硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物的合成工艺研究及其应用评价

目的：探究硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物的最优合成工艺,并对其进行应用评价。方法：以硬脂胺和异硫氰基荧光素为原料,通过偶合反应合成得到脂质材料硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物,利用薄层色谱法监测反应过程;通过核磁共振对嫁接产物进行结构确证,并以溶剂、时间、温度以及投料比为考察因素,以产率为指标,得到最优合成工艺。并将合成的硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物用于标记脂质纳米粒,以结扎肠循环模型考察纳米粒在小肠的吸收分布情况对其进行应用评价。结果：当反应溶剂为无水乙醇,硬脂胺和异硫氰基荧光素的反应摩尔比为2∶1,60℃搅拌反应48 h后异硫氰基荧光素与硬脂胺反应最完全,产率较高,可达（72.0±3.9）%,并能较准确地评价其标记的纳米粒在肠绒毛吸收分布情况。结论：优化后合成处方工艺反应完全,得率高;方法操作简单,重复性好;合成的硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物可用于直观评价纳米粒的体内外情况。

2′,7′-二氯-5(6)-异硫氰基荧光素的合成和表征

异硫氰酸荧光素(FITC)是一种重要的荧光探针。以4-硝基邻苯二甲酸和4-氯间苯二酚为原料,通过缩合、还原和异硫氰酸化制备了2′,7′-二氯-5(6)-异硫氰基荧光素,总收率达34.78%。产物结构经过了红外光谱、核磁共振谱和质谱的确证。产物荧光性能经荧光光度计测定,结果表明其荧光性能优于FITC。

固体脂质纳米粒在上皮单层细胞上的转运机制

目的:探讨固体脂质纳米粒(SLN)在犬肾上皮单层细胞(MDCK)上的转运机制。方法:以硬脂胺-异硫氰基荧光素为标记物,以单硬脂酸甘油酯为脂质材料,用溶剂扩散法制备荧光标记SLN,考察各因素对SLN跨MDCK单层转运的影响。结果:当SLN脂质浓度从50 mg.L-1增加到400 mg.L-1,表观渗透系数Papp值从最高点的56.1×10-6 cm.s-1逐渐下降并维持在20×10-6 cm.s-1左右,同时SLN从单层细胞顶侧向基底侧的转运能力基本高于相反方向。pH的降低和无荧光空白SLN的加入,使Papp减小了30%～50%;而低温及秋水仙素的干扰更使Papp降低至对照的30%。结论:SLN在MDCK细胞单层上的跨膜渗透并不是单一的主动或被动模式,而是细胞内吞的主动转运和细胞层脂质通道被动扩散相结合,顶侧向基底侧转运时主动方式占主导,相反方向时被动方式占主导。

阿德福韦酯固体脂质纳米粒体外抗病毒药效研究

目的研究阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)经固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticle,SLN)转运后的体外抗乙肝病毒药效。方法采用溶剂扩散法制备包载阿德福韦酯的固体脂质纳米粒(ADV-SLN),以紫外分光光度法测定药物包封率和载药量;以硬脂胺-异硫氰基荧光素标记SLN,通过荧光倒置显微镜观察HBVDNA转染人肝癌细胞HepG2.2.15对SLN的经时摄取情况;采用酶免疫测定试剂盒测定HbsAg,HBeAg指标,采用实时定量PCR试剂盒测定HBVDNA指标。结果ADV-SLN药物包封率为(16.72±2.81)%,载药量为(3.86±0.42)%。SLN可被HepG2.2.15有效摄取并具一定的时间依赖性。与游离药物相比,ADV经SLN转运后,对HepG2.2.15表达的HbsAg,HbeAg,HBVDNA的抑制作用均有明显增强。结论阿德福韦酯经SLN转运后,药物疗效增强,在抗乙肝病毒靶向治疗中体现出良好的应用前景。