K_(88)抗原纯化中硫酸铵沉淀法的改进

硫酸铵沉淀法是一种用于蛋白质提纯的盐析方法 ,具有成本低、操作简单、对被分离物可保存其生物活性等优点而被广泛使用。我们在大肠杆菌菌毛蛋白K88纯化中采用硫酸铵沉淀法进行蛋白质粗提。

三氯醋酸/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白效果的对比研究

目的探讨三氯醋酸(TCA)/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果。方法选取2017年6月至2019年6月长春市中心血站采集的O型RHD阳性新鲜冰冻血浆12例,组成4个样品并分别编号为A1、A2、B1、B2。采用TCA/丙酮沉淀法去除A1、A2样品血浆中高丰度蛋白,硫酸铵沉淀法去除B1、B2样品血浆中高丰度蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证血浆中高丰度蛋白去除的效果。Clean-up Kit去除蛋白质中干扰物质,并采用SDS-PAGE和双向电泳(2-DE)验证Clean-up Kit的效果。结果银染的SDS-PAGE胶图显示,TCA/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法均可有效去除血浆高丰度蛋白,但与硫酸铵沉淀法相比,TCA/丙酮沉淀法的SDS-PAGE条带更清晰。SDS-PAGE和2-DE显示两种方法去除清蛋白的血浆Clean-up Kit后对去除血浆中其他干扰物质效果并不明显。结论TCA/丙酮沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果更好,且去除血浆中清蛋白后的血浆Clean-up Kit对去除效果无显著影响,可直接进行2-DE、图像分析及质谱检测分析。

过硫酸铵氧化沉淀法富集净化钴渣中钴的试验研究

某公司生产初期采用α-亚硝基-β-萘酚除钴工艺回收湿法炼锌净化钴渣中的钴,存在药剂消耗量大、钴渣含钴低、生产亏损的问题,后采用过硫酸铵氧化沉淀法富集钴,形成了一种钴的富集倍数高,成本低、流程短、易操作、环保的净化渣回收钴的实用方法。该方法分三个阶段:酸浸阶段包括稀酸选择性浸出和逆流酸性浸出,在较优工艺参数下,钴的浸出率达到95.8%;氧化除铁阶段在较优工艺参数下,滤液Fe含量小于80 mg/L;氧化沉钴阶段可得到含钴20%,锌18%~20%的沉钴渣,将沉钴渣用酸性水洗涤后,可得到含锌小于10%、含钴大于30%的富钴渣,可作为钴精矿销售。该工艺可为从湿法炼锌净化渣综合回收有价金属、富集钴提供参考。

辛酸-硫酸铵法在纯化血清旋毛虫特异性IgG抗体中的应用

目的从旋毛虫感染的大鼠和兔血清中纯化抗旋毛虫IgG抗体。方法分别用辛酸-硫酸铵法(CA-AS)、硫酸铵沉淀法(AS)纯化旋毛虫感染的大鼠和兔血清中抗旋毛虫IgG抗体。结果IgG抗体纯化率CA-AS法为80.05%～83.22%,AS法为67.00%～71.08%;得率CA-AS法为7.85～8.79mg/ml,AS法为12.04～12.12mg/ml;回收率CA-AS法为52.55%～55.03%,AS法为61.36%～64.87%。CA-AS法得率和回收率均低于AS法,但纯化率高于AS法。ELISA法测定CA-AS法和AS法纯化的抗体效价不变。结论CA-AS法是一种简便?快速?有效的纯化血清IgG抗体的方法,可用于大鼠和兔血清抗旋毛虫IgG抗体的纯化。

硫酸铵法提取血吸虫感染兔血清IgG初探

目的探索硫酸铵法提取血吸虫感染兔血清IgG用于制备阳性参考品的可行性。方法采用饱和硫酸铵溶液对感染兔血清中IgG进行沉淀分离,IHA试剂测定分离前后、冻干前后的抗体滴度以及冻干IgG复溶后的稳定性。结果滴度为1:320的血吸虫感染兔血清经硫酸铵沉淀法提取IgG,经透析、浓缩至原体积后抗体滴度为1:320,粗提IgG以阴性兔血清和蔗糖为冻干保护剂,冻干前、后滴度均为1:160;冻干IgG复溶0d、3d、6d和8d抗体滴度分别为1:160、1:80、1:40和1:40。结论硫酸铵沉淀法提取、冻干IgG不引起滴度改变,冻干保护剂的加入会使抗体滴度下降,冻干IgG复溶3d后滴度出现下降。因此,硫酸铵沉淀法可用于提取血吸虫感染兔血清IgG。

石杉碱甲多克隆抗体纯化方法的研究

目的根据石杉碱甲多克隆抗体的性质,采用不同的方法对其进行纯化及性质鉴定。方法本实验主要采用硫酸铵沉淀法、辛酸-硫酸铵沉淀法和Protein A亲和层析法分别对石杉碱甲多克隆抗体进行纯化,并分别对纯化后的抗体纯度、蛋白量和效价进行检测。结果电泳结果示Protein A亲和层析法纯化后仅出现两条色带,无明显杂带,纯度高。饱和硫酸铵沉淀法、辛酸-硫酸铵沉淀法和Protein A亲和层析法纯化后的抗体蛋白含量分别为4.67mg·m L^(-1)、6.89mg·m L^(-1)和13.44mg·m L^(-1)。Protein A亲和层析法纯化后抗体的效价大于1∶256000,其性质未发生变化。结论相较于硫酸铵沉淀法、辛酸-硫酸铵沉淀法,Protein A亲和层析法纯化石杉碱甲多克隆抗体的纯度、蛋白含量、抗体效价更高,纯化效果更优。

蘑菇中多酚氧化酶的酶学特性研究

采用二次丙酮法与 75 %硫酸铵沉淀法从蘑菇 (Agaricusbisporus)中提取多酚氧化酶 ;用分光光度法对蘑菇中多酚氧化酶酶学特性进行了较为系统的研究。结果表明 :二次丙酮法优于 75 %硫酸铵沉淀法 ;以邻苯二酚为底物 ,多酚氧化酶的最适pH为 7.0 ,最适温度为 30℃ ;亚硫酸钠、半胱氨酸、抗坏血酸为强抑制剂。

牛乳清蛋白中β-乳球蛋白的分离纯化

结合硫酸铵分段盐析和凝胶层析两种方法,从牛乳乳清蛋白中分离、提纯出β-乳球蛋白。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白成分,结果显示:①在20%～30%、70%～80%盐析段只有两条带,分别是β-乳球蛋白和α-乳清白蛋白带,得到较纯的蛋白;②再用SephadexG-50凝胶过滤层析,电泳结果显示只有一条带,并与标准β-乳球蛋白带一致,得到较纯的β-乳球蛋白。

DEN2重组E蛋白单克隆抗体的制备及其生物学活性

[目的]研制登革病毒E蛋白特异性单克隆抗体,鉴定其各种生物学特性.[方法]用纯化的Pichia pastoris酵母表达的DEN2重组E蛋白作为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的细胞融合、有限稀释法克隆化杂交瘤细胞,制备稳定分泌McAbs的细胞株.采用硫酸铵沉淀法纯化腹水中的McAbs,用ELISA、IFA、Western Blot和空斑减数中和实验等鉴定McAbs的各种生物学活性.[结果]用ELISA、IFA检测证实5株杂交瘤细胞产生的McAbs与DEN2重组E蛋白和DEN全病毒均有较高的亲和力;Western Blot分析发现其中3株杂交瘤细胞(3G3,6G11,4E3)分泌的McAbs能与其相对分子质量Mr=(66～69)×103的DEN2重组E蛋白结合.空斑减数中和实验证实所获得的单克隆抗体具有中和登革病毒感染C6/36细胞的作用.[结论]成功地制备了5株抗登革病毒E蛋白特异性的McAbs,为进一步研究E蛋白的结构和功能及临床诊断试剂盒研发打下了基础.

大豆灰斑病菌毒素的分离与提取

用不同极性的有机溶剂均未萃取到具有致病组分的化合物。但用甲醇、乙醇、丙醇和硫酸铵等两种沉淀大分子物质的方法,却提取到了使大豆叶片产生典型病斑和致萎的化合物。该粗提物能引起大豆感病品种产生典型的蛙眼形病斑,由此可以肯定从培养滤液中提取的粗提物含有大豆灰斑病菌所产生的毒素。以二倍体积的甲醇来提取大豆灰斑病菌毒素是最为简单、快速的方法。

核基质及其研究方法

真核细胞核内除染色质、核膜与核仁外,还有一个以非组蛋白为主的核基质三维网架结构体系。近年来,核基质的研究在医学、分子生物学等方面取得了许多突破性的进展,具有广阔的前景,已引起人们的广泛关注。本文综述了目前世界上常用的核基质制备方法,全面系统地阐述了它们的优缺点,这将为有关核基质的研究提供借鉴。

苍白杆菌SY286抑菌活性蛋白稳定性分析

利用饱和硫酸铵沉淀法从苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)SY286发酵滤液中提取抑菌活性蛋白,通过温度、酸碱度、紫外线以及蛋白酶对活性物质的影响,测定活性物质的稳定性。结果表明,经60%饱和硫酸铵溶液盐析出的活性蛋白对葡萄霜霉病菌的抑菌活性最强,抑制率达81.98%。温度、酸碱度以及紫外线对抑菌粗提蛋白的活性均有一定影响。抑菌粗提蛋白在50℃以下和pH 4~10条件下抑菌活性相对稳定。抑菌粗提蛋白的抑菌活性受蛋白酶的影响较大,蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶均对其活性具有较大影响。

鸭血清转铁蛋白的分离纯化

用硫酸铵沉淀、火棉胶透析去盐，再经固定化金属螯合亲和色谱柱层析，经洗脱液（0．1mol／L氯化钠和20mmol／L咪唑）洗脱，火棉胶透析去盐得纯化的鸭血清转铁蛋白．鸭血清转铁蛋白在固定化铜离子亲和膜层析柱上的吸附率达到80％以上．考察了上样速度、pH值、温度对鸭血清转铁蛋白吸附率的影响．最佳操作条件为：上样速度为0．5～0．8mL／min、pH值控制在7～8、操作温度为室温，用硫酸铵沉淀法及固定化金属螯合亲和色谱法，能获得光谱纯的鸭血清转铁蛋白．

优化硫酸铵法纯化单克隆抗体

改进硫酸铵法纯化单克隆抗体,优化硫酸铵的饱和度,让最终饱和度达45%,通过两次沉淀,使单克隆抗体的纯度进一步提升,再利用醋酸缓冲液去除杂蛋白,最终得到便于保存的单克隆抗体。优化后的硫酸铵法提取出蛋白质的纯度大大提高,且浓度和效价都高于传统方法,能纯化出与亲和层析纯度相媲美的单克隆抗体。优化后的硫酸铵沉淀法简单便捷,易于操作且纯化抗体纯度高,也便于抗体保存。

满江红多胺氧化酶的抽提与初步纯化

报告了满江红（Azollaimbricata）多胶氧化酶抽提条件与初步纯化的研究结果．以0．1mol／L磷酸缓冲液为介质抽提该酶时的最适pH约为6．5，添加0．10－0．15mol／LNaCl和2％－4％（质量体积比）PVP可改善抽提效果．用硫酸铵沉淀法、PEG－6000沉淀法和丙酮沉淀法分别对酶抽提液进行初步纯化，发现丙酮沉淀法纯化效果最优，用1．2倍（体积比）冷丙酮（－15℃）沉淀时可提纯该酶8．92倍，产率达74．6％．

猪血清免疫球蛋白IgG的分离纯化及抗大肠杆菌作用

试验旨在从猪血清中分离纯化得到纯度较高的免疫球蛋白Ig G。试验采用硫酸铵分步沉淀法从猪血清中粗提猪血清免疫球蛋白,经DEAE52凝胶柱进行纯化,将纯化得到的免疫球蛋白进行SDS-PAGE电泳检测,并通过紫外分光光度计法测定其含量。试验结果显示,粗提可以得到免疫球蛋白Ig G,纯化后的lg G经SDS-PAGE电泳检测,检测出两条带,分别为Ig G的重链和轻链,分子量分别为56.72 k D和26.58 k D,通过紫外分光光度计法测得的Ig G浓度为2.577 mg/ml。结果提示,从猪血清中能分离纯化到免疫球蛋白Ig G,为实际工艺化生产提供理论依据。

脱盐牛乳乳清粉中β-乳球蛋白的分离纯化

结合硫酸铵分级盐析、阴离子交换层析和葡聚糖凝胶层析三种方法,从牛乳乳清蛋白中分离、提纯出β-乳球蛋白。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白成分,结果显示:1在质量分数为75%盐析段与其他成分相比含有较多的β-乳球蛋白;2用阴离子交换层析进行进一步的分离,经过两次的阴离子交换层析可得到较高纯度的β-乳球蛋白;3再用Sephadex G-10凝胶层析,电泳结果显示只有一条带,并与β-乳球蛋白标准品(纯度95%)带一致,得到高纯度的β-乳球蛋白。

栉孔扇贝中蛋白质的提取条件优化

为研究栉孔扇贝蛋白质的碱法提取工艺,优化提取条件。本研究以蛋白质提取率为指标,通过pH值、温度、料液比及反应时间的单因素实验和正交实验对蛋白质提取条件进行优化,通过复溶、硫酸铵沉淀、透析、冷冻干燥得到栉孔扇贝蛋白质干品。结果表明,栉孔扇贝蛋白质的最优碱提工艺参数为pH值12、温度40℃、料液比1∶30(W/W)、时间6 h。在最优碱提条件下提取,蛋白质的提取率高达74.33%。用50%~60%饱和区间的硫酸铵溶液进行碱溶蛋白回收时,蛋白质沉淀率达到90.19%,栉孔扇贝中蛋白质的总体回收率可达到67.04%。该研究为栉孔扇贝蛋白质的提取和分离提供了借鉴,为后续栉孔扇贝蛋白质的开发与利用提供了理论依据。

一步法提取鸭血清转铁蛋白

一步法提取鸭血清转铁蛋白是利用热变性沉淀去除鸭血清中的杂蛋白,在微碱性(pH值为8.0)条件下,75℃保温25 m in,转铁蛋白的纯化倍数为1.11,收率为96%,而硫酸铵分级沉淀法的纯化倍数为1.03,收率为51%。一步法与硫酸铵分级沉淀法相比,方法简单,成本低廉,适宜工业化生产。

人转铁蛋白纯化制备及其抗原活性验证

目的采用非亲和纯化方法从人血清中制备获得高纯度转铁蛋白(TRF),并用此为免疫抗原免疫新西兰大白兔,验证TRF蛋白的免疫原性。方法首先采用两步硫酸铵沉淀法从血清中粗纯TRF蛋白,再用两步阴离子交换层析柱进行纯化,最终得到TRF。结果 TRF蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)纯度与外购纯品相当,且高效液相色谱(HPLC)纯度达到96.8%,纯化回收率为78.6%。对于同一批TRF样品,TRF检测试剂盒(免疫法)测得的活性浓度与紫外分光光度计法测得的蛋白浓度比值(Rc)约为0.95,说明制备的TRF与免疫检测试剂盒中的TRF抗体具有良好的抗原反应性。最后用纯化样品免疫新西兰大白兔,经过4次免疫后的抗血清效价滴度达到1∶128 000,说明制备的TRF具有良好的免疫原性。结论制备的高纯度TRF具有良好的抗原反应性及免疫原性,可用于动物免疫以制备抗TRF抗体,为配制TRF检测试剂(免疫法)提供良好的原料基础。