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单环刺螠硫醌氧化还原酶相互作用蛋白质的筛选
被引量:
5
1
作者
谭志
马玉彬
+1 位作者
邵明瑜
张志峰
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期60-64,共5页
硫化物是沿海水域中常见的有害物质,对于多数生物来讲,其在微摩尔级水平便可导致生物体中毒。硫醌氧化还原酶(SQR)是一种谷胱甘肽还原酶家族的膜结合黄素蛋白,为硫化物氧化解毒的一种关键酶。本研究以体外原核表达并复性的单环刺螠SQR...
硫化物是沿海水域中常见的有害物质,对于多数生物来讲,其在微摩尔级水平便可导致生物体中毒。硫醌氧化还原酶(SQR)是一种谷胱甘肽还原酶家族的膜结合黄素蛋白,为硫化物氧化解毒的一种关键酶。本研究以体外原核表达并复性的单环刺螠SQR为材料,采用His-pulldown技术和SDS-PAGE分析,从单环刺螠体壁细胞裂解液中筛选出两个可能与SQR结合的蛋白质,分子质量分别为40 ku和60 ku。通过毛细管液相色谱-离子肼质谱分析,初步判断其为细胞色素P450(cytochrome P450)和腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter),并初步探讨了其可能的功能。
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关键词
单环刺螠
硫醌氧化还原酶
His-pulldown
质谱
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职称材料
单环刺螠硫醌氧化还原酶的表达、纯化和复性
被引量:
6
2
作者
马玉彬
谭志
张志峰
《中国海洋大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期81-86,共6页
硫化物是1种广泛分布的有毒物质。硫醌氧化还原酶(SQR)是硫化物代谢的关键酶。单环刺螠是1种生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物。本研究为了获得具有活性的单环刺螠SQR,将其基因的开放阅读框cDNA克隆到原核表达载体pET28a中,转化大...
硫化物是1种广泛分布的有毒物质。硫醌氧化还原酶(SQR)是硫化物代谢的关键酶。单环刺螠是1种生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物。本研究为了获得具有活性的单环刺螠SQR,将其基因的开放阅读框cDNA克隆到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行重组蛋白的表达,后采用稀释复性的方法对重组蛋白进行复性。经IPTG诱导后该重组蛋白主要以包涵体形式存在。用8 mol/L的尿素溶解包涵体后,通过镍离子金属螯合柱纯化获得重组蛋白。首次通过蛋白复性的方法获得具有活性的单环刺螠SQR,确定最佳稀释复性条件为pH=8.0,蛋白浓度20μg/mL,L-精氨酸浓度0.2 mol/L,还原型谷胱甘肽∶氧化型谷胱甘肽=10∶1,复性时间为96 h。
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关键词
单环刺螠
硫醌氧化还原酶
蛋白表达与纯化
稀释复性
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职称材料
单环刺螠硫醌氧化还原酶间接竞争ELISA检测方法的建立
3
作者
马玉彬
史晓丽
+3 位作者
李阳
董英萍
张立涛
张志峰
《中国海洋大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期64-69,共6页
硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶。本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物—单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达...
硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶。本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物—单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达奠定了基础。将SQR重组蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,检测效价高达1:64 000。采用免疫印迹实验,将该抗体与重组蛋白和体壁总蛋白杂交,均得到了单一的条带,表明该抗体特异性好。优化SQR间接竞争ELISA检测条件,得出最佳的抗原包被浓度为250ng/mL,一抗浓度为1∶20 000,二抗浓度为1∶12 000,此条件下建立的标准曲线检测范围为2.5~1 000ng/mL。精确度检测结果显示,批内差异在0.42%~7.27%、批间差异在2.58%~7.78%范围内,表明该条件下精确度具有良好的准确性和重复性。以上结果表明,已成功建立单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法。
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关键词
单环刺螠
硫醌氧化还原酶
间接竞争ELISA
多克隆抗体
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职称材料
硫醌氧化还原酶研究进展
4
作者
马玉彬
史晓丽
+3 位作者
邵明瑜
董英萍
李金龙
张志峰
《生命科学》
CSCD
2012年第2期161-168,共8页
硫化物是一种广泛分布的有毒物质。硫醌氧化还原酶是生物体硫化物代谢的一种关键酶。对该酶的发现与分布、序列特征、催化机制、催化特性、三维结构和生理功能等几个方面进行概述,并对该酶未来研究方向进行展望。
关键词
硫醌氧化还原酶
硫
化物
序列特征
催化机制
三维结构
原文传递
单环刺螠营养成分及体内活性物质的研究进展
被引量:
10
5
作者
王雷
刘海梅
+3 位作者
彭鸽
车长远
贡汉生
张正茂
《鲁东大学学报(自然科学版)》
2011年第4期342-345,共4页
综述了单环刺螠营养成分及体内活性物质的研究进展,包括单环刺螠可食用部分的营养价值及其体内所含有的各种生理活性物质的功能,并对单环刺螠的应用前景提出了展望.
关键词
单环刺螠
营养成分
纤溶酶
单环刺螠多肽
硫醌氧化还原酶
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职称材料
题名
单环刺螠硫醌氧化还原酶相互作用蛋白质的筛选
被引量:
5
1
作者
谭志
马玉彬
邵明瑜
张志峰
机构
中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室
青岛农业大学继续教育学院
出处
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期60-64,共5页
基金
国家自然基金面上项目资助(40776074)
文摘
硫化物是沿海水域中常见的有害物质,对于多数生物来讲,其在微摩尔级水平便可导致生物体中毒。硫醌氧化还原酶(SQR)是一种谷胱甘肽还原酶家族的膜结合黄素蛋白,为硫化物氧化解毒的一种关键酶。本研究以体外原核表达并复性的单环刺螠SQR为材料,采用His-pulldown技术和SDS-PAGE分析,从单环刺螠体壁细胞裂解液中筛选出两个可能与SQR结合的蛋白质,分子质量分别为40 ku和60 ku。通过毛细管液相色谱-离子肼质谱分析,初步判断其为细胞色素P450(cytochrome P450)和腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter),并初步探讨了其可能的功能。
关键词
单环刺螠
硫醌氧化还原酶
His-pulldown
质谱
Keywords
Urechis unicinctus
sulfide:quinone oxidoreductase
His-pulldown
mass spectrometer
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
单环刺螠硫醌氧化还原酶的表达、纯化和复性
被引量:
6
2
作者
马玉彬
谭志
张志峰
机构
中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室
出处
《中国海洋大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期81-86,共6页
基金
国家自然基金面上项目(40776074)资助
文摘
硫化物是1种广泛分布的有毒物质。硫醌氧化还原酶(SQR)是硫化物代谢的关键酶。单环刺螠是1种生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物。本研究为了获得具有活性的单环刺螠SQR,将其基因的开放阅读框cDNA克隆到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行重组蛋白的表达,后采用稀释复性的方法对重组蛋白进行复性。经IPTG诱导后该重组蛋白主要以包涵体形式存在。用8 mol/L的尿素溶解包涵体后,通过镍离子金属螯合柱纯化获得重组蛋白。首次通过蛋白复性的方法获得具有活性的单环刺螠SQR,确定最佳稀释复性条件为pH=8.0,蛋白浓度20μg/mL,L-精氨酸浓度0.2 mol/L,还原型谷胱甘肽∶氧化型谷胱甘肽=10∶1,复性时间为96 h。
关键词
单环刺螠
硫醌氧化还原酶
蛋白表达与纯化
稀释复性
Keywords
Urechis unicinctus
sulfide quinone oxidoreductase
protein expression and purification
dilution refolding
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
单环刺螠硫醌氧化还原酶间接竞争ELISA检测方法的建立
3
作者
马玉彬
史晓丽
李阳
董英萍
张立涛
张志峰
机构
中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室
中国科学院青岛生物能源与过程研究所生物燃料重点实验室
出处
《中国海洋大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期64-69,共6页
基金
国家自然科学基金项目(40776074
31072191)资助
文摘
硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶。本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物—单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达奠定了基础。将SQR重组蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,检测效价高达1:64 000。采用免疫印迹实验,将该抗体与重组蛋白和体壁总蛋白杂交,均得到了单一的条带,表明该抗体特异性好。优化SQR间接竞争ELISA检测条件,得出最佳的抗原包被浓度为250ng/mL,一抗浓度为1∶20 000,二抗浓度为1∶12 000,此条件下建立的标准曲线检测范围为2.5~1 000ng/mL。精确度检测结果显示,批内差异在0.42%~7.27%、批间差异在2.58%~7.78%范围内,表明该条件下精确度具有良好的准确性和重复性。以上结果表明,已成功建立单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法。
关键词
单环刺螠
硫醌氧化还原酶
间接竞争ELISA
多克隆抗体
Keywords
Urechis unicinctus
sulfide quinone oxidoreductase
indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay
polyclonal antibody
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
硫醌氧化还原酶研究进展
4
作者
马玉彬
史晓丽
邵明瑜
董英萍
李金龙
张志峰
机构
中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室
中国科学院青岛生物能源与过程研究所生物燃料重点实验室
出处
《生命科学》
CSCD
2012年第2期161-168,共8页
基金
国家自然科学基金项目(40776074,31072191)
文摘
硫化物是一种广泛分布的有毒物质。硫醌氧化还原酶是生物体硫化物代谢的一种关键酶。对该酶的发现与分布、序列特征、催化机制、催化特性、三维结构和生理功能等几个方面进行概述,并对该酶未来研究方向进行展望。
关键词
硫醌氧化还原酶
硫
化物
序列特征
催化机制
三维结构
Keywords
sulfide:quinone oxidoreductase
sulfide
sequence characteristics
catalytic mechanism
three dimensional structure
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
单环刺螠营养成分及体内活性物质的研究进展
被引量:
10
5
作者
王雷
刘海梅
彭鸽
车长远
贡汉生
张正茂
机构
鲁东大学食品工程学院
出处
《鲁东大学学报(自然科学版)》
2011年第4期342-345,共4页
基金
鲁东大学科研基金(LY20076201)
文摘
综述了单环刺螠营养成分及体内活性物质的研究进展,包括单环刺螠可食用部分的营养价值及其体内所含有的各种生理活性物质的功能,并对单环刺螠的应用前景提出了展望.
关键词
单环刺螠
营养成分
纤溶酶
单环刺螠多肽
硫醌氧化还原酶
Keywords
Urechis unicinctus
nutrient component
fibrinolytic enzyme
peptides from Urchis unicinctus
sul-fide : quinone oxidoreductase
分类号
TS254.9 [轻工技术与工程—水产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
单环刺螠硫醌氧化还原酶相互作用蛋白质的筛选
谭志
马玉彬
邵明瑜
张志峰
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010
5
下载PDF
职称材料
2
单环刺螠硫醌氧化还原酶的表达、纯化和复性
马玉彬
谭志
张志峰
《中国海洋大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010
6
下载PDF
职称材料
3
单环刺螠硫醌氧化还原酶间接竞争ELISA检测方法的建立
马玉彬
史晓丽
李阳
董英萍
张立涛
张志峰
《中国海洋大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
下载PDF
职称材料
4
硫醌氧化还原酶研究进展
马玉彬
史晓丽
邵明瑜
董英萍
李金龙
张志峰
《生命科学》
CSCD
2012
0
原文传递
5
单环刺螠营养成分及体内活性物质的研究进展
王雷
刘海梅
彭鸽
车长远
贡汉生
张正茂
《鲁东大学学报(自然科学版)》
2011
10
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职称材料
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