硫酸雌酮含量与母猪产仔数关系的研究

50头二白母猪(长白×苏白),于人工授精后10、20、30和40天经耳静脉采血,取血浆,用放射免疫法(RIA)测定血浆中硫酸雌硐(E_1S)含量。结果表明:在母猪妊娠30天时,血浆E_1S含量显著高于未妊母猪(P<0,01),而其它各点两者差异不显著,并且未妊母猪E_1S含量始终低于1ng/ml,因此,可以以妊娠30天时E_1S含量1ng/ml为判定妊娠与否的标准;妊娠30天E_1S含量与母猪产仔数呈显著正相(r=0.4032,P<0.01,n=46),据此,可以以妊娠30天E_1S含量初步预测产仔数高低,但其相关性未达到据E_1S含量推算产仔数多少,从而达到淘汰低产母猪的程度。

母猪妊娠早期血清和胎儿胎水中硫酸雌酮含量

应用放射免疫法测定枫泾（ＦＪ）和长白（Ｌ）青年母猪妊娠２８ｄ左右外周血清和胎儿羊水、尿囊液中硫酸雌酮（Ｅ１Ｓ）的含量；观察了两品种母猪胚胎存活数。结果，ＦＪ和Ｌ母猪血清、胎儿羊水及尿囊液中Ｅ１Ｓ含量（μｇ／Ｌ）分别为５．３±０．９９、８．０±１．０、３８．０±６．７和３．６±０．４６、５．６±０．９９、６１．４±１１．７，均处于较高水平，且两品种间无显著差异。尿囊液Ｅ１Ｓ含量极显著高于羊水和母体血清含量（Ｐ＜０．０１）；胚胎存活数（个），ＦＪ和Ｌ分别为１４．５±１．３和１０．４±１．３；血清Ｅ１Ｓ浓度与其胚胎存活数呈正相关：ｒＦＪ＝０．７４２６（Ｐ＜０．０１），ｒＬ＝０．４７４７（Ｐ＜０．０５）。上述结果表明，母猪妊娠早期孕体雌激素代谢功能很强，且以Ｅ１Ｓ形式存在于血清和胎水中。母猪血清Ｅ１Ｓ浓度不仅反映早期孕体分泌雌激素的功能。

妊娠妇女血中雌酮和硫酸雌酮的测定

本文测定了30例妊娠妇女周围静脉血中的雌酮简称E_1(estrone)和硫酸雌酮简称E_1-S(estrone sulfate),采用乙烯醋酸抽提,LH-20 Sephadex柱分离E_1,高效液相色谱仪分离E_1-S。分离E_1-S所用的流动相为50%CH_3CN,50% 0.02M phosphate和2.5g CIMABr。收集的E_1-S片段液经酶解,然后同E_1片段分别用放射免疫法测定。结果是妊娠妇女血中E_1和E_1-S随妊娠周数的增加而增加,其变化关系可分别用以下回归曲线方程描述。妊娠早、中、晚各期的平均值与正常月经周期妇女比较有显著和非常显著差别(P<0.05,P<0.001和P<0.001),反映了妊娠期随着胎儿-胎盘功能的逐步建立,甾体激素除游离型的含量渐增加外,结合型的含量也逐渐增加。本文结果又表明妊娠期随妊娠周数的增加,E_1-S和E_1含量的增加呈非常显著相关性,r=0.95(r_(0.001)=0.46)提示妊娠期随着妊娠周数的增加,游离型和结合型激素的内在调节。为有利于提高胎儿产前监护的正确性,可研究各种游离和结合型的甾体激素。

用母猪血浆中硫酸雌酮浓度作早期妊娠诊断的研究

45头杂种母猪于配种后第28天采血,用放射免疫法测血浆中硫酸雌酮含量。以0.5ng/ml为界线作判断妊娠与否的标准。妊娠诊断的准确率是100％。妊娠母猪的血浆硫酸雌酮水平和胎儿数呈正相关(r=0.501,n=43,P<0.01)。

检测硫酸雌酮间接ELISA方法的建立

目的:建立酶联免疫吸附法(ELISA)以检硫酸雌酮的含量.方法:首先合成硫酸雌酮-BSA,然后将其作为包被抗原,建立检测硫酸雌酮的间接ELISA法.结果:建立了检测硫酸雌酮的标准曲线y=9E-5X+0.0998,该ELISA法灵敏度为0.69 ng.mL-1,批内和批间变异系数分别为8.8%和10.3%,与孕酮、炔雌醇、睾酮的交叉反应不明显.结论:初步建立了定量测定硫酸雌酮含量的间接酶联免疫吸附试验方法(ELISA).

黑白花母牛血浆硫酸雌酮对雌酮浓度比值同超数排卵反应力的关系

成年及青年黑白花母牛28头,用一种高纯度FSH-P制剂,自周期9—13天开始,按常规方法进行超排处理。冲卵失败2头除外,其余26头,平均有黄体6.58±5.44(M±SD)、总卵胚4.19±4.67、可用胚3.65±4.28。在超排处理前,即周期0、1、3、5、7、9各日共6次,自颈静脉采集血样,分离血浆,用放射免疫法分析血浆雌二醇-17β(E_2 -17β)、雌酮(E_1)和硫酸雌酮(E_1S)浓度。统计分析以上3种激素浓度以及不同激素的浓度比值同超排反应力的关系。发现供体的可用胚数同E_1S/E_1、E_2+E_1十E:S/E_1的比值有关,特别是E_1S/E_1值在各组的分布呈现出明显的规律。按可用胚数和黄体数将供体分为3组:组1包含可用胚≥4(全群平均为3.65)、黄体≥4的个体,其中有7/8(87.5％),周期0天E_1S/E_1值>2;组2为可用胚<4、黄体≥4的个体, 其中仅有1/9(11.1％)E_1S/E_1值>2 (P<0.01);组3为可用胚<4、黄体<4的个体,E_1S/E_1值无一定规律。如按E_1S/E_1值分组,组1,13头(50.0％)为E_1S/E_1值>2的个体,共有可用胚82枚,占全群可用胚总数95枚的83.3％,平均每头6.54枚(全群平均3.65);组2亦为13头,为E_1S/E_l<2的个体,总共仅有可用胚13枚,占总数的13.7％(P< 0.01),平均每头仅1枚。如用周期0天E_1S/E_1值预选供体,可望将超排效率提高80％。

硫酸雌酮对染料木素及其Ⅱ相结合物在乳腺细胞中代谢的影响

目的研究硫酸雌酮对染料木素及其Ⅱ相结合物在乳腺细胞中代谢的影响。方法以人乳腺癌细胞系T47D和非癌乳腺细胞系MCF-10A为研究对象,采用体外孵化模型,将硫酸雌酮(estrone-3-sulfate,E1S)分别与染料木素(genistein,GEN)及染料木素-4'-硫酸结合物(genistein-4'-sulfate,G-4'-S)、染料木素-7-硫酸结合物(genistein-7-sulfate,G-7-S)、染料木素-4'-葡萄糖醛酸结合物(genistein-4'-glucuronide,G-4'-G)和染料木素-7-葡萄糖醛酸结合物(genistein-7-glucuronide,G-7-G)4个染料木素Ⅱ相结合物共同孵化24 h后,收集孵化液,采用LC-MS/MS法定量测定孵化液中相应代谢产物的浓度。结果在T47D和MCF-10A细胞中,E1S可明显抑制GEN转化为G-7-S和G-4'-S;E1S还可明显抑制G-7-G的生物转化。此外,E1S可促进MCF-10A细胞中G-4'-S转化为G-7-S。E1S对T47D和MCF-10A细胞中G-4'-G和G-7-S的代谢无显著性影响。结论 E1S影响GEN、G-7-G和G-4'-S在乳腺细胞中的代谢,对G-4'-G和G-7-S的代谢无明显作用。

血清雌激素水平及硫酸雌酮和雌酮比与绝经后乳腺浸润性导管癌患者孕激素和EGFR2受体关系研究

目的研究绝经后乳腺浸润性导管癌患者血清雌激素、硫酸雌酮和雌酮水平及孕激素和EGFR2受体状态的相关性。方法回顾性分析2015年4月1日~2016年12月31日我院收治的绝经后乳腺浸润性导管癌患者62例,统计分析其治疗前后的血清雌激素、硫酸雌酮和雌酮水平的变化及孕激素和EGFR2受体状态,计算硫酸雌酮和雌酮比,比较不同孕激素和EGFR2受体状态患者的血清E1、E2等雌激素和硫酸雌酮水平及硫酸雌酮和雌酮比,并采用Spearman秩相关分析法分析其血清雌激素水平及硫酸雌酮和雌酮比与孕激素和EGFR2受体状态的关系。结果不同PR表达组患者的血清E1、E2及硫酸雌酮/雌酮在治疗前后的比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗前后EGFR2(+)组患者的雌激素水平和硫酸雌酮水平均明显高于EGFR(-)组患者的(P<0.05),且治疗后,EGFR2(+)和EGFR2(-)两组患者的雌激素水平和硫酸雌酮水平均低于治疗前(P<0.05),但两组患者硫酸雌酮/雌酮数值比较,在不同时期的差异无统计学意义(P>0.05)。结论根据绝经后乳腺浸润性导管癌患者癌组织表达EGFR2受体的情况可对患者病情做出推断,而通过检测硫酸雌酮和雌酮检测乳腺癌的检测方敏感性仍需大规模临床实验。

硫酸雌酮浓度作为妊娠马胎儿死亡的一项指标

测定了用PGF_(2a)引产(n=4)和手术摘除胎儿(n=3)前后的7匹母马血清和尿中硫酸雌酮浓度,以确定早孕雌激素来源[妊娠天数(GD)44到89天]。也测定了在妊娠51和58天之间切除卵巢的3匹母马血清硫酸雌酮浓度(冷藏2年)。硫酸雌酮浓度在胎儿排出后的血清和尿中降低(尿中浓度范型比血清浓度范型更明显)。而卵巢切除的母马血清硫酸雌酮浓度短暂降低。虽然早孕时硫酸雌酮部分来自卵巢,但主要来自孕体。血清和尿中硫酸雌酮的测定为妊娠44天后的母马胎儿存活提供了一种简便而准确的诊断方法。

雌酮硫酸钠的制备及其对小鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的研究雌酮硫酸钠(Estrone sulfate sodium,ES)的制备方法及其对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法(1)采用雌酮和氨基磺酸通过氨基磺酸化和离子置换法合成ES。采用核磁共振内标法计算ES的纯度,采用紫外光谱法、红外光谱法、高分辨质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱对ES进行结构分析。(2)建立雌鼠更年期模型,将小鼠随机分为溶媒组(蒸馏水0.094 mg/kg体重)、雌二醇组[(Estradiol,E2),给药剂量0.3 mg/kg体重]和ES组(给药剂量0.094 mg/kg体重)灌胃给药2周后建立小鼠心肌缺血/再灌注损伤模型,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测量心梗面积,评估ES预处理对小鼠心肌损伤的影响。结果合成的ES纯度为66.6%,Tris含量30.8%,表征结果显示产物为雌酮硫酸钠。与溶媒组比较,E2降低小鼠心肌缺血/再灌注损伤面积,但是E2组差异不具有统计学差异,而ES组小鼠心肌缺血/再灌注损伤导致的心肌梗死面积减少,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论本合成方法能够得到纯度较高且稳定的ES,动物试验结果证明ES能够减少小鼠心肌缺血再灌注损伤后的心肌梗死面积。

孕马尿中雌酮硫酸钠单克隆抗体的研制

目的建立雌酮硫酸钠(ESS)单克隆抗体的制备方法。方法以ESS为抗原免疫Balb/c小鼠,筛选小鼠免疫方法,并通过方阵滴定法确定间接酶联免疫吸附测定(ELISA)方法;再以杂交瘤抗体技术获得抗ESS单克隆抗体细胞株。结果 ESS抗原5次以初次免疫200μg,加强免疫100μg的免疫剂量多点注射小鼠背部皮下免疫为小鼠最佳免疫方法;确定10μg·L-1为抗原包被浓度,1∶2 000的一抗血清稀释倍数;细胞融合率达90.2%,ELISA法筛选阳性率为4.4%,并筛选得到两株特异性较好的细胞株2C8和8A7。结论该研究筛选建立了ESS小鼠免疫方法及灵敏度高、特异性好的间接ELISA筛选体系,可用于ESS单克隆抗体的制备及检测,且建立了ESS单克隆抗体制备方法。

近红外光谱技术快速测定孕马尿中雌酮硫酸钠的含量

目的建立近红外光谱技术快速测定孕马尿中雌酮硫酸钠含量的方法。方法采用SupNIR-2600型近红外光谱仪采集孕马尿的光谱数据,用高效液相色谱法(HPLC)测定110个孕马尿样品中雌酮硫酸钠的含量作为参考值。根据HPLC法含量测定结果,划分为校正集样品88个,验证集22个,结合偏最小二乘法,建立孕马尿中雌酮硫酸钠近红外光谱定量校正模型。结果采用二阶卷积求导的光谱预处理方法,选择1000~1799 cm^-1波段进行孕马尿中雌酮硫酸钠近红外光谱定量校正模型的建立,主成分因子数为3,内部交叉验证决定系数为(R2)为0.9443,校正标准偏差(SEC)为1.77,交互验证校正标准偏差(SECV)为4.16。预测集样品平均相对偏差为1.45%。结论该方法快速、准确、简便,可以用于孕马尿中雌酮硫酸钠含量快速测定。

反相HPLC法测定雌酮硫酸酯哌嗪片的含量

目的:用高效液相色谱法测定雌酮硫酸酯哌嗪含量。方法:采用 ODS Hypersil色谱柱（5μm,250mm x 4.6mm）,以甲醇-乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钾缓冲液（20:20:60）为流动相,检测波长为213nm。结果:线性范围为雌酮硫酸酯哌嗪0.3-2.2μg/mL,r=0.9997;平均回收率为 99.36％,RSD=0.93％。结论:反相HPLC法测雌酮硫酸酯哌嗪含量快速、无干扰、精密度好、灵敏度高。

高效液相色谱-质谱法测定大鼠血浆中硫酸酯型脱氢表雄酮和孕烯醇酮

建立同时测定 SD 大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PREGS)的高效液相色谱-质谱法。方法:选择雌酮硫酸酯(ES)作为内标。雄性 SD 大鼠的血浆使用乙腈沉淀除去蛋白后,经固相萃取、水解及衍生化后,以高效液相色谱质谱检测器测定脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯的浓度。色谱柱为 Zorbax SB C_(18)柱温40℃,流动相为乙腈水,使用梯度洗脱;采用大气压化学离子源(HPLC/APCI-MS),负离子检测方式,用于选择离子检测(SM)定量分析的离子为 m/z 490.0(DHEAS)和 m/z 518.0(PREGS)及 m/z 472.1(ES)[M-H]^-。结果:血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯线性范围分别为:0.05～2.0ng·mL^(-1),0.03～2.0 ng·mL^(-1),r 分别为0.9990和0.9979。低、中、高浓度血样的提取回收率在66.8%～82.3%之间,相对回收率为:98.4%～111.6%,日内、日间变异均小于15%。正常雄性 SD 大鼠的血浆脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯分别为0.070±0.020 ng·mL^(-1)、0.13±0.031 ng·mL^(-1)。结论:本实验方法具有灵敏度高、准确度好及变异较小的特点,适合测定雄性 SD 大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和和孕烯醇酮硫酸酯的含量。

高效液相色谱-质谱法测定大鼠血浆中硫酸酯型脱氢表雄酮和孕烯醇酮

目的：建立同时测定SD大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯（DHEAS）和孕烯醇酮硫酸酯（PREGS）的高效液相色谱-质谱法。方法：选择雌酮硫酸酯（ES）作为内标。SD大鼠的血浆使用乙腈沉淀除去蛋白后，经固相萃取，水解，衍生化后，以高效液相色谱-质谱测定脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯的浓度，采用大气压化学离子源（HPLC／APCI-MS），选择离子检测方式。结果：血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯线性范围分别为：0、050～2．00ng，0．030～2．00ng，相关系数分别为0．9990和0．9979。低、中、高浓度血样的提取回收率在66．8％～82．3％之间，相对回收率为：98．4％～111．6％，rt内、rt间变异均小于15％。正常SD大鼠的血浆脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯分别为0．070±0．020ng／ml、0．13±0．03lng／ml。结论：本实验方法具有灵敏度高、准确度好及变异较小的特点，适合测定SD大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯酮硫酸酯的含量。

收稿日期：--基金项目：国家自然科学基金资助项目重庆市研究生科研创新项目重庆市基础与前沿研究计划项目重庆市社会事业与民生保障项目-责任作者副教授

在污水处理厂尾水中,雌酮（E1）和硫酸雌酮（E1-3-S）分别是赋存浓度最高的自由态雌激素和结合态雌激素.E1-3-S难以被生物降解且雌激素效应有限,但环境条件适宜时可在芳基硫酸酯酶（Ary S）作用下通过水解释放出具有雌激素效应的E1.本论文提出了一种利用Ary S活性值和E1-3-S酶促水解动力学参数计算E1-3-S半寿期的方法.根据现场取样分析得到了重庆市某污水处理厂生物处理构筑物内混合液,合流制管道溢流口与尾水受纳水体底泥中在冬？春？夏3个季节的Ary S活性值,其均值分别为417.41-941.14,91.55-179.42,28.11-59.64μg对硝基酚/（g？h）.在20℃的实验室条件下,E1-3-S的酶促水解遵循一级动力学模式（P〈0.01）,且水解速率Kd与Ary S活性呈线性正相关（R^2=0.9774）.根据春季的Ary S活性数据和实验室条件下E1-3-S水解速率与酶活性的线性回归方程推算,得到了在污水处理厂生物构筑物内？合流制管网溢流口和污水厂尾水排放点附近水体中E1-3-S在对应环境温度条件下通过酶促水解的半寿期分别为33.5,153.0,410.0h.该方法可用于评估硫酸型结合态雌激素在水环境中的雌激素效应释放风险.

固相萃取-高效液相色谱法测定结合雌激素乳膏中主要成分含量

采用固相萃取-高效液相色谱法(SPE-HPLC)测定结合雌激素乳膏中雌酮硫酸钠(Es)和马烯雌酮硫酸钠(Eqs)的含量。色谱柱为Agilent C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.025 mol·L^-1 KH2PO4(1∶3,体积比),流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长205 nm,进样量20μL。结果表明,Es在6.89~220.5μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好(R2=0.9996),Eqs在4.5~144.3μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好(R2=0.9999);Es和Eqs峰面积RSD分别为0.15%和0.19%,结合雌激素含量RSD为1.25%(n=6),标示量80%、100%和120%的Es和Eqs的平均加标回收率分别为105.32%、103.10%、105.81%和95.15%、96.81%、96.37%。该方法准确度高,精密度和灵敏度均能满足测定要求,为结合雌激素乳膏质量控制提供了科学依据。

建立雌酮硫酸钠胶体金免疫层析快速限量检测方法

目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫描鉴定并计算偶联率。ESS-17-肟-BSA免疫BALB/C小鼠,取血清高滴度小鼠脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用ELISA法进行阳性筛选。获得阳性克隆细胞株后于BALB/C小鼠体内诱生腹水制备单克隆抗体,抗体纯化后用胶体金标记,通过正交设计确定最佳实验参数,研制出雌酮硫酸钠胶体金免疫层析试纸条。结果:获得经化学结构修饰后的目标抗原ESS-17-肟-BSA,融合克隆后得到4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2D1、7G4、5F3、2A7,其中2D1抗体纯化后特异强,效价达1.0×10~6。该抗体制备的胶体金层析试纸条的检测限为1μg·L^(-1),与结构类似物均无交叉反应,此法检测样品结果与高效液相色谱法测定结果比对阳性符合率为85.45%(45/52),阴性符合率为89.58%(43/48),总符合率为88.00%(88/100),结果一致性较好。结论:本研究制备了雌酮硫酸钠免疫原,融合制得抗雌酮硫酸钠特异性单克隆抗体,并研制出以雌酮硫酸钠单克隆抗体为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够快速、灵敏地检测孕马尿中的雌酮硫酸钠。

雌酮与雌酮硫酸钠双抗夹心检测法的建立及验证比较

目的 建立雌酮和雌酮硫酸钠的双抗体夹心酶联免疫定量检测法,分别与高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）比对检测孕马尿中雌激素的含量,依据其符合性探讨雌酮C3位与雌酮硫酸钠C17位衍生物所得抗体的特异性.方法 由已制备的雌酮C3位与雌酮硫酸钠C17位衍生物分别免疫动物获得相应的单克隆抗体与多克隆抗体,分别建立各自的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测方法,鉴定其灵敏度、特异性、于现场测定样本,结果与HPLC结果比对. 结果 雌酮、雌酮硫酸钠衍生物小鼠单克隆抗体最佳稀释度为5 μg/mL、2.5 μg/mL,酶标多克隆抗体1∶3 000、1∶2 000,灵敏度0.515 μg/mL、0.365 μg/mL.两项结果雌激素含量与HPLC测定孕马尿中雌激素总含量呈曲线对应,但与单体含量不一致.结论 在方法学上成功建立了两种双抗体夹心ELISA法,实际应用中没能达到实验设计要求,但由此结果推断可能为制备两种雌激素衍生物时都将结构中的特征官能团进行了改造,使得制备出的抗体不能识别特征位点而致特异性不好,需要下一步实验再确定.

女性生殖器功能性疾病

0213832 绝经后日本妇女中大豆摄入与绝经后症状、血清脂质和骨密度有关/Somekawa Y//Obstet Gyncecol.-2001,97(1).-109～115 津医情0213833 绝经后妇女中硫酸雌酮单独用或合用安宫黄体酮对血清脂蛋白水平的影响/Luciano A A//Obstet Gynecol.-2001,97(1).-101～108