基于磁性纳米材料Fe_(3)O_(4)@PPy和聚集诱导发光材料(TTAPE)检测肝素药品中的多硫酸软骨素残留

合成了一种聚吡咯修饰的磁性纳米颗粒(Fe_(3)O_(4)@PPy),通过结合AIE荧光探针四苯基乙烯衍生物(TTAPE)建立了一种检测肝素药品中多硫酸软骨素的检测方法。肝素和多硫酸软骨素与TTAPE结合导致运动受限,进而释放荧光,而Fe_(3)O_(4)@PPy加入后可以猝灭其荧光。研究了肝素和多硫酸软骨素与TTAPE结合后荧光增强规律和Fe_(3)O_(4)@PPy对它们的荧光猝灭规律,建立了不同的猝灭曲线,进而同时检测肝素和多硫酸软骨素。实验确定了肝素和多硫酸软骨素的最佳荧光检测波长为482 nm,Fe_(3)O_(4)@PPy的使用量为5 mg,检测浓度的线性范围为0~3.5 mg/L,肝素浓度的相对偏差在0.5%以下。肝素实际样品中多硫酸软骨素的回收率为90%和96.67%,相对标准偏差为4.4%和4.1%。

川芎清脑颗粒联合硫酸软骨素治疗神经性偏头痛疗效观察

目的:观察川芎清脑颗粒联合硫酸软骨素(ChS)治疗神经性偏头痛的疗效。方法:96例随机分为两组各48例,对照组给予ChS治疗,观察组给予川芎清脑颗粒联合ChS治疗。结果:观察组头痛发作持续时间、头痛发作次数、VAS评分、各项证候积分、总积分及各脑动脉Vm值比治疗前改善(P<0.05),且观察组改善程度优于对照组(P<0.05)。观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。结论:川芎清脑颗粒联合ChS治疗神经性偏头痛可提高疗效。

硫酸软骨素联合系统康复训练在老年女性骨关节损伤中的应用效果分析

目的探讨硫酸软骨素联合系统康复训练在老年女性骨关节损伤中的应用效果。方法选取2020年7月至2022年7月郑州市第七人民医院收治的98例老年女性骨关节损伤患者作为研究对象,按照不同治疗方法将其分为观察组(49例)和对照组(49例),观察组患者在对症支持治疗的基础上予以硫酸软骨素联合系统康复训练治疗,对照组患者在对症支持治疗的基础上单纯予以硫酸软骨素治疗,对比观察两组患者关节滑液炎症因子及细胞因子水平、疼痛程度、关节压痛指数、关节肿胀指数等临床症状指标与临床疗效。结果治疗1个月后,观察组患者关节滑液白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及视觉模拟评分法(VAS)评分、关节压痛指数评分、关节肿胀指数评分均明显低于对照组(t=7.605、9.629、5.563、2.653、3.200,P<0.001、P<0.001、P<0.001、P=0.009、P=0.002),关节滑液转化生长因子-β(TGF-β)水平明显高于对照组(t=4.002,P<0.001);治疗1个月后,观察组患者中显效20例、有效25例、无效4例,明显优于对照组患者的显效15例、有效20例、无效14例(Z=-1.983,P=0.047)。结论硫酸软骨素联合系统康复训练治疗老年女性骨关节损伤,能有效改善关节炎症反应,缓解关节疼痛,减轻关节肿胀程度,疗效显著。

硫酸软骨素钠的制备及抗骨关节炎活性研究进展

硫酸软骨素钠是一种硫酸化的糖胺聚糖,由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖的重复双糖单位组成。硫酸软骨素钠的工业生产是以陆地生物或海洋生物软骨组织为原料,经过特定的提取和纯化工艺制得,被认为具有抗骨关节炎及其他多种潜在的生理活性,在保健食品、化妆品、药品等领域具有广阔的应用前景和发展空间。该文对硫酸软骨素钠的传统制备技术、微生物合成工艺的开发情况与问题,以及基于体外细胞、动物模型和临床随机对照试验的抗骨关节炎活性研究现状进行综述,分析了现阶段研究的局限性并提出相应对策,为进一步规范和开发硫酸软骨素钠提供参考。

硫酸软骨素纳米硒的结构表征及其对Hela细胞迁移和侵袭的影响

对硫酸软骨素纳米硒(selenium-chondroitin sulfate nanoparticles,SeCS)的结构进行鉴定,并考察其对Hela细胞迁移和侵袭的影响。以硫酸软骨素为模板,采用亚硒酸钠-维生素C氧化还原法制备SeCS,并运用透射电镜、扫描电镜、X射线光电子能谱仪和傅立叶红外光谱仪对SeCS进行结构表征;通过划痕实验和细胞迁移侵袭实验(Transwell)检测SeCS对Hela细胞迁移及侵袭的影响;通过Western blot免疫印迹法检测SeCS对细胞内基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)表达水平的影响。实验结果表明,制备所得的SeCS是零价态的分散良好的球形纳米粒,表面光滑。Hela细胞经20μg/mL SeCS处理后,细胞的迁移率和侵袭率分别从对照组的100%下降到(59.19±7.74)%和(82.43±4.21)%,表明SeCS能够抑制细胞的迁移和侵袭。进一步的研究发现,SeCS下调了MMP-2和MMP-9蛋白的表达量,表明SeCS通过降低MMP-2和MMP-9的蛋白表达来抑制细胞的迁移和侵袭。

硫酸软骨素蛋白多糖在脊髓损伤中的研究进展

硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulfate proteoglycans,CSPGs)是中枢神经系统细胞外基质的组成部分,在中枢神经系统发育、正常维持及病理过程中都发挥着关键的作用。脊髓损伤后,损伤部位CSPGs的表达明显上调,这主要源于病变部位活化的星形胶质细胞。CSPGs的上调会限制脊髓损伤部位的轴突再生、传导和再髓鞘化,并且可以促进脊髓损伤中的炎症反应,不利于脊髓损伤后神经功能恢复。因此,抑制CSPGs可能是促进脊髓损伤后轴突再生和功能恢复的有效治疗方法。本文对CSPGs在脊髓损伤中的研究现状进行综述。

中药硬膏热贴敷联合注射用硫酸软骨素治疗老年关节痹痛的效果

目的探讨老年关节痹痛患者采用中药硬膏热贴敷联合注射用硫酸软骨素治疗的临床效果。方法100例老年关节痹痛随机分为对照组与观察组各50例,对照组采用注射用硫酸软膏素治疗,观察组采用中药硬膏热贴敷+注射用硫酸软骨素治疗,两组均连续治疗14 d,对比两组治疗前、治疗14 d时中医证候评分、疼痛程度〔视觉模拟评分(VAS)〕、血清炎症因子〔类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)〕,病情改善情况〔西安大略和麦玛斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)〕、日常生活能力〔日常生活活动能力量表(ADL)〕,并统计两组不良反应发生情况。结果治疗14 d时,观察组中医证候评分、VAS及血清RF、CRP水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组WOMAC评分低于对照组,ADL评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应发生率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论老年关节痹痛患者采用中药硬膏热贴敷与注射用硫酸软骨素联合治疗可改善临床症状,缓解疼痛,减轻炎症反应,对患者病情及日常生活能力的影响好,且不会增加不良反应。

罗非鱼头硫酸软骨素对RAW 264.7细胞和小鼠免疫刺激活性研究

本文采用了RAW 264.7细胞和免疫抑制模型,通过体外、体内实验研究罗非鱼头硫酸软骨素(CS)的免疫刺激活性。结果表明,罗非鱼头硫酸软骨素(CS)可以诱导RAW 264.7细胞产生NO、IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α;环磷酰胺(CTX)诱导小鼠的胸腺萎缩(胸腺指数0.11%±0.01%),低剂量CS(胸腺指数(0.17%±0.03%))、高剂量CS(胸腺指数(0.18%±0.02%))干预后,显著上调了小鼠胸腺指数(P<0.05);同时,CS干预显著上调CTX诱导小鼠脾脏指数(P<0.05),上调绒毛长度和V/C值并且高剂量CS显著上调了绒毛长度(330.92±21.55)μm(P<0.05);另外,CS对CTX诱导小鼠血清sIgA的分泌有促进作用。这些结果表明CS可以改善免疫抑制小鼠肠道屏障损伤及免疫功能。因此,本研究可为罗非鱼硫酸软骨素的肠道黏膜免疫调节作用提供理论基础,并表明罗非鱼头硫酸软骨素(CS)是一种潜在的可替代鲨鱼硫酸软骨素的免疫调节多糖,并可能成为干预免疫疾病相关功能食品的潜在材料。

鲨鱼硫酸软骨素二糖组成分析及其4S/6S比值的讨论

目的研究鲨鱼来源硫酸软骨素的二糖组成,并对鲨鱼硫酸软骨素(shark-CS)4S/6S(N-乙酰半乳糖胺上4-硫酸化基团/N-乙酰半乳糖胺上6-硫酸化基团)比值进行探讨。方法通过酶解液相色谱法及文献比较对鲨鱼来源的硫酸软骨素二糖组成进行分析。结果鲨鱼硫酸软骨素主要由6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-6S)、4-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-4S)、2,6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-2,6diS)以及无硫酸化的软骨素二糖(ΔDi-0S)组成,其百分含量分别为28%~65%、10%~44%、9%~25%、0.5%~23%。Shark-CS 4S/6S比值不超过0.8。结论提出Shark-CS 4S/6S比值的正确计算方法,解决了数据相互矛盾的问题。指出USP43中关于shark-CSΔDi-6S峰面积百分比大于ΔDi-4S峰面积百分比的不合理规定,为USP43修订提供参考与依据。

硫酸软骨素黑豆粉果冻的制备工艺研究及优化

以硫酸软骨素和黑豆粉为原料,开发了一种具有保健功能的黑豆硫酸软骨素果冻。通过单因素试验和正交试验,对黑豆硫酸软骨素果冻的制备工艺参数进行研究。结果表明,黑豆硫酸软骨素果冻的最佳配方为黑豆粉与(85~90℃)纯净水的料液比1∶10(g∶mL),赤藓糖醇添加量13.1%,果冻粉添加量2.2%,竹炭粉添加量0.24%,硫酸软骨素添加量0.75%,氨基酸葡萄糖添加量1.5%。该配方所得黑豆硫酸软骨素果冻豆香味浓郁和谐、甜味适中、风味独特。

硫酸软骨素裂解酶ABCⅡ的高效融合表达及其酶学性质研究

目的:本研究旨在实现硫酸软骨素裂解酶ABCⅡ(chondroitinase ABCⅡ,ChSase ABCⅡ)的高效可溶性表达并研究其酶学性质,为ChSase ABCⅡ在药品和保健食品生产中的应用奠定基础。方法:在优化ChSase ABCⅡ基因原始序列的基础上,构建重组质粒pET-28a-His-ChSase ABCⅡ并优化其表达条件;利用亲和层析得到带有多聚组氨酸标签(polyhistidine-tag,His-tag)的ChSase ABCⅡ融合蛋白后,研究了His-ChSase ABCⅡ的部分酶学性质。结果:构建的His-ChSase ABCⅡ融合蛋白表达系统能在大肠杆菌中实现可溶性表达;在表达宿主为E.coli BL21(DE3)和诱导剂(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)浓度为125μmol/L的优化条件下,发酵液酶活力可达到7206.83±184.27 IU/L;纯化后的His-ChSase ABCⅡ酶比活力为22.02±0.39 IU/mg蛋白,最适pH和温度分别为7.5和40℃,其在30~40℃条件下较为稳定,且半衰期在2 h以上。His-ChSase ABCⅡ能特异性有效分解硫酸软骨素,其K_(m)值为10.4±0.8μmol/L,Kcat值为9.4±0.2 s^(-1)。结论:本论文通过基因优化和融合表达等策略实现了His-ChSase ABCⅡ的高效表达和纯化。此外,His-ChSase ABCⅡ的酶学性质可基本满足其在医药和营养产品工业生产中的应用需求。

硫酸软骨素应用于骨修复材料中的研究进展

硫酸软骨素是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的重要组成部分。近年来,硫酸软骨素被证实在生物医学应用中具有潜在的功效,已被广泛应用于骨再生和骨修复治疗,尤其是在颅面修复和牙科医学领域。研究表明,硫酸软骨素衍生物及硫酸软骨素复合支架在促进成骨和生物矿化方面显示出极大的潜力。但是,由于硫酸软骨素种类繁多,应用形式广,对硫酸软骨素成骨修复机制的研究仍然存在不足。该文就硫酸软骨素的生物学特性、成骨修复作用、不同生物材料设计中的应用及未来展望进行阐述。

不同饵料对中间球海胆摄食与生长及硫酸软骨素积累的影响

【目的】明确海带、江蓠和石莼3种饵料对中间球海胆摄食、壳径增长、体质量增长、性腺颜色及硫酸软骨素积累的影响,为筛选适宜的养殖海胆饵料及合理制定鲜饵料匮乏期的中间球海胆投喂计划提供理论依据。【方法】将中间球海胆按投喂饵料分为海带投喂组、江蓠投喂组和石莼投喂组,在投喂第30、60和90 d,利用游标卡尺测定海胆壳径和壳高,使用天平测定海胆体质量和性腺重量,计算日平均摄食率、饵料系数、壳径特定生长率、体质量特定生长率和性腺指数;通过色度计测定性腺颜色并计算色差;采用酶联免疫分析法(ELISA)测定中间球海胆性腺硫酸软骨素含量和硫酸软骨素合酶活性。【结果】随着投喂时间的推移,各处理组中间球海胆的日平均摄食率呈下降趋势,江蓠投喂组日平均摄食率最高,其次是海带投喂组,石莼投喂组中间球海胆的日平均摄食率最低;在各时间段,饵料系数最高的是江蓠投喂组,其次是海带投喂组,最低的是石莼投喂组,且三者差异显著(P<0.05,下同);随投喂时间的推移,各处理组中间球海胆的壳径特定生长率和体质量特定生长率均呈下降趋势,在相同投喂时间下,各处理组的海胆壳径特定生长率和体质量特定生长率均差异显著,排序均为海带投喂组>石莼投喂组>江蓠投喂组;3个处理组的中间球海胆性腺指数存在一定差异,排序为海带投喂组>石莼投喂组>江蓠投喂组;江蓠投喂组和海带投喂组中间球海胆性腺颜色较优,江蓠投喂组性腺红度在各投喂时间段均最高,且在第90 d江蓠投喂组性腺黄度显著高于其余处理组,海带投喂组性腺亮黄色差在各投喂时间段均最低;江蓠投喂组的中间球海胆性腺硫酸软骨素含量和硫酸软骨素合酶活性最低,海带投喂组和石莼投喂组无显著差异(P>0.05)。【结论】不同饵料对中间球海胆摄食、壳径增长、体质量增长、性腺发育和品质及硫酸软骨素积累存在不同影响,在海带匮乏期可通过投喂石莼和江蓠进行有效补充,从而保障中间球海胆的生长和发育。

硫酸软骨素及其衍生物研究进展

硫酸软骨素是一种糖胺聚糖,以动物组织为原料,或者微生物细胞发酵法而制得,在临床上主要用于治疗和预防骨关节炎、心脑血管疾病及眼科疾病。近年来研究表明,硫酸软骨素及其衍生物具有多种潜在的生物活性,如抗炎、抗肿瘤、抗凝、抗血栓等,在多种生理和病理过程中发挥至关重要的作用,具有新药开发的前景。该文从硫酸软骨素及其衍生物现有的药理活性、临床研究方面进行综述,以期为后续研究提供参考。

HPLC法同时测定复方硫酸软骨素片中硫酸软骨素和甘草酸含量的研究

目的:建立高效液相色谱梯度洗脱-波长切换法同时测定复方硫酸软骨素片中硫酸软骨素和甘草酸含量的方法。方法:采用InertSustain C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以5 mmol·L^(-1)庚烷磺酸钠溶液为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,柱温为35℃,检测波长为199 nm(0~8 min时,检测硫酸软骨素)、251 nm(8~30 min时,检测甘草酸)。结果:硫酸软骨素钠和甘草酸分别在0.1502~3.0049 mg·mL^(-1)和0.01267~0.3168 mg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系,且该检测方法专属性、精密度、回收率等良好。4批样品中,硫酸软骨素和甘草酸的含量分别为72.1963~73.8014和1.4988~1.5480 mg·片-1。结论:该方法操作简单,结果准确,可用于复方硫酸软骨素片的质量控制。

鳐鱼硫酸软骨素提取工艺优化及其性质表征

以孔鳐加工的副产物软骨为原料,利用响应面方法优化鳐鱼硫酸软骨素提纯工艺,并对获得的鳐鱼硫酸软骨素进行质量及结构的表征。结果表明,最优提取工艺为碱液浓度2.3%、提取温度43℃、酶添加量0.7%时,硫酸软骨素提取率为43.32%。提取的鳐鱼硫酸软骨素符合国药标准,其重均分子量、数均分子量和多分散系数分别为40 752、38 257和1.065 2,经红外光谱分析,鳐鱼硫酸软骨素与鲨鱼硫酸软骨素具有相同结构组织,均由β-1,3糖苷键连接的β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基-β-D-氨基半乳糖组成,该研究结果不仅可大幅度增加鳐鱼加工产业的附加值,也可为硫酸软骨素的工业生产提供一定的技术支持。

HPLC法同时测定复方硫酸软骨素片中3个活性成分的含量

目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定复方硫酸软骨素片中硫酸软骨素、芍药苷和甘草酸3个活性成分的含量。方法:采用InertSustain C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以5 mmol·L^(-1)庚烷磺酸钠溶液为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,柱温为30℃,检测波长为230 nm。结果:硫酸软骨素、芍药苷和甘草酸分别在0.2923~7.3076、0.0026~0.1320和0.0061~0.3018 mg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率为98.5%~99.7%,RSD为1.0%~1.2%。4批样品中,硫酸软骨素、芍药苷和甘草酸的含量分别为72.9547~74.1036、0.6613~0.6898和1.5023~1.5209 mg/片。结论:本研究建立HPLC梯度洗脱法同时测定复方硫酸软骨素片中3个活性成分,该方法简便、快速、准确,可用于复方硫酸软骨素片的质量控制。

同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素及透明质酸含量的高效液相色谱法的建立

为了准确快速同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素和透明质酸含量,以半乳糖胺和葡萄糖胺为测定目标物,通过优化色谱条件和方法性试验,建立了一种高效液相色谱的测定方法。使用ZORBAX C18柱分离,用乙腈和乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.00 mL/min,在波长250 nm下测定。方法性试验表明,硫酸软骨素和透明质酸的质量浓度在100~500 mg/L范围与峰面积线性关系良好,其中硫酸软骨素的检出限为0.948 mg/L,重复性偏差0.089%,平均回收率99.71%,相对偏差0.35%;透明质酸的检出限为0.027 mg/L,重复性偏差0.045%,平均回收率97.74%,相对偏差0.92%。与传统方法相比,该法具有受杂质干扰影响小,准确度高,重复性优异,回收率以及精确度高的优势,可以实现准确快速同时测定软骨酶解物中硫酸软骨素和透明质酸的含量。

pH渐变条件下多酶分步连续酶解工艺制备鲟鱼硫酸软骨素与胶原蛋白肽

pH渐变条件下采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶分步连续酶解鲟鱼软骨,同时制备鲟鱼硫酸软骨素和胶原蛋白肽。分别通过温度、酶解时间、酶用量3个单因素实验,研究其对连续酶解效果的影响。综合分析得出最佳条件:碱性蛋白酶酶解温度为45℃,酶解时间为2 h,酶用量为100 U·g^(-1)底物;木瓜蛋白酶的酶解温度为50℃,酶解时间为2 h,酶用量为50 U·g^(-1)底物;菠萝蛋白酶的酶解温度为50℃,酶解时间为2 h,酶用量为30 U·g^(-1)底物。该工艺条件下制备的鲟鱼硫酸软骨素提取率为85%,纯度93%,胶原蛋白肽的提取率为82%,纯度为90%。研究建立的pH渐变条件下多酶分步连续酶解工艺,产率与纯度较国内现有生产方法均有提高,且碱液使用量减少,避免了有机溶剂的引入,从而可以降低生产成本,减轻环境污染负担。

硫酸软骨素酶ABC对大鼠脊髓损伤修复的影响

为了探讨硫酸软骨素酶ABC对脊髓损伤后损伤局部瘢痕形成和脊髓传导功能修复的影响,本研究首先制作大鼠脊髓全横断损伤动物模型,并将其分为脊髓损伤组(A组)和脊髓损伤治疗组(B组)。在观察期内对动物的行为学表现进行BBB评分;用免疫荧光组织化学方法观察损伤4周后硫酸软骨素酶ABC对损伤局部的硫酸软骨素蛋白聚糖(CSPGs)的裂解作用;用辣根过氧化物酶(HRP)示踪法观察损伤8周后神经纤维的再生情况。结果显示:A组与B组之间动物的行为学评分B组优于A组,有显著性差异(P<0.01);B组动物脊髓内硫酸软骨素蛋白聚糖阳性物质的表达明显低于A组,具有显著性差异(P<0.05),而硫酸软骨素核心蛋白的表达无显著性差异(P>0.05);HRP示踪法显示B组脊髓损伤头端可见少量HRP标记的神经元胞体和纤维。本研究结果提示硫酸软骨素酶ABC能够裂解CSPGs中的葡胺聚糖链,减少瘢痕,促进损伤的神经纤维再生。