的建立

目的建立携带突变位点（cDNA596T〉C）的人Lumican（LUM）基因的转基因鼠模型。方法实验研究。利用基因重组技术，将人工合成的LUM基因第二外显子596位碱基T替换为C，再克隆到质粒pRP．Des3d的多克隆位点，构建pRP．EX3d—EFlA〉LUM／flag〉IRES／hrGFP质粒载体；然后用显微注射法将其转至BDFl小鼠受精卵雄原核中，存活的受精卵再移入美国癌症研究所（ICR）假孕雌鼠输卵管内，得到可表达LUM基因的F0代转基因小鼠C57一TgN（LUM）CCMU。经PCR、免疫印迹杂交法分析子代鼠中基因整合及表达的情况。结果得到31只新生仔鼠，PCR检测有6只LUM阳性转基因鼠，免疫印迹杂交法证明转基因阳性鼠转入的目的基因片段确实合成了相应蛋白质。稳定遗传3代，共获得128只仔鼠，经PCR检测其中有68只为LUM阳性，阳性率达53．13％。结论携带突变位点（cDNA596T〉C）的LUM基因的转基因鼠模型构建成功，为进一步探索LUM基因突变对病理性近视眼的发生发展及细胞外基质成分的影响提供了重要的研究平台。

人突变Lumican基因转基因小鼠屈光变化特点

目的：探讨人突变Lumican基因转基因小鼠生后不同时间屈光状态及其变化特征。方法实验研究。54只（雄性27只，雌性27只）人突变Lumican基因（cDNA 596T〉C）转基因小鼠，于生后3、4、5、6、8、10、12、16、20周共9个时间点分别通过随机数字表法随机选取6只（雄性3只，雌性3只）转基因小鼠，快速散大瞳孔后检影验光测量屈光度数。对比相同时间点转基因小鼠双眼间及雌雄性别间的屈光度数，采用配对t检验；不同时间点转基因小鼠屈光度数的比较采用非参数多个独立样本Kruskal？Wallis H检验，两两组间屈光度数比较采用非参数两个独立样本Mann？Whitney U检验。结果同周龄组转基因小鼠双眼间比较屈光度数差异无统计学意义：第20周转基因小鼠右左眼屈光度均值分别是（1.50±0.45）和（1.25±0.42）D，（t=-0.889，P〉0.05），第3周转基因小鼠右左眼屈光度均值分别是（-2.50±2.59）和（-2.50±4.32）D，（t=0.000，P〉0.05）；同周龄组不同性别转基因小鼠眼间比较屈光度数差异无统计学意义：第3周转基因小鼠雌雄性别眼屈光度均值分别是（-0.5±3.83）和（-4.17±1.94）D，（t=2.079，P〉0.05），第12周转基因小鼠雌雄性别眼屈光度均值分别是（1.50±0.84）和（1.50±1.87）D（t=0.000，P〉0.05）；不同周龄组转基因小鼠屈光度数差异有统计学意义（H=20.910，P0.001）。结论人突变Lumican基因转基因小鼠出生后3周时为近视，随时间增加向远视发展，第6周远视屈光度数达到最大，8～20周时远视屈光度数逐渐减小并趋于稳定。（中华眼科杂志，2015，51：527-531）

黏多糖贮积症ⅣA型诊断与治疗进展

黏多糖贮积症ⅣA型(MPS ⅣA)是一种累及多器官、严重影响生活质量的罕见病。患者因常染色体隐性变异造成N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(GALNS)缺失,使硫酸角质素和软骨素-6-硫酸酯在细胞中贮积引起。患者临床表现具有高度异质性,但智力正常。白细胞或成纤维细胞中GALNS活性测定为确诊MPS ⅣA的金标准。MPS ⅣA是一种进行性疾病,需尽早诊断,及时施行多学科协同干预,并开展依洛硫酸酯酶α酶替代疗法以改善患者临床结局。

粘多糖贮积症Ⅳ型酶学诊断与产前诊断

粘多糖贮积症Ⅳ型（Morquio病）是常染色体隐性遗传病。它包括粘多糖贮积症Ⅳa型与粘多糖贮积症Ⅳb型两个亚型。Ⅳa型是由半乳精-6-硫酸盐硫酸酯酶缺乏所致，Ⅳb型为β-D半乳糖苷酶缺乏所致。粘多糖贮积症Ⅳ型主要导致硫酸软骨素（CS）和硫酸角质素（KS）降解障碍，在骨和软骨细胞沉积，使骨发育障碍。

ⅣA型黏多糖贮积症患者二例应用酶替代疗法的效果评价

黏多糖贮积症(mucopolysaccharidosis,MPS)是一组罕见的遗传代谢病。所有MPS疾病的共同临床特征包括骨骼和关节异常、视力和听力障碍、心肺问题、肝脾肿大等[1]。ⅣA型MPS以常染色体隐性遗传方式遗传,是由于缺乏N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(N-acetylgalactosamine-6-sulfatase,GALNS)活性,造成糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)中的硫酸角质素和硫酸软骨素-6-硫酸盐无法在溶酶体中代谢。

黏多糖贮积症ⅣA型诊治共识

黏多糖贮积症(MPS)ⅣA型是由于N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶缺乏,进而影响溶酶体内硫酸角质素和软骨素-6-硫酸酯降解的一种溶酶体贮积症。早期识别MPSⅣA型患者的临床特征和早期诊断对于提高疾病治疗疗效、预防疾病的并发症尤为重要。中华医学会和中国医师协会等专家基于临床实践并借鉴国外相关指南,结合国内外对MPSⅣA型诊治的循证研究,就MPSⅣA型的临床表现、诊断及鉴别诊断、治疗、遗传咨询等相关内容,制定临床诊治共识。