人硫酸酯酶-1基因与肿瘤关系的研究进展

近年来，越来越多的研究表明，人硫酸酯酶-1（HSulf-1）基因在人类多种肿瘤中有着重要的作用，对肿瘤的生长，转移的起着负性调节的作用，而其启动子甲基化则是HSulf-1基因沉默的一种重要机制。但是，HSulf-1基因的抑癌机制尚没有完全研究清楚，本文就HSulf-1基因的结构、作用机制及在肿瘤中研究现状做一综述。

人硫酸酯酶1基因的作用机制及抗瘤活性

人硫酸酯酶-1(hSulf-1)能够使细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)脱硫酸化,从而抑制下游肝素结合生长因子信号途径的激活。人恶性肿瘤中hSulf-1常处于失活状态,转染外源性hSulf-1能够抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭,因此hSulf-1是肿瘤基因治疗的一个很有潜力的靶点。

hSulf-1过表达提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性

目的:探讨人硫酸酯酶-1(human sulfatase 1,hSulf-1)基因过表达是否提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性。方法:采用不同浓度AZD2281处理细胞,并筛选AZD2281处理的最佳浓度。将携hSulf-1基因的重组腺病毒Ad5-hSulf1感染MCF-7细胞,以Ad-hSulf1和AZD2281单独或联合处理MCF-7细胞,以Ad5-EGFP处理为对照。采用流式细胞术检测细胞周期,克隆形成实验检测细胞克隆形成率,Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)及磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)的表达,Transwell法、MTT法分别检测细胞的迁移及增殖。结果:AZD2281浓度为7μmol/L时对MCF-7细胞的抑制作用趋于峰值,用于后续实验。Ad5-hSulf1+AZD2281联合处理与AZD2281单独处理相比,MCF-7细胞的G2/M期细胞比例明显增多[(22.15±0.17)%vs(17.44±0.57)%,P<0.01],细胞克隆形成率[(21.43±1.52)%vs(49.43±1.44)%,P<0.01]及细胞周期蛋白CDK4的表达[(0.67±0.02)vs(0.72±0.02),P<0.05]、AKT的磷酸化水平[(0.17±0.003)vs(0.42±0.02),P<0.01]均明显降低,同时细胞的增殖率和迁移能力也有明显下降[(57.69±4.83)%vs(79.35±5.44)%;(10.33±1.53)个vs(50.67±2.31)个,均P<0.01]。结论:hSulf-1过表达可明显提高乳腺癌细胞MCF-7对AZD2281的化疗敏感性,阻滞细胞周期于G2/M期,并更明显地抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,这一效应可能是通过调节细胞周期蛋白CDK4及AKT通路产生的。

Hsulf-1介导PI3K/AKT信号通路抑制肝癌细胞侵袭转移的作用机制研究

目的探讨人硫酸酯酶-1(Hsulf-1)基因介导磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制肝癌细胞侵袭转移的作用机制。方法将构建成功的pcDNA 3.1(+)-Hsulf-1质粒及Hsulf-1 siRNA质粒分别转染肝癌细胞系SMMC7221细胞,应用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理,分为Hsulf-1过表达组、Hsulf-1 siRNA组、抑制剂组及空白组;采用RT-PCR法及Western blot法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和β连环蛋白(β-catenin)的mRNA及蛋白表达水平,采用Transwell小室实验法检测细胞迁移能力。结果Hsulf-1过表达组E-cadherin和β-catenin mRNA表达水平均明显高于空白组(均P<0.05);Hsulf-1 siRNA组、抑制剂组E-cadherin和β-catenin mRNA表达水平均明显低于空白组(均P<0.05)。与空白组比较,Hsulf-1过表达组Hsulf-1、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为高,p-AKT均明显为低(均P<0.05);Hsulf-1 siRNA组p-AKT蛋白表达水平明显为高,Hsulf-1、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为低(均P<0.05);抑制剂组p-AKT、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为低(均P<0.05)。与Hsulf-1 siRNA组比较,抑制剂组p-AKT、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为低(均P<0.05)。与空白组比较,Hsulf-1过表达组、Hsulf-1 siRNA组SMMC7221细胞迁移数均明显为高,抑制剂组SMMC7221细胞迁移数明显为低(均P<0.05);与Hsulf-1 siRNA组比较,抑制剂组SMMC7221细胞迁移数明显为低(P<0.05)。结论Hsulf-1基因可通过PI3K/AKT信号通路刺激E-cadherin,β-catenin的表达,抑制肝癌细胞侵袭转移,是肝癌侵袭转移的重要机制。

SULF1对肝癌细胞增殖的抑制作用相关分子机制研究

目的探究硫酸酯酶-1(SULF1)调控肝癌细胞增殖的相关机制。方法通过Western blot和免疫组化实验分析SULF1在正常肝组织和肝癌组织中表达的差异性。在HepG2和HuH-7细胞中构建过表达SULF1的稳转细胞系。通过EdU、CCK-8和集落形成实验探究过表达SULF1对肝癌细胞增殖的影响。通过Western blot探究SULF1调控肝癌细胞增殖的相关分子机制。结果与正常肝组织相比,SULF1在肝癌组织中呈低表达。过表达SULF1可以抑制肝癌细胞的增殖。SULF1可以促进p53的表达。结论SULF1在肝癌中作为一种抑癌基因,通过促进p53抑制肝癌细胞的增殖。