硫链丝菌肽抑制FOXM1表达后对裸鼠鼻咽癌移植瘤的抑制作用

目的探讨硫链丝菌肽(thiostrepton,TST)抑制叉头框M1(forkhead box M1,Fox M1)表达后对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响及可能机制。方法建立人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤模型,将成瘤裸鼠20只放于一起,10只裸鼠作为对照组,剩余的10只作为实验组,各组裸鼠均采用耳钉法标号;腹腔给药,对照组给予DMSO溶液,实验组每周腹腔注射DMSO溶解的TST溶液(200μg/kg);观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,绘制生长曲线,最后瘤体称重计算抑瘤率;成瘤后取瘤体组织制成细胞悬液,流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡发生情况;提取瘤体组织蛋白进行Western blot,检测相关蛋白表达变化情况。结果与对照组相比,TST药物组对人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,差别有统计学意义(P<0.05);TST药物组瘤体质量为(0.582±0.172)g,对照组瘤体质量为(1.118±0.159)g,TST组抑瘤率为47.94%,差别有统计学意义(F=31.4,P<0.01);FCM结果表明,肿瘤组织细胞G1期的细胞比例:对照组(47.23±5.68)%,TST药物组(66.44±3.65)%,差别有统计学意义(F=48.6,P<0.01);瘤体中细胞的凋亡率:对照组(6.12±0.95)%,TST药物组(16.99±1.75)%,两组相比较差别有统计学意义(F=179.1,P<0.01);Western blot结果显示:TST组与对照组相比,Fox M1蛋白和Cyclin D1、Skp2蛋白表达下降,P27蛋白表达增加。结论硫链丝菌肽可以通过拮抗Fox M1表达,有效抑制人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤的生长。

硫链丝菌肽抑制FoxM1表达后对鼻咽癌细胞凋亡的影响及机制探讨

目的:探讨硫链丝菌肽(thiostrepton,TST)抑制鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞CNE-2中叉头框M1(forkhead box M1,Fox M1)表达后凋亡作用的增强及可能机制。方法:细胞培养传代后过夜培养,将细胞分为3组:对照组未加TST、只加0.1%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的培养液,4μmol/L TST组,8μmol/L TST组,培养48 h后,进行不同的实验手段观察处理。显微镜下观察TST作用CNE-2后细胞形态学改变;Hoechst33342染色后显微镜下计数凋亡细胞个数,检测TST对CNE-2细胞凋亡的影响;流式细胞术检测TST作用CNE-2细胞后,细胞凋亡率的变化;Western blot检测TST作用CNE-2后细胞中Fox M1及凋亡相关蛋白的表达变化。结果:TST作用CNE-2细胞后细胞形态逐渐向凋亡发展,呈剂量依赖性;Hoechst33342染色检测凋亡结果显示各组凋亡细胞数为:对照组(0.1%DMSO),4μmol/L TST组和8μmol/L TST组细胞凋亡数目分别为:0.60±0.55,3.60±0.89,7.00±1.58,TST对CNE-2细胞凋亡的影响呈剂量依赖性增加,对照组与TST组比较差别有统计学意义(F=42.72,P<0.01);流式细胞术检测凋亡结果显示:对照组(0.1%DMSO)(1.87±0.74)%;4μmol/L TST组(10.55±0.75)%;8μmol/L TST组(19.35±2.49)%,随着TST浓度增加,CNE-2细胞凋亡率增加,对照组与TST组比较差别有统计学意义(F=94.50,P<0.01);Western blot检测发现TST作用CNE-2后细胞中Fox M1蛋白表达下降,凋亡相关蛋白表达发生变化。结论:硫链丝菌肽在体外可以有效降低NPC CNE-2细胞中Fox M1表达,并抑制NPC CNE-2细胞生长,诱导其凋亡。

国产硫链丝菌肽制备及体外抑菌试验的研究

国产硫链丝菌肽制备及体外抑菌试验的研究徐德标，周善湘，周佩硫链丝菌肽（Ｔｈｉｏｓｔｒｅｐｔｏｎ）［１］是含硫多肽类抗生素家族中的一员（图）。它先由新墨西哥土壤中分离获得的Ｓ·ａｚｕｒｅｕｓ发酵生成；近年来它又由Ｓ·ｌａｕｒｅｎｔｉｉ产生［２］，在合适...

硫链丝菌肽对人喉癌Hep-2细胞生长及FoxM1表达的影响

目的研究硫链丝菌肽(thiostrepton,TST)对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力及FoxM1表达的影响。方法用MTT法测定TST作用于人喉癌Hep-2细胞48 h的增殖抑制率;通过流式细胞仪(FCM)检测不同浓度TST分别作用于Hep-2细胞48 h后对其细胞周期动力学的影响;采用免疫细胞化学法、RT-PCR和Western blot检测Hep-2细胞中FoxM1mRNA及蛋白表达,以及不同浓度TST作用于Hep-2细胞48 h FoxM1蛋白表达的变化。结果不同浓度(1、2、4、8、12、16μmol/L)TST作用于Hep-2细胞48 h后的增殖抑制率分别为5.27%、9.43%、20.25%、41.61%、67.96%、96.95%;浓度分别为2、3μmol/L的TST作用于Hep-2细胞48 h后,均使Hep-2细胞停滞于G1/G0期(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);同时将TST作用于Hep-2细胞48 h后,经免疫细胞化学法、RT-PCR和Western blot均检测到FoxM1 mRNA及蛋白在Hep-2细胞中表达显著降低(P<0.05)。结论 TST对人喉癌Hep-2细胞株具有明显的增殖抑制作用,其可能机制是与降低肿瘤细胞中FoxM1蛋白表达有关。

硫链丝菌肽对人鼻咽癌HNE-1细胞生长及Foxm1表达的影响

目的研究硫链丝菌肽(TST)对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖能力及Forkhead box protein M1(Foxm1)表达的影响。方法以MTT法分别测定不同浓度(1、2、4、8、12、16μmol/L)TST作用于人鼻咽癌HNE-1细胞48h的增殖抑制率;通过流式细胞仪(FCM)检测不同浓度(1、2μmol/L)TST分别作用于HNE-1细胞48h后对其细胞周期动力学的影响;采用免疫细胞化学法和Western blot检测HNE-1细胞中Foxm1蛋白表达以及不同浓度TST作用于HNE-1细胞48hFoxm1蛋白表达的变化。结果不同浓度(1、2、4、8、12、16μmol/L)TST作用于HNE-1细胞48h后的增殖抑制率分别为8.31%、17.46%、34.28%、58.68%、87.91%、99.05%;浓度分别为1、2μmol/L的TST作用于HNE-1细胞48h后,均使HNE-1细胞停滞于G1/G0期(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);同时将TST作用于HNE-1细胞48后,经免疫细胞化学法和Western blot均检测到Foxm1蛋白在HNE-1细胞胞质中表达显著降低(P<0.05)。结论 TST对人鼻咽癌HNE-1细胞株具有明显的增殖抑制作用,可能与降低肿瘤细胞中Foxm1蛋白表达有关。

硫链丝菌肽下调FOXM1的表达对肺癌细胞生长及凋亡的影响

目的 探讨硫链丝菌肽（TST）对肺癌细胞A549增殖、凋亡及其对AG1478 （EGFR-TKI）药物敏感性的影响.方法 CCK-8法检测TST、AG1478单药及两药联用后A549细胞的增殖抑制率;Western blot检测TST对叉头转录因子M1（FOXM1）表达的影响;Caspase-3比色测定法检测TST对Caspase-3活化程度的影响;利用RNAi技术沉默A549细胞中FOXM1基因,检测FOXM1及增殖凋亡相关分子表达变化.结果 TST增加A549细胞对肺癌靶向药物AG1478的敏感性,其IC50值由（4.35±0.45） μmol/L降至（0.73±0.05） μmol/L（t=11.02,P＜0.05）;TST抑制FOXM1及下游c-Myc、Cyclin B1、Bel-2分子的表达,上调P21、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达的同时,呈时间及剂量依赖性诱导Caspase-3分子活化;沉默FOXM1后其下游分子c-Myc、Cyclin B1、Bcl-2、P21及Cleaved PARP的表达改变同TST作用后相似,细胞中Cleaved Caspase-3的荧光表达明显增多.结论 TST介导的FOXM1下调可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,并增加其对AG1478的药物敏感性.

劳伦链霉菌的诱变育种和发酵研究

劳伦链霉菌 (S.laurentii) ATCC312 5 5是含硫多肽类抗生素硫链丝菌肽 (Tsn)的产生菌。为提高Tsn产量 ,本研究采用 UV和 NTG对劳伦链霉菌野生型进行诱变 ,筛选抗 Cu2 + 、抗氯霉素或磷霉素超敏的菌株 ,经平皿初筛 ,摇瓶复筛 ,获得两株生产能力高于母株的菌株 ,即 UFOM30 2、UCL30 10。其 Tsn产量较野生菌株提高 5 8%和 38%。又经种龄、接种量、通风量、补料等发酵条件的探索 ,突变株 UFOM30 2最终 Tsn的产量可达 190 0 μg/ ml左右 ,比野生型活力提高一倍 。

介导含硫多肽类抗生素耐药的23S rRNA甲基转移酶NHR的生化功能

目的研究23S rRNA甲基转移酶-硫链丝菌肽抗药性RNA甲基转移酶(thiostrepton-resistance-RNA methyltransferase,TSR)和23S rRNA甲基转移酶-那西肽抗药性RNA甲基转移酶(nosiheptide-resistance-RNA methyltransferase,NHR)的生化功能,探讨细菌对含硫多肽类抗生素产生耐药性的分子机制。方法构建克隆,体外表达并纯化TSR和NHR蛋白;利用T7聚合酶体外转录系统体外转录生成23S rRNA底物片段;构建RNA甲基转移酶活性的体外检测体系,在14C-SAM存在的情况下,利用液体闪烁计数仪测定相应底物RNA被甲基化的程度;通过Gel shift方法观察RNA底物与TSR或NHR蛋白的体外相互结合作用。结果得到体外表达的纯化TSR、NHR蛋白及RNA底物;TSR蛋白和NHR蛋白均能将RNA底物甲基化,且NHR甲基转移酶的活性更强;TSR和NHR蛋白与RNA底物均有结合,结合强度均随蛋白浓度增加而增强。结论 TSR和NHR蛋白都能将23S rRNA的特异位点1067A甲基化,并能诱导细菌的抗生素耐药性。

下调FoxM1表达对人喉癌Hep-2细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨下调Fox M1表达对人喉癌Hep-2细胞顺铂敏感性的影响及其可能机制。方法分别选用Fox M1 siRNA以及Fox M1特异性抑制剂(硫链丝菌肽)下调Hep-2细胞Fox M1表达。实时定量PCR、Western blot检测siRNA或硫链丝菌肽处理细胞后Fox M1 mRNA、蛋白表达量;MTT法检测下调Fox M1表达后Hep-2细胞的顺铂敏感性;流式细胞术检测下调Fox M1表达后顺铂诱导的凋亡率变化;实时定量PCR、Western blot检测顺铂作用于Fox M1下调组及对照组细胞,其Fox M1 mRNA、蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达变化。结果 siRNA及硫链丝菌肽均能下调Fox M1表达(P<0.05);两种方式均能降低顺铂作用下细胞存活率以及IC50[NC组顺铂IC50=(2.609±0.102)μg/m L,干扰组IC50=(0.771±0.058)μg/m L,P<0.05;对照组顺铂IC50=(2.142±0.198)μg/m L,抑制剂组IC50=(0.773±0.063)μg/m L,P<0.05],siRNA法处理后NC组、干扰组、NC+顺铂组、干扰+顺铂组凋亡率依次为(4.197±0.273)%、(12.553±0.183)%、(37.465±4.305)%、(82.373±7.214)%,干扰+顺铂组凋亡率显著升高(P<0.05);抑制剂处理后对照组、抑制剂组、顺铂组、抑制剂+顺铂组凋亡率依次为(2.343±0.194)%、(10.127±0.479)%、(35.075±1.995)%、(62.843±1.824)%,抑制剂+顺铂组凋亡率显著升高(P<0.05);下调Fox M1表达,凋亡抑制蛋白Bcl-2下调,促凋亡蛋白Bax表达上调(P<0.05)。结论下调Fox M1表达可提高Hep-2细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与凋亡相关蛋白Bcl-2下调、Bax上调相关。