LPO碘化蛋白质和多肽方法及其应用

ＬＰＯ酶促放射性碘标记物的比放射性高、定位性好、能最大限度的保持标记物的生物学和免疫学活性，是一种理想的蛋白质和多肽的标记技术。本文就ＬＰＯ法对蛋白质和多肽射性碘化标记原理、ＬＰＯ制备和性质、碘化反应和特点以及方法的应用进行了综述。

液相色谱/质谱法分离鉴定碘化酪蛋白水解产物中的碘化氨基酸

用WatersSymmetryShieldTM RP18柱 ,乙腈 (B ,含 0 .1%甲酸 )和水 (A ,含 0 .1%甲酸 )为流动相 ,0 .8mL min ,线性洗脱 (B从 10 %到 5 0 %) 4 0min ,液质联用 (LC MS) ,电喷雾电离源 (ESI+,SIR方式 ) ,对碘化酪蛋白水解物中的一碘酪氨酸 (MIT)、二碘酪氨酸 (DIT)、二碘甲腺原氨酸 (T2 )、三碘甲腺原氨酸 (T3 ,rT3 )和四碘甲腺原氨酸 (T4)进行了分离确证。同时测定了T3 、rT3 和T4的含量。

甜菜碱、碘化酪蛋白对产蛋鸡的促产蛋作用及其机理探讨

选用３００日龄的罗曼蛋鸡１０２４羽，随机分４组（每组４个重复，每一重复６４羽），对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮上分别添加８００ｍｇ／ｋｇ甜菜碱、７０ｍｇ／ｋｇ碘化酪蛋白和８００ｍｇ／ｋｇ甜菜碱＋７０ｍｇ／ｋｇ碘化酪蛋白，为期８０天，研究甜菜碱和碘化酪蛋白促产蛋效果及作用机理。结果显示：甜菜碱组产蛋率提高１２．８４％（Ｐ＜０．０１），料蛋比降低１１．２０％。碘化酪蛋白组产蛋率提高１０．５６％（Ｐ＜０．０５），料蛋比降低８％（Ｐ＜０．０５）。甜菜碱＋碘化酪蛋白组效果最佳，产蛋率提高１３．３３％（Ｐ＜０．０１），料蛋比降低１０．４％，二者对促产蛋具有协同作用；甜菜碱和碘化酪蛋白均降低血清尿酸含量（Ｐ＜０．０５），提高血清Ｔ３、Ｔ４含量（Ｐ＜０．０１）；碘化酪蛋白降低血清Ｃａ２＋，Ｐ浓度（Ｐ＜０．０１），提高碱性磷酸酶活力（Ｐ＜０．０５），降低破蛋率（Ｐ＜０．０１）；甜菜碱和碘化酪蛋白均提高了血清脂肪酶活性（Ｐ＜０．０１），降低血清甘油三脂和胆固醇含量（Ｐ＜０．０１），对降低腹脂碘化酪蛋白优于甜菜碱，而对降低肝脏脂肪甜菜碱优于碘化酪蛋白；碘化酪蛋白显著提高了血清中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活力，具有保护生物膜?

氢氧化钡水解HPLC法测定碘化酪蛋白中甲状腺素的含量

建立了碘化酪蛋白中甲状腺素 (T4)的氢氧化钡水解HPLC测定方法。实验发现 ,每毫升碘化酪蛋白溶液加入0.5～1.0g的八水合氢氧化钡 ,110℃水解8～12h ,控制用硫酸沉淀钡离子后的pH12～13,碘化酪蛋白释放的甲状腺素达到相对最高稳定得率。使用WatersSymmetryShieldTMRP18色谱柱 (5μm ,3.9mm×150mm) ,乙腈 (B ,0.1 %的甲酸 )和水 (A ,0.1%的甲酸 )为流动相 ,0.8mL·min -1的流速 ,B从10 %到50 %线性洗脱40min ,240nm的紫外吸收波长 ,能使碘化酪蛋白水解液中甲状腺素得到完全分离并定量测定。方法在考察的T4 质量浓度范围内 (0.5～25mg·L-1)线性良好 ,r>0.99 ,检出限可达0.2mg·g-1,实验条件下测定的商品碘化酪蛋白中T4含量为1.0 %

L-肉碱和碘化酪蛋白对淡水白鲳生长的影响

以初始体重为13.67±2.38 g的淡水白鲳为试验对象,按照U6(66)均匀试验设计,在淡水白鲳基础饲料中分别添加0.50.100,150,200,250 mg/kg L-肉碱和0.50,100,150,200.250 mg/kg的碘化酪蛋白。经过50 d的生长试验。结果表明:添加200 mg/kg的L-肉碱+100 mg/kg的碘化酪蛋白时,试验组中淡水白鲳的特定生长率最大,为2.44％/d,蛋白效率最高,为2.39％,其肥满度最大,为3.98％,鱼体蛋白质含量最高,为14.30％。肝体指数最低,为1.05％。综合各方面考虑,试验中L-肉碱和碘化酪蛋白的适宜添加水平为:L-肉碱:200 mg/kg碘化酪蛋白:100mg/kg。

碘化酪蛋白对产蛋鸡脂肪代谢的影响

30 0日龄罗曼蛋鸡 76 8只 ,随机分为 2组 (每组设 4个重复 ,每个重复 96只 ) ,在自由采食、饮水和光照1 6 h的条件下 ,分别饲喂添加 0 (对照组 )、50 mg/kg碘化酪蛋白 (试验组 )的玉米 -豆粕型日粮 1 3周。结果表明 ,与对照组相比 ,试验组蛋鸡腹脂重、腹脂率、肝脏重、肝脏相对重、肝脂率分别下降了 2 5.71 % ( P<0 .0 1 )、2 4 .4 0 % ( P<0 .0 1 )、1 1 .4 6 % ( P<0 .0 5)、8.90 % ( P<0 .0 5)、1 5.53% ( P<0 .0 5) ;血清三碘甲状腺原氨酸( T3 )和甲状腺素 ( T4)水平分别升高了 2 9.37% ( P<0 .0 1 )和 56 .2 5% ( P<0 .0 1 ) ;血清脂肪酶活性和游离脂肪酸含量分别提高了 35.2 8% ( P<0 .0 5)和 32 .37% ( P <0 .0 5) ,而甘油三酯含量下降了 2 2 .38% ( P<0 .0 5) ;腹脂中激素敏感脂肪酶 ( HSL )活性和肝脏、腹脂中环腺苷酸 ( c AMP)含量分别升高了 4 8.54% ( P<0 .0 1 )、2 6 .95% ( P<0 .0 5)和 34 .34 % ( P<0 .0 5)。结果提示 ,碘化酪蛋白能降低产蛋后期蛋鸡腹脂和肝脏中脂肪的含量。

短期使用碘化酪蛋白对奶牛产量的影响

选择 2 0头泌乳期相近中国荷斯坦奶牛 ,随机分成 5组 ,每组 4头 ,对照组饲喂基础日粮 ,试验组在喂基础日粮的基础上添加 15 g/头·d碘化酪蛋白 ,为期 30d。结果表明 ,试验组牛产奶量比对照组平均升高 10 .73% (P <0 .0 5 ) ,牛奶密度变化不大。不论是逐渐撤去还是突然撤去饲料中的碘化酪蛋白 。

碘化酪蛋白对蛋鸡产蛋性能的影响及作用机理

选取 30 0日龄罗曼蛋鸡 768羽 ,随机分为 2组 (每组设 4个重复 ,每个重复 96羽 ) ,在自由采食、饮水和 16h光照条件下 ,分别饲喂添加 0 ,50mg/kg碘化酪蛋白的玉米 豆粕型饲粮 13周。结果表明 ,碘化酪蛋白使日均产蛋率和日采食量分别提高了 8.4 6% (P <0 .0 1)和 7.94 % (P <0 .0 5) ;蛋壳相对重和蛋壳厚度分别增加了 5.89% (P <0 .0 5)和 8.33% (P <0 .0 5) ;血清超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶 (AKP)活性和尿酸 (UA)、钙含量分别提高了 2 7.39% (P <0 .0 5) ,61 77% (P <0 0 1) ,9.2 5% (P <0 .0 5) ,9.15% (P >0 .0 5) ,血磷水平降低了 12 .39% (P >0 .0 5) ;血清三碘甲状腺原氨酸 (T3)、甲状腺素 (T4 )、促卵泡生成素 (FSH)、雌二醇 (E2 )和甲状旁腺素 (PTH)水平分别提高了2 9 37% (P <0 .0 1) ,56.2 5% (P <0 .0 1) ,38.59% (P <0 .0 5) ,2 2 .32 % (P <0 .0 5)和 2 0 .67% (P <0 0 5) ,而促黄体生成素 (LH)和孕酮 (P)水平均无明显改变 ;下丘脑、腺垂体中环腺苷酸 (cAMP)含量分别提高了 17 59% (P <0 .0 5)和 18.52 % (P <0 .0 5)。上述结果提示 :碘化酪蛋白能促进T3,T4 和FSH分泌 ,加强蛋白质和钙的代谢 ,从而提高了产蛋率 。

碘化酪蛋白多克隆抗体的制备

Four kinds of Iodinatedcasein was separated from industrial Iodinatedcasein with gel-chromatogram methods.these Iodinatedcaseins were used to immunize New Zealand rabbit.The anti-Iodinatedcasein-serum was obtained after three times injecting and the titers of antiserum was 32000.The special sensitivity of anti-serum was very good in the indirect ELISA motheds.

碘化酪蛋白对蛋品质的影响及机理探讨

取 300日龄罗曼蛋鸡 768只，随机分为 2组，分别饲喂添加 0和 50 mg/kg碘化酪蛋白的玉米—豆粕型饲粮 13周。结果，与对照组相比，试验组鸡的蛋壳厚度和蛋壳相对重分别增加了 8.33％和 5.89％；血清碱性磷酸酶活性升高了 61.7％；血清甲状旁腺素和钙含量分别提高了 20.67％和 9.15％。

哺乳期给母猪饲喂碘化酪蛋白对仔猪的影响

选用哺乳期杂交母猪 5 4头 ,随机分 4组 ,对照组饲喂基础饲粮 ,试验组在饲喂基础饲粮中添加 2 0 0mg/kg碘化酪蛋白 ,为期 31d ,研究哺乳期母猪饲喂碘化酪蛋白对仔猪的影响。试验结果显示 :初产、经产母猪的试验组仔猪分别与对照组相比 ,2 0日龄窝重分别提高 11.72 % (P <0 .0 5 ) ,6 .79% (P <0 .0 1) ,断奶窝重分别提高 2 .95 %和 18.84%(P <0 .0 1) ,哺乳期成活率分别提高 1.5 9%和 11.9% (P <0 .0 1)。

HPLC测定NaOH水解法碘化酪蛋白中MIT、DIT和T_4

建立了氢氧化钠水解法碘化酪蛋白中MIT、DIT和T4的高效液相色谱检测方法。在考察的浓度范围内(0.1～20μg/mL),MIT、DIT和T4均保持较好的线性(r>0.999);检出限分别为0.5ng(MIT)和0.25ng(DIT,T4);定量限分别为1.0ng(MIT)和0.5ng(DIT,T4)。碘化酪蛋白经4mol/L的氢氧化钠溶液110℃水解,水解时间在16～32h,MIT、DIT和T4得率基本保持稳定。定量测定结果和水解稳定性试验显示,MIT和DIT较T4有显著的高含量和高稳定性,更适合用作监测碘化酪蛋白的标识物。

短期使用碘化酪蛋白对奶牛奶产量的影响

选择２０头泌乳期相近的荷斯坦奶牛，随机分成５组，每组４头，对照组饲喂基础日粮，试验组在喂基础日粮的基础上添加１５ｇ／头·天碘化酪蛋白，为期３０天。结果表明，试验组牛产奶量比对照组平均升高１０．３７％（Ｐ＜０．０５），牛奶比重变化不大；不论是逐渐撤去还是突然撒去饲料中的碘化酪蛋白，都不能有效地阻止奶产量的迅速下降。

用T4抗体检测工业碘化酪蛋白的T4结构

应用T4ELISA检测方法测定碘化酪蛋白中的T4结构,同时用酪蛋白纯品做了对比,结果显示碘化酪蛋白中含有T4结构,此结构能与T4抗体发生特异性反应。

用T3抗体检测工业碘化酪蛋白的T3结构

应用T3 ELISA检测方法测定碘化酪蛋白中的T3结构,同时用酪蛋白纯品做了对比,结果显示碘化酪蛋白中含有T3结构,此结构能与T3抗体发生特异性反应。

配合饲料基质中碘化酪蛋白水解条件的优化

通过L27(313)正交试验对配合饲料基质中碘化酪蛋白(IC)水解条件进行了优化。研究表明:水解时间,饲料类型,水解温度与水解体积之间的互作效应是影响碘化酪氨酸得率的主要因素;经优化得配合.饲料基质中IC最佳水解条件为:温度100℃,水解体积15mL/g,水解时间15h;鱼配合饲料基质对碘化酪氨酸有极显著的降解作用。试验结果为碘化酪氨酸作标志物配合饲料中IC含量的监测提供了依据。

碘化酪蛋白及其检测方法研究进展

本文对酪蛋白的性状、合成方法、活性物质及其存在形式、水解碘化氨基酸组成、作为饲料添加剂的不利影响以及检测方法研究现状进行了综述。

碘化酪蛋白对蛋种鸡生产性能的影响

将 36 5日龄的尼克红父母代蛋种鸡 2 0 0羽 ,随机分成 4组 ,对照组饲喂基础日粮 ,试验 , , 组在基础日粮基础上分别添加 10 0 ,15 0和 2 0 0 mg/kg碘化酪蛋白 ,为期 6 0 d,研究碘化酪蛋白的促产蛋效果并探讨其机理。结果表明 ,试验 组效果最佳 ,产蛋率提高 11.12 % (P<0 .0 5 ) ,料蛋比降低 8.19% (P<0 .0 5 ) ,同时蛋壳厚度增加 8.5 7% (P<0 .0 5 )和蛋壳相对重增加 12 .13% (P<0 .0 5 ) ,破异常蛋率降低 6 7.2 0 % (P<0 .0 1)。孵化效果显示 ,饲料中添加碘化酪蛋白对种蛋的孵化效果无明显影响。