硫酸软骨素钠的制备及抗骨关节炎活性研究进展

硫酸软骨素钠是一种硫酸化的糖胺聚糖,由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖的重复双糖单位组成。硫酸软骨素钠的工业生产是以陆地生物或海洋生物软骨组织为原料,经过特定的提取和纯化工艺制得,被认为具有抗骨关节炎及其他多种潜在的生理活性,在保健食品、化妆品、药品等领域具有广阔的应用前景和发展空间。该文对硫酸软骨素钠的传统制备技术、微生物合成工艺的开发情况与问题,以及基于体外细胞、动物模型和临床随机对照试验的抗骨关节炎活性研究现状进行综述,分析了现阶段研究的局限性并提出相应对策,为进一步规范和开发硫酸软骨素钠提供参考。

硫酸软骨素钠的比浊法测定

建立了硫酸软骨素钠含量的比浊测定法。硫酸软骨素钠与氯化十六烷基吡啶结合形成的乳浊液在 6 80 nm处的吸收度与硫酸软骨素钠浓度在 12 .5～ 2 5 0 μg/ ml范围内具良好的线性关系 ,r=0 .9992 ,方法平均回收率为99.98% ,RSD为 0 .33% ,乳浊液在 0 .5～ 2 h内稳定。测定结果与国际常用的 HPL C法一致 ,较国内用的氨基己糖测定法和葡萄糖醛酸测定法简便 。

高效凝胶色谱法同时测定眼用粘弹剂中透明质酸钠和硫酸软骨素钠的含量

样品经50mmol·L^(-1) NaH_2PO_4-0.1mol·L^(-1) NaCl混合溶液溶解后,首先采用凝胶渗透色谱与多角度激光光散射联用仪确定透明质酸钠和硫酸软骨素钠的分子量,依据分子量分布确定水凝胶色谱柱(OH pak SB-806HQ L012028与OH pak p8514-804L102028串联)为分离柱,OH pak SB-G G008146为保护柱,流动相采用50mmol·L^(-1) NaH_2PO_4-0.1mol·L^(-1) NaCl混合溶液,流量为0.5mL·min^(-1),以示差折光检测器进行测定。透明质酸钠和硫酸软骨素钠的质量浓度在0.10~1.0g·L^(-1)内与其峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.051,0.059g·L^(-1)。加标回收率在83.3%~110%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)小于2.2%。

十六烷基三甲基溴化铵光度滴定法测定硫酸软骨素钠盐

建立一种测定硫酸软骨素的新方法。十六烷基三甲基溴化铵在KH2 PO4 Na2 HPO4 缓冲溶液中、乳化剂OP共存下与硫酸软骨素反应形成离子对缔合物 ,溶液转变成稳定的乳化液。用光度滴定法测定硫酸软骨素。用标准加入法做回收试验 ,回收率为 99.9%～ 10 0 .2 % ,相对标准偏差0 .32 %～ 0 .4 0 %。方法应用于外贸样品测定 ,结果满意 ,方法准确、简便。

硫酸软骨素钠质量安全标准及关键控制点研究进展

硫酸软骨素钠是从动物软骨组织中提取的天然酸性黏多糖,主要作为一种抗骨关节炎药品和保健食品在世界范围内被广泛应用。由于硫酸软骨素钠的结构、物理化学特征、生理活性会因动物种类、组织、提取工艺的不同而存在差异,使得硫酸软骨素钠的质量安全控制存在难度。国内外针对硫酸软骨素钠都制定有相应标准,本文以中国、美国、日本、欧洲药典收载的硫酸软骨素钠原料标准为依据,进行分析、归纳和总结,综述了硫酸软骨素钠质量安全标准化发展现状和趋势。结合最新的研究成果,进一步提炼影响硫酸软骨素钠质量安全的关键控制点,对来源、潜在外源污染物、掺假等因素进行深入分析与探讨,有助于监管部门、生产企业准确把握影响硫酸软骨素钠质量安全的风险源。本文也明确了未来硫酸软骨素钠质量安全标准化的工作需求,为硫酸软骨素钠质量安全标准体系的不断完善提供参考。

硫酸软骨素钠含量检测方法的对比研究

目的:采用两种方法测定硫酸软骨素钠含量,并对两种分析方法进行比较。方法:滴定法用0.1%氯化十六烷基吡啶水溶液滴定,以溶液浊度逐渐增加,滴定至出现明显沉淀为滴定终点。酶解液相色谱法用强阴离子交换硅胶为填充剂(Hypersil SAX柱,250mm×4.6mm,5ul)以水(用稀盐酸调节pH值至3.5)为流动相A;以2mol/L氯化钠溶液(用稀盐酸调节pH值至3.5)为流动相B;流速为每分钟1.0ml;检测波长为232nm。梯度洗脱的HPLC法。结果:两种方法对硫酸软骨素钠的含量差别并不大。结论:酶解液相色谱法更为准确、灵敏度高,重现性好等优点。

三种方法测定鲨鱼硫酸软骨素钠含量的比较

利用酶解高效液相色谱法、高效液相色谱法及氯化十六烷基吡啶电位滴定法对鲨鱼硫酸软骨素钠含量进行检测,并对检测结果进行对比分析,结果显示,酶解高效液相色谱法不适用于鲨鱼硫酸软骨素钠含量的测定;而氯化十六烷基吡啶电位滴定法检测鲨鱼硫酸软骨素钠含量稍高于高效液相色谱法;相比之下,高效液相色谱法较适用于检测鲨鱼硫酸软骨素钠含量。

光度滴定法定量Cosequin~ DS咀嚼片中硫酸软骨素钠的方法验证与发展

本文对光度滴定法定量原料及CosequinDS咀嚼片中的硫酸软骨素钠进行了方法验证与发展。光度滴定条件是:0.1%(w/v)氯化十六烷基吡啶为滴定剂,光度指示检测波长420nm。在0.6～1.4mg/mL浓度范围内,硫酸软骨素钠的标准曲线呈线性(r≥0.99)。将咀嚼片粉碎成细粉并用水提取后,经0.45μm膜滤器过滤。回收率97%～103%。光度滴定法具有良好的专属性、准确度、精密度且线性卓越,非常适用于定量检测原料及CosequinDS咀嚼片中的硫酸软骨素钠。2001年由ElsevierScienceB.V.公布。

HPLC法测定鹿骨片中硫酸软骨素钠的含量

目的:建立HPLC法测定鹿骨片中硫酸软骨素钠的含量方法。方法:采用C18柱(250×4.6mm,5μm)为色谱柱;甲醇-0.004%庚烷磺酸钠溶液(20:80),用磷酸调节p H值至3.5为流动相;流速0.8m L·min-1;检测波长197nm。结果:该方法在0.0208mg·m L-1~0.2078mg·m L-1浓度范围内具有良好的线性关系,R=0.9999;平均回收率为99.80%,RSD(%)=0.35%。结论:该测定方法准确、可靠、重复性好,可作为鹿骨片的质量控制方法。

液液萃取/GC-MS法测定硫酸软骨素钠原料中的基因毒杂质N-亚硝基二甲胺与N-亚硝基二乙胺

目的:建立一种液液萃取法,采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术,测定硫酸软骨素钠原料中的基因毒杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)与N-亚硝基二乙胺(NDEA)。方法:采用Thermo TG-WAXMS色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm);柱温在40℃保持1 min,以25℃·min^(-1)升至240℃,保持2 min;进样口温度为220℃;载气为高纯氦,流速为1.0 mL·min^(-1)。质谱的离子源为EI源;电子能量为70 eV;离子源温度为280℃;传输线温度为240℃;进样量为1μL。结果:NDMA的检测限为0.64 ng·mL^(-1),在4~16 ng·mL^(-1)范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数r为0.9993。NDEA的检测限为0.176 ng·mL^(-1),在1.1~4.4 ng·mL^(-1)范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数r为0.9996。硫酸软骨素钠中均未检出NDMA与NDEA。结论:该法操作简便,专属性强,可以用于硫酸软骨素钠中的基因毒杂质NDMA与NDEA的测定。

酶解液相色谱法测定硫酸软骨素钠含量

目的:建立酶解液相色谱法测定硫酸软骨素钠的含量。方法:使用硫酸软骨素ABC酶酶解硫酸软骨素钠,使用强阴离子交换高效液相色谱测定酶解产生的二糖,通过计算二糖峰面积总和确定硫酸软骨素钠的含量。色谱柱为Zorbax SAX(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为pH 3.5的水和pH 3.5的2 mol.L-1的氯化钠溶液,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为232 nm,柱温为40℃。结果:硫酸软骨素钠的线性范围为0.25～1.50 mg.mL-1,r=0.9999;精密度RSD为0.3%;回收率为101.2%,RSD为1.6%(n=5);最低检测限为4.0μg.mL-1,定量限为11.9μg.mL-1。结论:该方法具有专属性好,灵敏度高,重现性好的优点。

硫酸软骨素钠分子质量及其分布的测定

目的:采用两种方法测定硫酸软骨素钠的相对和绝对分子质量及其分布,并对两种分析方法进行比较。方法:色谱柱为TSKgel G3000SWXL,流动相为2.84%硫酸钠(pH 5.0,含0.02%叠氮化钠),流速为0.5 mL·min-1,柱温为35℃,分子排阻色谱(SEC)法为示差折光(RI)检测器,分子排阻色谱和多角度激光光散射联用(SEC-MALLS)法的检测器为示差折光检测器(DNDC仪)和激光光散射仪联用。结果:SEC法和SEC-MALLS法测得的分子质量结果存在较大差异。结论:由于目前国内没有合适的硫酸软骨素钠分子质量测定用标样,SEC法测定结果与真实分子质量存在较大误差,SEC-MALLS法准确,可靠。

硫酸软骨素钠含量测定用国家对照品的研制

目的建立硫酸软骨素钠含量测定用国家对照品。方法以红外光谱法(IR)和高效液相色谱法(HPLC)进行鉴别,采用尺寸排阻色谱和多角度激光光散射联用方法(SEC-MALLS)测定绝对分子质量和分子量分布,采用质量平衡法计算硫酸软骨素钠待标对照品的含量。结果用药典新增订的含量测定方法对硫酸软骨素钠的原料进行测定,最终确定首批硫酸软骨素钠对照品的含量为99.1%。结论硫酸软骨素钠含量测定用国家对照品的建立可有效的控制产品质量。

硫酸软骨素A钠注射液细菌内毒素检查方法研究

目的建立检查硫酸软骨素A钠注射液细菌内毒素的方法。方法采用中国药典2005年版附录细菌内毒素检查法。结果硫酸软骨素A钠注射液浓度为0.15 mg.mL-1,用灵敏度为0.25 EU.mL-1的鲎试剂检测细菌内毒素,无干扰因素的影响。结论硫酸软骨素A钠注射液可用鲎试剂检查细菌内毒素。

HPLC法测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中硫酸软骨素钠的含量

目的：建立测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中硫酸软骨素钠含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为JADE-PAK ODS-AQ，流动相为0．008mol／L磷酸二氢铵溶液（pH=3．6），流速为0．5ml／min，检测波长为194μm，柱温为30℃，进样量为10ul。结果：硫酸软骨素钠检测质量浓度线性范围为5～62．5μg／ml（r=0．9999），平均回收率为99．12％（RSD=0．7％，n=9），检测限为2．5ng。结论：建立的方法灵敏度高、专属性强、操作简单、结果准确，可为控制该药品的质量提供参考。

硫酸软骨素钙制备研究

对以硫酸软骨素钠为原料制备硫酸软骨素钙的方法进行了研究,硫酸软骨素钠经水溶解阳离子交换树脂处理,用氢氧化钙和氯化钙离子转型,然后加95%酒精沉淀,制得硫酸软骨素钙;制得白色粉末状产品,收率95.70%,质量符合标准要求;该方法制备的产品收率高,质量符合标准要求,制备工艺切实可行。

硫酸软骨素注射剂质量状况评价与研究

目的考察硫酸软骨素注射剂的质量现状及存在问题,选取涉及产品有效性和安全性的关键质控项目进行研究,进一步完善质量标准。方法采用现行标准对抽验样品进行法定检验,查阅国内外标准及文献,赴生产企业实地调研,采用酶解液相色谱法、激光光散射法、反相色谱法及体积排阻色谱法等方法对该品种的质量状况进行全面评价。结果2016年硫酸软骨素注射剂国家评价性抽验结果表明,虽然法定标准检验结果均符合规定,但采用新的含量测定方法检测,多批次产品含量测定结果超出标准规定上限;标准中缺乏对相对分子质量的控制;二糖组成的测定结果提示,部分原料存在混入其他来源原料的风险;硫酸软骨素的抗凝血作用初步研究结果表明,不同来源的硫酸软骨素均具有抗凝血作用,鲨鱼来源的硫酸软骨素抗凝血作用最强。结论我国硫酸软骨素注射剂含量测定、相对分子质量与相对分子质量分布等检验项目亟待完善提高。

川芎清脑颗粒联合硫酸软骨素治疗偏头痛的临床研究

目的探讨川芎清脑颗粒联合硫酸软骨素治疗偏头痛的临床疗效。方法选取2017年3月—2018年3月在陕西省核工业二一五医院治疗的偏头痛患者76例,根据用药的差别分为对照组(38例)和治疗组(38例)。对照组口服硫酸软骨素钠片,0.6 g/次,3次/d;治疗组在对照组基础上口服川芎清脑颗粒,10 g/次,3次/d。两组患者均治疗4周。观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者临床症状评分、血清学指标和脑血流情况。结果治疗后,对照组临床有效率为81.58%,显著低于治疗组的97.37%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组头痛发作次数、头痛发作持续时间和头痛发作程度评分均明显降低(P<0.05),且治疗组患者临床症状评分明显低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)和溶血磷脂酸(LPA)水平均显著降低(P<0.05),且治疗后治疗组这些血清学指标明显低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者大脑前动脉(ACA)、大脑中动脉(MCA)、大脑后动脉(PCA)、基底动脉(BA)、椎动脉(VA)的平均血流速度(Vm)均显著降低(P<0.05),且治疗后治疗组脑血流情况明显优于对照组(P<0.05)。结论川芎清脑颗粒联合硫酸软骨素治疗偏头痛可有效改善患者临床症状,降低血清hs-CRP、MMP-9、VEGF、LPA水平,有利于脑血流速度改善。

两种粘弹剂对小切口白内障术后眼压的影响

目的 评价分散粘弹剂羟丙甲基纤维素(20g·L^(-1))及硫酸软骨素钠-透明质酸钠(30g·L^(-1))对小切口双侧白内障摘出术后眼压的影响。方法 老年性白内障患者20例40眼,全部进行小切口双侧白内障手术。于一眼白内障手术时随机选择1种粘弹剂,另眼时给予另1种粘弹剂。手术采用角膜缘反眉弓切口,长5mm,切开后环形撕囊,水分离,碎核刀碎核,晶状体圈娩出晶状体核,冲洗皮质。然后植入后房型聚甲基丙烯酸甲酯人工晶状体,不缝合。术前测眼压,术后6、24h及1周各测眼压1次。结果 术后6h羟丙甲基纤维素组眼压升高(3.8±5.0)mmHg(1kPa=7.5mmHg,P<0.001),硫酸软骨素钠-透明质酸钠组升高(7.7±7.6)mmHg(P<0.001),硫酸软骨素钠-透明质酸钠组眼压升高比羟丙甲基纤维素组明显(P=0.008)。眼压>30mmHg羟丙甲基纤维素组1眼、硫酸软骨素钠-透明质酸钠组5眼(P<0.05)。术后24h及术后1周平均眼内压无明显差异。结论 研究结果表明,硫酸软骨素钠-透明质酸钠在小切口白内障早期引起的眼压升高比羟丙甲基纤维素更明显。

新型磁性纳米载体的制备及其对溶菌酶吸附特性研究

采用超声辅助化学共沉淀法合成了功能性超顺磁性纳米颗粒（Fe3O4@CS—Na）；采93TEM对Fe3o4@CS—Na的形貌和粒径进行了表征，结果显示，Fe3O4@CS—Na的粒径大约在10～15nm；此外，以Fe3O4@CS—Na纳米颗粒为载体，对水溶液中溶菌酶（Lyz）的吸附特性进行了研究，由于载体具有较小的粒径，30min即达到了吸附平衡；Fe3O4@CS—Na对Lyz的吸附符合Langmuir吸附等温模型，且载体在重复六次的吸附一解吸附过程中对Lyz吸附容量没有明显地降低。Fe3O4@CS—Nail米颗粒有望在Lyz分离纯化和固定化中显示出广阔的应用前景。